一種景天科植物種子的無(wú)菌萌發(fā)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種景天科植物種子的無(wú)菌萌發(fā)方法，包括播種種子無(wú)菌萌發(fā)和生根培養(yǎng)的步驟。本發(fā)明的方法首次使景天科植物種子無(wú)菌萌發(fā)并培養(yǎng)成植株，在短時(shí)間內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)景天科植物種子大量高效萌發(fā)，生成根系再移栽至土壤后可快速生長(zhǎng)，在短期內(nèi)獲得商品化植株。
【專利說(shuō)明】一種景天科植物種子的無(wú)菌萌發(fā)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及景天科植物，具體涉及一種景天科植物種子的無(wú)菌萌發(fā)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]景天科植物是一類分布廣泛，具有較高觀賞和藥用價(jià)值的多肉植物。景天科植物是雙子葉植物，約有1600種，分布于世界各地，草本或亞灌木，通常為肉質(zhì)狀。葉互生、對(duì)生或輪生，單生，多數(shù)無(wú)柄，全緣，有鋸齒、淺裂或羽狀裂，無(wú)托葉。果實(shí)為瞢莢果，膜質(zhì)或毛質(zhì)，常為殘存之膜質(zhì)花瓣所包被，開裂；種子小，碟狀，常有肉質(zhì)胚乳。全世界約25屬，I千余種，原產(chǎn)非洲、美洲和歐洲溫帶地區(qū)。
[0003]景天科植物在中國(guó)有10屬約240余種，另有多種引進(jìn)作為觀賞花卉。景天科植物體肥厚肉質(zhì)，多培育供觀賞。如伽藍(lán)菜屬、落地生根屬、青鎖龍屬、紫景天屬、景天屬等。瓦松屬、紅景天屬、紫景天屬和景天屬的某些種供藥用，某些種有抗病毒的性能。本科植物為多年生肉質(zhì)草本，夏秋季開花，花型較小。表皮有臘質(zhì)粉，氣孔下陷，可減少蒸騰，是典型的旱生植物。景天科植物在國(guó)內(nèi)多作為藥用植物進(jìn)行栽培利用。
[0004]景天科植物中含有生物堿、谷留醇、黃酮類、景天庚糖、果糖、蔗糖和有機(jī)酸等藥用成分(衣艷君，費(fèi)菜的利用價(jià)值及栽培.特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物，2000，3 (4):38)。這些藥物成分通過(guò)防止血管硬化、降血脂、擴(kuò)張腦血管，改善冠狀動(dòng)脈循環(huán)等途徑，達(dá)到降血壓、防中風(fēng)、防心臟病的效果。中醫(yī)論著認(rèn)為，費(fèi)菜有活血化淤、益氣強(qiáng)心和寧心平肝、清熱涼血的功能，并有減低苯丙胺的毒性和擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈的作用，外用可消腫止血。珠芽景天(Sedumbulbirerum)中K含量298.94 μ g/g(鄭艷.安徽景天屬(Sedum)植物葉表皮研究.植物研究，1999，19 (3):292-297)，有助于預(yù)防和治療高血壓。龍新憲等首次發(fā)現(xiàn)東南景天(Sedumalfredii Hance)是一種Zn超積累植物，它對(duì)土壤中高含量的鋅有很強(qiáng)的忍耐、吸收和積累能力，這為探明植物超積累Zn的機(jī)理和Zn污染土壤的植物修復(fù)提供了一種新的種質(zhì)資源(龍新憲等.四種景天屬植物對(duì)鋅吸收和積累差異的研究.植物學(xué)報(bào):英文版，2002，
44(2):152—157 ;楊肖娥等.南景天(Sedum alfredii Hance)--種新的鋅超積累植物，
科學(xué)通報(bào)，2002，47 (13):1003—1006)。
[0005]景天科植物的經(jīng)濟(jì)價(jià)值主要體現(xiàn)在兩個(gè)方面:一為觀賞價(jià)值，景天科植物具有耐旱、耐寒、耐貧瘠、少病蟲害、低養(yǎng)護(hù)、粗放管理等特點(diǎn)，可節(jié)水、節(jié)能、節(jié)材、節(jié)力，是創(chuàng)建節(jié)約型園林和城市綠化不可缺少的植物種類之一。其植株相對(duì)低矮，整齊一致，色彩豐富，生長(zhǎng)期較長(zhǎng)，在園林綠化中可布置花壇、花鏡，做鑲邊植物或組成大型圖案，或成片栽植，或點(diǎn)綴石景園等，也可做切花或盆栽供室內(nèi)外觀賞，同時(shí)還是屋頂綠化的良好材料。二為藥用價(jià)值，三七、大花紅景天等景天科植物早已作為傳統(tǒng)中藥材廣泛使用，隨著科技手段的不斷進(jìn)步，越來(lái)越多的景天科植物的藥用價(jià)值也被發(fā)掘。如三種景天科植物佛甲草，垂盆草和凹葉景天中的黃酮提取物被發(fā)現(xiàn)可用于阻止肝癌細(xì)胞的擴(kuò)散(陳雨潔等，景天屬三種植物藥不同提取部位及總黃酮抗腫瘤作用研究，2011，中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)，20 (2):89-92)。綜上所述，對(duì)景天科植物進(jìn)行系統(tǒng)而全面的開發(fā)勢(shì)必為城市發(fā)展和人民健康做出不小的貢獻(xiàn)。
