專利名稱：垂盆草中垂盆草苷的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及垂盆草中垂盆草苷的提取純化方法。
背景技術(shù)：
垂盆草為景天科植物垂盆草、Sedwn sarmentosum Bunge)的新鮮或干燥全草，又名石指甲《四川中藥志》、半枝蓮《藥鏡》、鼠牙半支《百草鏡》等。收載于《中國藥典》2010年版一部，具有清利濕熱，解毒之功效。用于濕熱黃疸，小便不利，癰腫瘡瘍?！侗静菥V目拾遺》 謂其“消癰疔，便毒，黃疸，喉癬”?；瘜W研究表明，垂盆草主要含有蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、黃酮類、三萜類及垂盆草苷類。據(jù)有關(guān)文獻報道，垂盆草具有抑制炎性滲出，減少肝細胞損傷的作用，可使血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶降低，瞿世康等研究表明垂盆草苷可使小鼠胸腺內(nèi)胸腺細胞數(shù)明顯降低，小鼠溶血空斑試驗證明，它能抑制T細胞依賴抗原-SRBC的抗體形成細胞數(shù)， 還能抑制T細胞介導的移植物抗宿主反應(yīng)，實驗中還發(fā)現(xiàn)，垂盆草苷使外周血中白細胞數(shù)和中性粒細胞比例增高。邵成雷等經(jīng)對垂盆草各類成分進行藥理及臨床預試發(fā)現(xiàn)垂盆草總黃酮具有明顯的抑菌、抗炎、祛痰等作用，對急慢性咽炎及扁桃體炎具有較好的治療作用， 提示垂盆草在治療咽喉疾病方面具有良好的開發(fā)前景。目前臨床應(yīng)用有垂盆草片，垂盆草沖劑以及垂盆草的復方制劑等，用于治療急慢性肝炎。1979年方圣鼎等從垂盆草中分得一水溶性氰苷類成分垂盆草苷(2-氰基-4-0- β -D-葡萄糖反丁烯-2-醇)，并指出其為抗肝炎活性成分。諸國華等1999年以1，2，4- 丁三醇-1，2-丙縮酮為原料，首次完成了垂盆草苷的人工合成?，F(xiàn)有提取分離方法一般用乙醇回流提取，濃縮后用乙酸乙酯、正丁醇等萃取，提取物用硅膠柱層析及HPLC等方法分離，常用的系統(tǒng)溶劑有乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-丙酮、 氯仿-甲醇等。這些方法較為復雜，藥用有效成分利用率低，無法產(chǎn)業(yè)化。中國專利申請?zhí)?201010511372. 2公開了一種垂盆草苷的制備方法，該方法采用新鮮垂盆草，加水浸泡，壓榨并濾過，濾液加入活性炭脫色，濾過，取濾液，通過大孔吸附樹脂柱吸附，10-30%乙醇洗脫， 收集洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮干燥，加入甲醇溶解，濾過，取濾液，加入到硅膠柱層析柱上，以比例為1 1的甲醇-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，洗脫液按柱體積分份收集，合并洗脫液， 減壓濃縮并低溫干燥，得到垂盆草苷，該方法得率低，僅為0. 05%-0. 076%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供垂盆草中垂盆草苷的提取純化方法，該純化方法采用水溶性溶劑從垂盆草中提取純化垂盆草苷，不僅工藝簡單、提取率高，而且成本低、產(chǎn)品純度高， 易于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的
垂盆草中垂盆草苷的提取純化方法，其特征在于其步驟如下 1)提取將垂盆草藥材粉碎，裝入滲漉柱中，向滲漉柱中加入0. 5-1倍量的水溶性溶劑，50-70°C條件下浸泡30-45分鐘，保溫狀態(tài)下，進行滲漉操作，收集的同時連續(xù)補加提取溶劑，直至收集到的滲漉液體積為藥材體積的4-6倍量；
2)聚酰胺柱純化上述滲漉液濃縮后加入沉降劑沉降，靜置、離心，離心液上聚酰胺柱純化，10-50%乙醇或丙酮洗脫，洗脫流速為2-6BV/h，洗脫用量為3-4BV ；
3)氧化鋁除雜將上述洗脫液過氧化鋁柱，收集下柱液；
4)結(jié)晶將上述下柱液減壓回收乙醇，得粗品，再以乙醚-乙醇混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，過濾干燥后得到垂盆草苷。所述步驟1)中滲漉柱為單柱或多柱串聯(lián)。所述步驟1)中水溶性溶劑為水、乙醇、甲醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑。所述步驟2 )中所述沉降劑為ZTC- II澄清劑或CTS中藥澄清劑，加入量為
I-2. 5%οο所述步驟4)中所述乙醚-乙醇體積比為1-3:1。本發(fā)明中使用的滲漉柱可選單柱或多柱串聯(lián)，通過簡單處理回收后，可循環(huán)使用， 降低了能耗；采用澄清劑和氧化鋁柱除雜，提高了產(chǎn)品純度。
