一種天南星的組培快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種天南星的組培快速繁殖方法。包括無菌外植體的獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等步驟。采用本發(fā)明所提供的成套技術(shù)方法對天南星進(jìn)行組織培養(yǎng)和微繁，解決了天南星生長局限性，繁殖率低等技術(shù)難題，達(dá)到了增值系數(shù)高，成活率高的要求?？梢詾樘炷闲堑墓I(yè)化生產(chǎn)提供一種周期短、繁殖率高的人工培育方法。
【專利說明】一種天南星的組培快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種天南星的組培快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]天南星屬天南星科，天南星屬，多年生草本植物，主要分布在四川、吉林、黑龍江，云南貴州、遼寧、河南等地，除新疆、內(nèi)蒙古其他大部分省區(qū)均有分布，屬于陰生植物，需光照強(qiáng)度弱，生于林下、灌叢或荒地、草坡的陰濕地。是我國重要的中藥材，主要功能主治咳嗽、眩暈、中風(fēng)、癲癇、破傷風(fēng)等疾病。天南星作為中國藥典上品藥物，目前在醫(yī)藥市場上發(fā)展前景廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種天南星的組培快速繁殖方法，由該方法所制備得到的天南星組培幼苗生長周期短，增值系數(shù)高，生根率高，成活率高，可以規(guī)?；倪M(jìn)行大田生產(chǎn)。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實現(xiàn)的:
一種天南星組培苗快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等，其主要步驟如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗潔精侵泡3分鐘，流水沖洗30分鐘，使用70%酒精處理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，切去切口，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，將誘導(dǎo)出來的天南星芽轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D (0.3mg/L)+KT (0.3mg/L)+GA3 (lmg/L)上進(jìn)行叢生芽增值培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為光期10小時，暗期14小時 ，光照強(qiáng)度lOOOlx，溫度23°C，濕度70-80%，將增值的叢生芽接A 3/4MS+NAA (0.5 mg/L) +6-BA (0.4mg/L)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件調(diào)整為光期14小時，暗期10小時，光照強(qiáng)度40001x。待組培苗生長大約5cm大小時，掀開封口膜，培養(yǎng)10天左右，將腐殖土與沙子以1:1的比例混勻，121°C高壓滅菌I h后，待用，將培養(yǎng)10天后的生根苗直接從瓶中取出，取出后用清水除去根部的培養(yǎng)基，栽培于滅過菌的土壤中，并遮蓋三層薄膜，用1/2 MS大量元素水澆灌，逐層揭開薄膜，直至幼苗能夠適應(yīng)外界環(huán)境。
[0005]采用本發(fā)明制備的天南星組培幼苗生產(chǎn)周期短、繁殖率高，增值系數(shù)8.79，生根率95%，成活率80%。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實施方式。
[0007]實施例1
一種天南星組培苗快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等，其主要步驟如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗潔精侵泡3分鐘，流水沖洗30分鐘，使用70%酒精處理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，切去切口，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，將誘導(dǎo)出來的天南星芽轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D (0.2mg/L)+KT (0.2mg/L)+GA3 (0.5mg/L)上進(jìn)行叢生芽增值培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光期10小時，暗期14小時，光照強(qiáng)度10001X，溫度23°C，濕度70-80%。將增值的叢生芽接入3/4MS+NAA (0.2 mg/L) +6-BA (0.2mg/L)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件調(diào)整為光期14小時，暗期10小時，光照強(qiáng)度40001X。待組培苗生長大約5cm大小時，掀開封口膜，培養(yǎng)10天左右，將腐殖土與沙子以1:1的比例混勻，121°C高壓滅菌I h后，待用。將培養(yǎng)10天后的生根苗直接從瓶中取出，取出后用清水除去根部的培養(yǎng)基，栽培于滅過菌的土壤中，并遮蓋三層薄膜，用1/2 MS大量元素水澆灌，逐層揭開薄膜，直至幼苗能夠適應(yīng)外界環(huán)境。增值系數(shù)7.63，生根率87%，成活率70%。
[0008]實施例2