[0006]由于景天科植物具有較高的觀賞和藥用價(jià)值，國(guó)內(nèi)外對(duì)景天科植物的需求與日俱增，新品種的選育是當(dāng)前景天科植物發(fā)展的一個(gè)重要局限。通常景天科植物的繁殖方式以無(wú)性繁殖為主，主要包括分株，莖或葉插的方法。然而該方法直接取材于成體植株，完全保有了母本性狀，無(wú)法出現(xiàn)新的性狀和品種，性狀極易退化。對(duì)景天植物的生理特性研究和園藝特性的發(fā)掘利用等眾多方面造成很大的限制。目前已有報(bào)道關(guān)于組織培養(yǎng)技術(shù)在景天科植物中的運(yùn)用，但多以葉片，莖段等幼嫩組織為材料，方法類似與無(wú)性繁殖，很難為優(yōu)良性狀的選撥提供參考(秦彬彬等，四季青景天組培與快繁研究，安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40 (4)，1964-2009 ;李鶯和王朝，景天三七的組織培養(yǎng)和植株再生，西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2010，12，109-112)。中國(guó)景天屬植物資源較為豐富，但大多數(shù)還處于野生狀態(tài)，僅有少數(shù)幾種有人工馴化栽培。
[0007]為提高景天科植物觀賞與經(jīng)濟(jì)價(jià)值，得到集各種優(yōu)良性狀為一身的優(yōu)秀品種，首先要提高它的有性繁殖能力，便于帶有不同性狀的植物以異株授粉的形式將彼此的優(yōu)良遺傳性狀加以整合，便于在下一代個(gè)體中篩選。而景天科植物果實(shí)細(xì)小，種子收集困難，價(jià)格昂貴，傳統(tǒng)土壤播種方法萌發(fā)率低，幼苗存活率低，很難在較短時(shí)間內(nèi)獲得一定數(shù)量的優(yōu)良性狀育種材料，因此建立一種高效快速且不受季節(jié)限制的景天科植物播種方法成為形勢(shì)所需。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種新型的景天科植物種子的無(wú)菌萌發(fā)方法及景天科植物繁殖方法，可快速大量繁殖，方法重復(fù)性好，且周期短。
[0009]本發(fā)明的第一方面，提供一種景天科植物種子的無(wú)菌萌發(fā)方法，所述方法包括步驟:
[0010](a)將所述種子進(jìn)行無(wú)菌萌發(fā)獲得無(wú)菌苗；和
[0011](b)將所述步驟a)獲得的無(wú)菌苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到生根苗。
[0012]在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括對(duì)所述種子進(jìn)行消毒的步驟。
[0013]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，將所述種子置于含l-lOmg/LGAjP0.1-lmg/LBA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
[0014]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，將所述種子置于含2_8mg/LGAdP0.2-0.8mg/LBA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，將所述種子置于含4-6mg/LGA3和0.4-0.6mg/LBA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，培養(yǎng)2-3天后種子開始萌發(fā)，5_7天大量種子萌發(fā)，10-15天種子萌發(fā)結(jié)束，發(fā)芽率為95-99%。
[0017]在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)中，所述生根培養(yǎng)是指在含0.1-lmg/L芐氨基腺嘌呤和l-10mg/L赤霉素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0018]在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)中，所述生根培養(yǎng)是指在含0.3-8mg/L芐氨基腺嘌呤和2-7mg/L赤霉素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0019]在另一優(yōu)選例中,所述步驟b)中,8-12天自然生根。
[0020]在另一優(yōu)選例中，所述景天科植物為紅爪、木樨、廣寒宮、山地玫瑰、黑蓮、東云、仙女杯或月影。