具體實施例方式為了更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下通過具體的實施例進一步詳細描述。實施例1
將垂盆草藥材粉碎成粗粉，過40目篩，稱取5kg裝入滲漉桶中，再向滲漉柱內(nèi)加入5L 的20%乙醇水溶液，在50°C條件下浸泡30min，保溫狀態(tài)下開啟滲漉柱出口閥，同時自滲漉柱頂部連續(xù)加入體積百分比為20%的乙醇水溶液，控制流速為lOml/min，直至收集到30L 滲漉提取液，減壓濃縮至無醇味，再加水至3L，攪拌均勻，攪拌下加入45mlZTC- II型中藥澄清劑，靜置，離心濾過液上聚酰胺柱，取2BV10%丙酮洗脫雜質(zhì)，再用50%丙酮洗脫有效成分， 洗脫流速為4BV/h，收集垂盆草苷流分，通過氧化鋁柱，收集下柱液，減壓濃縮，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(1 1)混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，反復結(jié)晶4次，過濾干燥得到垂盆草苷 12. 8g，經(jīng)HPLC法測定其含量為94. 8%。實施例2:
將垂盆草藥材粉碎成粗粉，過40目篩，稱取5kg裝入滲漉桶中，再向滲漉柱內(nèi)加入3L 的40%丙酮水溶液，在55°C條件下浸泡40min，保溫狀態(tài)下開啟滲漉柱出口閥，同時自滲漉柱頂部連續(xù)加入體積百分比為40%的丙酮水溶液，控制流速為15ml/min，直至收集到20L 滲漉提取液，減壓濃縮至無丙酮，再加水至5L，攪拌均勻，攪拌下加入20mlZTC- II型中藥澄清劑，靜置，離心濾過液上聚酰胺柱，取2BV15%丙酮洗脫雜質(zhì)，再用35%丙酮洗脫有效成分， 洗脫流速為2BV/h，收集垂盆草苷流分，通過氧化鋁柱，收集下柱液，減壓濃縮，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(3:1)混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，反復結(jié)晶3次，過濾干燥得到垂盆草苷 14. Og,經(jīng)HPLC法測定其含量為94. 0%。實施例3:
將垂盆草藥材粉碎成粗粉，過20目篩，稱取5kg裝入滲漉桶中，再向滲漉柱內(nèi)加入4L 的30%乙醇水溶液，在65°C條件下浸泡45min，保溫狀態(tài)下開啟滲漉柱出口閥，同時自滲漉柱頂部連續(xù)加入體積百分比為30%的乙醇水溶液，控制流速為lOml/min，直至收集到25L滲漉提取液，減壓濃縮至無醇味，再加水至4L，攪拌均勻，攪拌下加入55mlCTS中藥澄清劑，靜置，離心濾過液上聚酰胺柱，取1. 0BV10%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用50%乙醇洗脫有效成分，洗脫流速為6BV/h，收集垂盆草苷流分，通過氧化鋁柱，收集下柱液，減壓濃縮，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(1:1)混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，反復結(jié)晶3次，過濾干燥得到垂盆草苷13. 2g， 經(jīng)HPLC法測定其含量為93. 3%。實施例4:
將垂盆草藥材粉碎成粗粉，過40目篩，稱取IOkg裝入滲漉桶中，再向滲漉柱內(nèi)加入5L 水，在50°C條件下浸泡35min，保溫狀態(tài)下開啟滲漉柱出口閥，同時自滲漉柱頂部連續(xù)加入水，控制流速為lOml/min，直至收集到40L滲漉提取液，減壓濃縮至濃度為2g/ml，攪拌下加入52mlZTC- II型中藥澄清劑，靜置，離心濾過液上聚酰胺柱，取1. 5BV20%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用40%乙醇洗脫有效成分，洗脫流速為5BV/h，收集垂盆草苷流分，通過氧化鋁柱，收集下柱液，減壓濃縮，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(2 1)混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，反復結(jié)晶5次， 過濾干燥得到垂盆草苷27. Sg,經(jīng)HPLC法測定其含量為94. 1%。實施例5:
