專利名稱：對(duì)柑桔病原菌有抑制作用的植物提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種一種對(duì)柑桔病原菌有抑制作用的植物提取物及其制備方法。本發(fā)明屬于植物提取物及其抗菌活性領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
柑桔青霉病和綠霉病分別是由意大利青霉菌(Penicillium italium)和綠霉菌(Penicillium digitaum)引起的植物病害。據(jù)統(tǒng)計(jì)，柑桔果實(shí)在忙運(yùn)過程中因爛果造成的損失以柑桔青霉病和綠霉病為主，占90%以上。目前，生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用的柑桔病害的防治措施是采用化學(xué)殺菌劑如噻菌靈、抑霉唑、鄰苯基苯酚鈉(SOPP)等，這些藥劑作為柑橘防腐劑使用已有多年歷史。然而，由于人們對(duì)化學(xué)藥物的不合理使用和藥物本身固有的缺點(diǎn)，致使化學(xué)農(nóng)藥在使用中產(chǎn)生了環(huán)境污染、人畜中毒、農(nóng)藥殘留等問題，隨著人們生活質(zhì)量的提高和環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，公眾對(duì)限制化學(xué)殺菌劑的呼聲越來(lái)越高。為了尋求有可能代替化學(xué)殺菌劑的新方法，人們把目光轉(zhuǎn)向了安全、穩(wěn)定、無(wú)污染、高效的天然藥物。方才君(1989)研究發(fā)現(xiàn)，香葉油、香茅油對(duì)柑桔青霉菌有明顯的抑制作用，次為留蘭香油，香莆油的抑菌力最弱。供試精油對(duì)柑桔綠霉的抑菌活性仍以香葉油和香茅油最強(qiáng)，留蘭香油較前兩者低得多，香蕾油則更低。席珣芳等(1993)研究發(fā)現(xiàn)，大蒜、洋蔥、生姜的汁液對(duì)柑桔青、綠霉菌均有抑制和殺滅作用，其中大蒜韻抑菌作用性能最強(qiáng)，洋蔥次之，生姜?jiǎng)t較差。徐齊云等(2006)研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉乙醇浸提物、石油醚萃取物、三氯甲烷萃取物和水萃取物4種提取物對(duì)柑桔青霉病菌均有一定抑制效果，但只有石油醚萃取物對(duì)柑桔青霉病菌抑菌效果好。丘麒等(2008)研究發(fā)現(xiàn)，油茶籽、海芋、山菅蘭、水茄、上海葉冬青、桃花心木、側(cè)柏、深山含笑等的提取物對(duì)柑橘青綠霉菌有一定的抑菌活性。胡軍華等(2010)研究發(fā)現(xiàn)，川芎、偵彳柏、蒼耳和五加皮的提取物對(duì)柑桔青霉菌的抑制作用較強(qiáng)，抑菌率均在97%以上；五加皮和側(cè)柏的提取物對(duì)柑桔綠霉菌抑制作用較強(qiáng)。曾榮等(2010)研究發(fā)現(xiàn)，11種植物提取液對(duì)意大利青霉顯現(xiàn)出不同程度的抑制效果，其中以鳳仙透骨草、廣藿香、青蒿、水菖蒲等植物的提取液抑制作用較為明顯。另外，曹婷婷等(2008)研究了枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ZK菌株發(fā)酵產(chǎn)物捷安肽素對(duì)柑桔青綠霉菌的抑制作用，證明捷安肽素在PDA平板上對(duì)柑桔綠霉菌比青霉菌對(duì)捷安肽素敏感。上述研究從植物提取物、微生物發(fā)酵產(chǎn)物等方面研究了抗柑桔青綠霉菌的活性，也發(fā)現(xiàn)了具有一定抗菌活性的提取物，但是提取物的抗菌效果并不理想，并且所用提取材料多是經(jīng)濟(jì)或藥用物種。能否找到一種既具有良好抗菌活性又更為廉價(jià)的材料，進(jìn)而獲取更具有實(shí)用價(jià)值的抗菌活性物質(zhì)以及提取方法？ 基于以上背景，發(fā)明人以通常作為廢棄物的核桃青皮為原料，開展了具有抑制柑橘青、綠霉菌提取物的提取方法和抑菌作用的研究。以下為本發(fā)明的具體內(nèi)容