[0021]本發(fā)明中，種子包括各種種子，人為改變或天然來(lái)源的種子，人為改變的種子包括導(dǎo)入外源基因的、內(nèi)源性基因被改變的如敲除、抑制、拮抗、增強(qiáng)。在另一優(yōu)選例中，所述種子為非轉(zhuǎn)基因種子、轉(zhuǎn)基因種子或內(nèi)源性基因被改變的種子。在另一優(yōu)選例中，所述非轉(zhuǎn)基因種子是指不含轉(zhuǎn)入外源基因的天然來(lái)源的種子。
[0022]本發(fā)明的第二方面，提供一種景天科植物的繁殖方法，包括:
[0023](a)將所述種子進(jìn)行無(wú)菌萌發(fā)獲得無(wú)菌苗；
[0024](b)將所述步驟a)獲得的無(wú)菌苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到生根苗；和
[0025](C)對(duì)所述步驟b)獲得的生根苗進(jìn)行培養(yǎng)，生根獲得植株。
[0026]在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括對(duì)所述種子進(jìn)行消毒的步驟。
[0027]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，將所述種子置于含l-10mg/L GA3和0.l_lmg/LBA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
[0028]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，將所述種子置于含2_8mg/L GA3和0.2-0.8mg/L BA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
[0029]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，將所述種子置于含4_6mg/L GA3和0.4_0.6mg/L BA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
[0030]在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中，培養(yǎng)2-3天后種子開始萌發(fā)，5_7天大量種子萌發(fā)，10-15天種子萌發(fā)結(jié)束，發(fā)芽率為95-99%。
[0031]在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)中，所述生根培養(yǎng)是指在含0.1-lmg/L芐氨基腺嘌呤和l-10mg/L赤霉素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0032]在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)中，所述生根培養(yǎng)是指在含0.3-8mg/L芐氨基腺嘌呤和2-7mg/L赤霉素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0033]在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)中，8-12天自然生根。
[0034]在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括將步驟c)獲得的植株移植入土壤中培養(yǎng)的步驟。
[0035]在另一優(yōu)選例中，所述步驟c)中，于25±2°C培養(yǎng)所述生根苗。
[0036]在另一優(yōu)選例中，所述步驟c)中，將所述生根苗移栽至擬南芥用無(wú)菌土中培養(yǎng)。
[0037]在另一優(yōu)選例中，所述景天科植物為紅爪、木樨、廣寒宮、山地玫瑰、黑蓮、東云、仙女杯或月影。
[0038]在另一優(yōu)選例中，所述種子為非轉(zhuǎn)基因種子、轉(zhuǎn)基因種子或內(nèi)源性基因被改變的種子。
[0039]在另一優(yōu)選例中，所述非轉(zhuǎn)基因種子是指不含轉(zhuǎn)入外源基因的天然來(lái)源的種子。
[0040]本發(fā)明首次建立了景天科植物種子離體萌發(fā)方法，與傳統(tǒng)發(fā)芽方法相比，出芽時(shí)間縮短，發(fā)芽率大幅提高，小苗移栽到土壤中后發(fā)育良好，成苗健壯。
[0041]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0042]圖1示出了本發(fā)明植物離體萌發(fā)過(guò)程圖，其中，A無(wú)菌萌發(fā)15天后的木樨(左)和紅爪(右)，bar:2mm ；B為離體生根的紅爪，bar:2mm ；C為移栽存活的紅爪小苗，bar:6mm ；D土壤中生長(zhǎng)6個(gè)月的紅爪成株，bar:10mm。

【具體實(shí)施方式】