將垂盆草藥材粉碎成粗粉，過20目篩，稱取IOkg裝入滲漉桶中，再向滲漉柱內(nèi)加入7L 的30%丙酮水溶液，在70°C條件下浸泡40min，保溫狀態(tài)下開啟滲漉柱出口閥，同時自滲漉柱頂部連續(xù)加入體積百分比為30%丙酮水溶液，控制流速為15ml/min，直至收集到60L滲漉提取液，減壓濃縮至無丙酮，再加水至8L，攪拌均勻，攪拌下加入90mlCTS中藥澄清劑，靜置，離心濾過液上聚酰胺柱，取2BV20%丙酮洗脫雜質(zhì)，再用50%丙酮洗脫有效成分，洗脫流速為4BV/h，收集垂盆草苷流分，通過氧化鋁柱，收集下柱液，減壓濃縮，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(2:1)混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，反復結(jié)晶2次，過濾干燥得到垂盆草苷26. 7g，經(jīng) HPLC法測定其含量為92. 6%。實施例6:
將垂盆草藥材粉碎成粗粉，過50目篩，稱取20kg裝入滲漉桶中，再向滲漉柱內(nèi)加入20L 的50%乙醇水溶液，在60°C條件下浸泡45min，保溫狀態(tài)下開啟滲漉柱出口閥，同時自滲漉柱頂部連續(xù)加入體積百分比為50%的乙醇水溶液，控制流速為15ml/min，直至收集到IOOL 滲漉提取液，減壓濃縮至無醇味，再加水至15L，攪拌均勻，攪拌下加入250mlCTS中藥澄清劑，靜置，離心濾過液上聚酰胺柱，取2. 5BV10%乙醇洗脫雜質(zhì)，再用40%乙醇洗脫有效成分， 洗脫流速為3BV/h，收集垂盆草苷流分，通過氧化鋁柱，收集下柱液，減壓濃縮，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(1 1)混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，反復結(jié)晶5次，過濾干燥得到垂盆草苷 56. 6g，經(jīng)HPLC法測定其含量為95. 3%。實施例7:
將垂盆草藥材粉碎成粗粉，過80目篩，稱取20kg裝入滲漉桶中，再向滲漉柱內(nèi)加入12L 的10%甲醇水溶液，在55°C條件下浸泡35min，保溫狀態(tài)下開啟滲漉柱出口閥，同時自滲漉柱頂部連續(xù)加入體積百分比為10%甲醇水溶液，控制流速為13ml/min，直至收集到80L滲漉提取液，減壓濃縮至無醇味，再加水至12L，攪拌均勻，攪拌下加入160mlCTS中藥澄清劑，靜置，離心濾過液上聚酰胺柱，取2BV去離子水洗脫雜質(zhì)，再用30%乙醇洗脫有效成分，洗脫流速為5BV/h，收集垂盆草苷流分，通過氧化鋁柱，收集下柱液，減壓濃縮，得粗品，再用少量乙醚-乙醇(3:1)混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，反復結(jié)晶4次，過濾干燥得到垂盆草苷55. 7g，經(jīng) HPLC法測定其含量為93. 4%。
權(quán)利要求
1.垂盆草中垂盆草苷的提取純化方法，其特征在于其步驟如下1)提取將垂盆草藥材粉碎，裝入滲漉柱中，向滲漉柱中加入0.5-1倍量的水溶性溶劑，50-70°C條件下浸泡30-45分鐘，保溫狀態(tài)下，進行滲漉操作，收集的同時連續(xù)補加提取溶劑，直至收集到的滲漉液體積為藥材體積的4-6倍量；2)聚酰胺柱純化上述滲漉液濃縮后加入沉降劑沉降，靜置、離心，離心液上聚酰胺柱純化，10-50%乙醇或丙酮洗脫，洗脫流速為2-6BV/h，洗脫用量為3-4BV ；3)氧化鋁除雜將上述洗脫液過氧化鋁柱，收集下柱液；4)結(jié)晶將上述下柱液減壓回收乙醇，得粗品，再以乙醚-乙醇混合溶劑溶解，低溫結(jié)晶，過濾干燥后得到垂盆草苷。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中滲漉柱為單柱或多柱串聯(lián)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中水溶性溶劑為水、乙醇、甲醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟2)中所述沉降劑為ZTC-II澄清劑或CTS中藥澄清劑，加入量為1-2. 5%。。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4)中所述乙醚-乙醇體積比為 1-3:1。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種垂盆草中垂盆草苷的提取純化方法，方法采用水溶性溶劑提取—沉降劑沉降—聚酰胺柱純化—氧化鋁柱除雜—結(jié)晶的方法獲得垂盆草苷，含量大于90%，較現(xiàn)有方法簡便、有機溶劑用量少、產(chǎn)品純度高。本發(fā)明適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H15/10GK102329345SQ20111021003
公開日2012年1月25日 申請日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司