一種天南星組培苗快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等，其主要步驟如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗潔精侵泡3分鐘，流水沖洗30分鐘，使用70%酒精處理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，切去切口，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，將誘導(dǎo)出來的天南星芽轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D (0.4mg/L)+KT (0.3mg/L)+GA3 (lmg/L)上進(jìn)行叢生芽增值培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光期10小時，暗期14小時，光照強(qiáng)度lOOOlx，溫度23°C，濕度70-80%，將增值的叢生芽接A 3/4MS+NAA (0.4 mg/L) +6-BA (0.4mg/L)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件調(diào)整為光期14小時，暗期10小時，光照強(qiáng)度40001x。待組培苗生長大約5cm大小時，掀開封口膜，培養(yǎng)10天左右，將腐殖土與沙子以1:1的比例混勻，121°C高壓滅菌I h后，待用。將培養(yǎng)10天后的生根苗直接從瓶中取出，取出后用清水除去根部的培養(yǎng)基。栽培于滅過菌的土壤中，并遮蓋三層薄膜，用1/2 MS大量元素水澆灌，逐層揭開薄膜，直至幼苗能夠適應(yīng)外界環(huán)境。增值系數(shù)7.61，生根率87%，成活率78%。
[0009]實施例3
一種天南星組培苗快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等，其主要步驟如`下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗潔精侵泡3分鐘，流水沖洗30分鐘，使用70%酒精處理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，切去切口，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，將誘導(dǎo)出來的天南星芽轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)+GA3 (1.5mg/L)上進(jìn)行叢生芽增值培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光期10小時，暗期14小時，光照強(qiáng)度lOOOlx，溫度23°C，濕度70-80%。將增值的叢生芽接入3/4MS+NAA (0.5 mg/L) +6-BA (0.6mg/L)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)。培養(yǎng)條件調(diào)整為光期14小時，暗期10小時，光照強(qiáng)度40001x。待組培苗生長大約5cm大小時，掀開封口膜，培養(yǎng)10天左右，將腐殖土與沙子以1:1的比例混勻，121°C高壓滅菌I h后，待用，將培養(yǎng)10天后的生根苗直接從瓶中取出，取出后用清水除去根部的培養(yǎng)基，栽培于滅過菌的土壤中，并遮蓋三層薄膜，用1/2 MS大量元素水澆灌，逐層揭開薄膜，直至幼苗能夠適應(yīng)外界環(huán)境。增值系數(shù)7.93，生根率90%，成活率72%。
[0010]實施例4
一種天南星組培苗快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等，其主要步驟如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗潔精侵泡3分鐘，流水沖洗30分鐘，使用70%酒精處理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，切去切口，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，將誘導(dǎo)出來的天南星芽轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D (0.3mg/L)+KT (0.4mg/L) +GA3 (1.5mg/L)上進(jìn)行叢生芽增值培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光期10小時，暗期14小時，光照強(qiáng)度10001X，溫度23°C，濕度70-80%，將增值的叢生芽接入3/4MS+NAA (0.4 mg/L) +6-BA (0.6mg/L)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件調(diào)整為光期14小時，暗期10小時，光照強(qiáng)度40001x，待組培苗生長大約5cm大小時，掀開封口膜，培養(yǎng)10天左右，將腐殖土與沙子以1:1的比例混勻，121°C高壓滅菌I h后，待用，將培養(yǎng)10天后的生根苗直接從瓶中取出，取出后用清水除去根部的培養(yǎng)基，栽培于滅過菌的土壤中，并遮蓋三層薄膜，用1/2 MS大量元素水澆灌，逐層揭開薄膜，直至幼苗能夠適應(yīng)外界環(huán)境。增值系數(shù)7.74，生根率89%，成活率74%。
[0011]實施例5