[0043]本申請(qǐng)的發(fā)明人為增強(qiáng)對(duì)景天科植物的品種性狀的改良運(yùn)用，經(jīng)過(guò)廣泛而深入地研究，利用植物組織離體培養(yǎng)技術(shù)，首次建立了景天科植物種子離體萌發(fā)方法，與傳統(tǒng)發(fā)芽方法相比，出芽時(shí)間縮短，發(fā)芽率大幅提高，小苗移栽到土壤中后發(fā)育良好，成苗健壯。這也是首次以景天科種子為材料建立高效離體萌發(fā)體系，為今后綜合利用景天科植物種質(zhì)資源，選拔優(yōu)質(zhì)景天科植物品種奠定良好基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上，完成了本發(fā)明。
[0044]術(shù)語(yǔ)
[0045]MS培養(yǎng)基是本領(lǐng)域目前使用最普遍的培養(yǎng)基,Murashige和Skoog于1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的，其特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組織培養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基(Murashige and SkoogA revised medium for rapid growth and b1 assays with tobacco tissue cultures.Phys1l Plant, 1962.15(3):473.)。除非另有說(shuō)明，采用本領(lǐng)域已知的配方配制MS培養(yǎng)基或MS固體培養(yǎng)基即可。
[0046]1/2MS基本培養(yǎng)基是指將MS培養(yǎng)基中大量元素質(zhì)量減半。大量元素是指硝酸鉀ΚΝ03、硝酸銨NH4NO3、磷酸二氫鉀ΚΗ2Ρ04、硫酸鎂MgSO4.7H20和氯化鈣CaCl2.2H20等五種化合物。
[0047]6-芐基腺嘌呤
[0048]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“6-芐基腺嘌呤”、“6-芐腺嘌呤”、“6-苯甲基腺嘌呤”、“6-BA”、“芐基腺嘌呤”、“BA”等均可以與互換使用。
[0049]6-芐基腺嘌呤是一種廣譜性植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，可促進(jìn)植物細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制植物葉綠素、核酸、蛋白質(zhì)的分解，提高氨基酸的含量，延緩葉片衰老，將氨基酸、生長(zhǎng)素、無(wú)機(jī)鹽等向處理部位調(diào)運(yùn)等多種效能，廣泛用在農(nóng)業(yè)、果樹和園藝作物的從發(fā)芽到收獲的各個(gè)階段。
[0050]本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以使用常規(guī)方法獲得6-芐基腺嘌呤，如市場(chǎng)購(gòu)買或用常規(guī)方法制取。
[0051]赤霉素
[0052]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“赤霉素”可以與“GA”、“GA/互換使用。
[0053]赤霉素是一類廣泛存在的植物激素，化學(xué)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，屬于二萜類酸，由四環(huán)骨架衍生而得。赤霉素都含有赤霉素烷骨架。在高等植物中赤霉素的最近前體一般認(rèn)為是貝殼杉烯。赤霉素的基本結(jié)構(gòu)是赤霉素烷，有4個(gè)環(huán)。在赤霉素烷上，由于雙鍵、羥基數(shù)目和位置不同，形成了各種赤霉素，已知的赤霉素類至少有38種。不同的赤霉素生物活性不同，赤霉酸(GA3)的活性最高?；钚愿叩幕衔锉仨氂幸粋€(gè)赤霉環(huán)系統(tǒng)(環(huán)AB⑶)，在C-7上有羧基，在A環(huán)上有一個(gè)內(nèi)酯環(huán)。
[0054]赤霉素目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，如提高葡萄產(chǎn)量，或在雜交水稻制種中調(diào)節(jié)花期以使父母本花期相遇等；對(duì)水稻、棉花、蔬菜、瓜果、綠肥等有顯著的增產(chǎn)效果。
[0055]本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以使用常規(guī)方法獲得各種赤霉素，如市場(chǎng)購(gòu)買或用常規(guī)方法制取。一種常規(guī)制取赤霉素的方法為用甲醇提取。不同的赤霉素可以用各種色譜分析技術(shù)分開。
[0056]本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說(shuō)明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說(shuō)明書中所揭示的各個(gè)特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說(shuō)明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。
[0057]本發(fā)明的有益之處在于:
[0058](I)本發(fā)明首次使景天科植物種子無(wú)菌萌發(fā)并培養(yǎng)成植株。
[0059](2)本發(fā)明的方法可實(shí)現(xiàn)景天科植物種子大量高效萌發(fā)，并生成根系，所獲得的無(wú)菌苗既可作為景天科植物種苗，又為對(duì)景天科植物進(jìn)行遺傳改良提供了良好材料；
[0060](3)本發(fā)明的方法出芽時(shí)間縮短，發(fā)芽率大幅提高。
[0061](4)本發(fā)明的方法重復(fù)性好，均能獲得景天科植物的無(wú)菌萌發(fā)苗，經(jīng)誘導(dǎo)生根后，均可在移栽至土壤后快速生長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)在短期內(nèi)獲得商品化植株的目的。
[0062]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如 Sambrook 等人，分子克隆:實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。
[0063]除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0064]實(shí)施例1
[0065](I)培養(yǎng)基準(zhǔn)備
[0066]配制植物MS固體培養(yǎng)基，加入GA3 (赤霉素，終濃度為5mg/L)和BA (芐氨基腺嘌呤，終濃度為0.5mg/L)，調(diào)節(jié)PH值至5.8，高溫高壓滅菌，倒入9cm平板中備用。
[0067](2)種子消毒
[0068]選取三種景天科植物廣寒宮，紅爪和木樨的種子(市場(chǎng)購(gòu)得)，將雜質(zhì)從種子中剔除。
[0069]將種子裝入1.5ml EP管中，加入0.01%_0.05%微量高錳酸鉀溶液(淡紫色)浸泡I小時(shí)，漂洗干凈后移入1.5ml EP管中加入10%次氯酸鈉溶液處理8分鐘，期間用旋渦振蕩儀將種子與溶液混合3-5次，置入超凈臺(tái)后將溶液吸出，采用無(wú)菌雙蒸水漂洗3-5次約5分鐘。
[0070](3)播種
[0071]在超凈臺(tái)中將種子小心鋪在疊有濾紙的MS固體培養(yǎng)基(含5mg/L GA3和0.5mg/L BA)上，置于25±1度人工培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，其中光照20001exl4h，黑暗10h。定期觀察，發(fā)現(xiàn)2-3天后三種種子均開始萌發(fā)，5-7天大量種子萌發(fā)，10-15天種子萌發(fā)結(jié)束，發(fā)芽率為95-99%。圖1中A左面示出木樨種子無(wú)菌萌發(fā)15天后的狀態(tài)，右面示出紅爪種子無(wú)菌萌發(fā)15天后的狀態(tài),均萌發(fā)出小苗。
[0072](4)生根
[0073]將步驟(3)萌發(fā)所得的三種小苗各自轉(zhuǎn)移至含0.5mg/L BA和5mg/L GA3的MS培養(yǎng)基中，10天左右均自然生根。其中離體生根的紅爪如圖1中B所示。
[0074](5)移栽
[0075]將步驟(4)所得已生根的三種小苗移栽至常規(guī)擬南芥用無(wú)菌土中，在25±1度人工溫室中，使其自然生長(zhǎng)，三種小苗均逐漸長(zhǎng)大，約40天后生長(zhǎng)為小型植株。其中，移栽存活的紅爪小苗如圖1中C所示。
[0076](6)成株及后續(xù)栽培管理
[0077]將步驟(5)所得三種小型植株移植到室外土壤，使其在自然條件下繼續(xù)生長(zhǎng)，每月用1/2MS基本培養(yǎng)基施肥一次，施肥方法為根施。6個(gè)月后，三種植株均生長(zhǎng)為可以直接投放市場(chǎng)的商品化大苗。其中，土壤中生長(zhǎng)6個(gè)月的紅爪成株如圖1中D所示。
[0078]經(jīng)三批無(wú)菌萌發(fā)實(shí)驗(yàn)，均能獲得景天科植物的無(wú)菌萌發(fā)苗，且是在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)大量高效萌發(fā)，所獲得的無(wú)菌苗既可作為景天科植物種苗，又為對(duì)景天科植物進(jìn)行遺傳改良提供了良好材料。經(jīng)誘導(dǎo)生根后，均可在移栽至土壤后快速生長(zhǎng)，累計(jì)獲得景天科植物廣寒宮無(wú)菌萌發(fā)植株55株，紅爪無(wú)菌萌發(fā)植株62株，木樨?zé)o菌萌發(fā)植株70株，與自然萌發(fā)的植株一致性高并節(jié)省了大量生長(zhǎng)時(shí)間。具體的，采用常規(guī)的方法，廣寒宮成為商品化大苗需18個(gè)月左右，紅爪成為商品化大苗需14個(gè)月左右，木樨成為商品化大苗需16個(gè)月左右，而本實(shí)施例獲得商品化廣寒宮、紅爪、木樨大苗均僅需約8-9個(gè)月，大大縮短了培育所需時(shí)間。