一種天南星組培苗快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增值培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等，其主要步驟如下:取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗潔精侵泡3分鐘，流水沖洗30分鐘，使用70%酒精處理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，切去切口，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中MS+NAA (0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)，將誘導(dǎo)出來的天南星芽轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D (0.4mg/L)+KT (0.3mg/L)+GA3 (1.5mg/L)上進(jìn)行叢生芽增值培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光期10小時，暗期14小時，光照強(qiáng)度lOOOlx，溫度23°C，濕度70-80%。將增值的叢生芽接入3/4MS+NAA (0.5 mg/L) +6-BA (0.4mg/L)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件調(diào)整為光期14小時，暗期10小時，光照強(qiáng)度40001X，待組培苗生長大約5cm大小時，掀開封口膜，培養(yǎng)10天左右，將腐殖土與沙子以1:1的比例混勻，121°C高壓滅菌I h后，待用。將培養(yǎng)10天后的生根苗直接從瓶中取出，取出后用清水除去根部的培養(yǎng)基。栽培于滅過菌的土壤中，并遮蓋三層薄膜，用1/2 MS大量元素水澆灌，逐層揭開薄膜，直至幼苗能夠適應(yīng)外界環(huán)境。增值系數(shù)8.24，生根率91%，`成活率76%。
【權(quán)利要求】
1.一種天南星的組培快速繁殖方法，其特征在于: (1)外植體的處理:采用常規(guī)的組織培養(yǎng)方法對天南星的芽進(jìn)行消毒處理； (2)誘導(dǎo)培養(yǎng):使用MS+NAA(0.4mg/L)+KT (0.4mg/L)作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將無菌的芽接種于上述培養(yǎng)基中； (3)增值培養(yǎng):步驟2中誘導(dǎo)的天南星芽轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D(0.2-0.4mg/L) +KT(0.2-0.4mg/L) +GA3 (0.5-1.5mg/L)上進(jìn)行叢生芽增值培養(yǎng)； (4)生根誘導(dǎo):將增值的叢生芽接入3/4MS+NAA(0.2-0.5)+6_BA (0.2-0.6mg/L)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)； (5)煉苗移栽到大田進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天南星的組培快速繁殖方法，其特征在于:外植體的滅菌方法為取天南星的芽，用毛刷去除污垢，加入洗潔精侵泡3分鐘，流水沖洗30分鐘，使用70%酒精處理30s，0.2%的升汞消毒lOmin，無菌水沖洗5遍，切去切口，接種于培養(yǎng)基中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天南星的組培快速繁殖方法，其特征在于:誘導(dǎo)增值的培養(yǎng)條件為光期10小時，暗期14小時，光照強(qiáng)度lOOOlx，溫度23°C，濕度70-80%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天南星的組培快速繁殖方法，其特征在于:步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)中，天南星芽容易產(chǎn)生褐化現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中附加維生素C和活性炭。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天南星的組培快速繁殖方法，其特征在于:步驟(3)中設(shè)置了不同濃度的GA3促進(jìn) 叢生芽的生長，GA3能促進(jìn)小植株莖節(jié)伸長。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天南星的組培快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中生根誘導(dǎo)需要較強(qiáng)的光照強(qiáng)度，培養(yǎng)條件調(diào)整為光期14小時，暗期10小時，光照強(qiáng)度40001x。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天南星的組培快速繁殖方法，其特征在于:煉苗移栽采用下述過程:在無菌培養(yǎng)室內(nèi)，待組培苗生長大約5cm大小時，掀開封口膜，培養(yǎng)10天左右，將腐殖土與沙子以1:1的比例混勻，121°C高壓滅菌I h后，待用，將培養(yǎng)10天后的生根苗直接從瓶中取出，取出后用清水除去根部的培養(yǎng)基，栽培于滅過菌的土壤中，并遮蓋三層薄膜，用1/2 MS大量元素水澆灌，逐層揭開薄膜，直至幼苗能夠適應(yīng)外界環(huán)境。
【文檔編號】A01H4/00GK103444537SQ201310410868
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月11日
【發(fā)明者】蘇劉花 申請人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司