[0079]實(shí)施例2
[0080]本實(shí)施例的步驟與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于用景天科山地玫瑰(Greenovia aurea(ex El Hierro), Greenovia aurea(ex Gran Canaria), Greenoviaaurea (ex Tenerife), 11? (Echeveria eurychlamys, Peru), (Echeveria agavoides)Echeveria olivacea, Guienagati 種子，仙女杯(Dudleya lanceolata)和月影(Echeveriahalbingeri, San Joaquin-v sanchez-me joradae, Ahualulco)等植物種子進(jìn)行無(wú)菌萌發(fā)，結(jié)果表明在同樣條件下這些景天科代表性觀賞植物的無(wú)菌萌發(fā)率也達(dá)到百分之九十九以上。經(jīng)生根、移栽后獲得小型植株。整個(gè)過(guò)程獲得商品化大苗均僅需約8-9個(gè)月。
[0081]在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種景天科植物種子的無(wú)菌萌發(fā)方法，其特征在于，所述方法包括步驟: (a)將所述種子進(jìn)行無(wú)菌萌發(fā)獲得無(wú)菌苗；和 (b)將所述步驟a)獲得的無(wú)菌苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到生根苗。 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括對(duì)所述種子進(jìn)行消毒的步驟。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟a)中，將所述種子置于含1-1Omg/L GA3和0.1-lmg/L BA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟b)中，所述生根培養(yǎng)是指在含0.1-lmg/L芐氨基腺嘌呤和l-10mg/L赤霉素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
4.一種景天科植物的繁殖方法，其特征在于，所述方法包括: (a)將所述種子進(jìn)行無(wú)菌萌發(fā)獲得無(wú)菌苗； (b)將所述步驟a)獲得的無(wú)菌苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到生根苗；和 (C)對(duì)所述步驟b)獲得的生根苗進(jìn)行培養(yǎng)，生根獲得植株。
5.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,將所述種子置于含l-lOmg/LGAjP0.1-1mg/LBA的MS固體培養(yǎng)基上，于25±2°C無(wú)菌培養(yǎng)，所述種子萌發(fā)獲得所述無(wú)菌苗。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟b)中，所述生根培養(yǎng)是指在含0.1-lmg/L芐氨基腺嘌呤和l-10mg/L赤霉素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
7.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將步驟c)獲得的植株移植入土壤中培養(yǎng)的步驟。
8.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟c)中，于25±2°C培養(yǎng)所述生根苗。
9.如權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述景天科植物為紅爪、木樨、廣寒宮、山地玫瑰、黑蓮、東云、仙女杯或月影。
10.如權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述種子為非轉(zhuǎn)基因種子、轉(zhuǎn)基因種子或內(nèi)源性基因被改變的種子。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104273027SQ201310278297
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2013年7月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月3日
【發(fā)明者】馬俐, 朱木蘭, 李勝 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院