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種對(duì)柑桔病原菌有抑制作用的植物提取物及其制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明包括以下技術(shù)方案:本發(fā)明首先提供一種核桃青皮提取物的提取方法，該方法包括:將核桃青皮置于50°C烘箱內(nèi)烘干至恒重并粉碎，過90目篩，稱取核桃青皮粉以無(wú)水甲醇為提取溶劑，料液比為1:15，65°C下回流提取3次，每次2h，合并提取液減壓濃縮成浸膏狀至恒重。然后，用丙酮-水(1:1)溶解完全，依次用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，經(jīng)減壓濃縮后獲得甲醇提取物各萃取相提取物。本發(fā)明還提供另一種核桃青皮提取物的提取方法，該方法包括:核桃青皮置于50°C烘箱內(nèi)烘干至恒重并粉碎，過90目篩，稱取核桃青皮粉以石油醚為提取溶劑，料液比為1:15，65°C下回流提取3次，每次2h，合并提取液減壓濃縮成浸膏狀至恒重。其中，上述提取方法中提到的料液比1:15為質(zhì)量/體積比(w/v)，即I克材料用15毫升溶劑；上述方法中提到的丙酮-水(I:1)為體積/體積比(V/V)，即I毫升丙酮與I毫升水混合。其中，上述提取方法中所得石油醚提取物即為具有抗菌活性作用的提取物。上述第二種方法直接由石油醚抽提濃縮，省去了甲醇抽提、溶劑萃取等步驟，簡(jiǎn)單易行。其次，本發(fā)明還提供一種核桃青皮提取物，該提取物為按照上述兩種提取方法獲得的石油醚提取物分別經(jīng)減壓濃縮·獲得的石油醚膏狀物。另外，本發(fā)明還提供上述核桃青皮提取物在作為抗菌劑中的用途。優(yōu)選地，所述用途為將上述核桃青皮提取物作為抗菌劑的有效成分用于由意大利青霉菌(Penicillium italium)和/或綠霉菌(Penicillium digitaum)引起的植物病害防治廣品上。本發(fā)明的抗菌活性采用抑菌圈測(cè)定法(牛津杯法)，陽(yáng)性對(duì)照藥物為兩性霉素B。


圖1是核桃青皮石油醚提取物對(duì)青霉菌抑制能力圖；其中Am B是陽(yáng)性對(duì)照，A1-A5是濃度在100-3.13mg/mL時(shí)的抑菌效果。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)地說明本發(fā)明。實(shí)施方案為便于更好的理解本發(fā)明，但并非對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1:核桃青皮于50°C烘箱內(nèi)烘干至恒重并粉碎，過90目篩，稱取核桃青皮粉以無(wú)水甲醇為提取溶劑，料液比為1:15，65°C下回流提取3次，每次2h，合并提取液減壓濃縮成浸膏狀至恒重。然后，用丙酮-水(1:1)溶解完全，依次用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，經(jīng)減壓濃縮后獲得甲醇提取物各萃取相提取物。采用牛津杯法測(cè)定樣品抑菌活性。稱取一定量不同萃取物樣品，用適當(dāng)溶劑配成50mg/mL,取25 μ L培養(yǎng)好的細(xì)菌懸液與20mL冷卻至50°C的培養(yǎng)基充分混勻，倒入9cm培養(yǎng)皿中制成帶菌的平板，帶菌平板含菌濃度約IO6個(gè)/mL。將直徑為0.8cm的牛津杯平放在帶菌平板上，加入待測(cè)樣品150 μ L，重復(fù)3次。置于25°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h (真菌)，用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑。用相應(yīng)溶劑作為空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在供試樣品質(zhì)量濃度為50mg/mL時(shí)，核桃青皮甲醇提取物各萃取相對(duì)幾種有害真菌的抑制效果見表I和圖1。表1核桃青皮甲醇提取物各萃取相抑制能力
權(quán)利要求
1.一種核桃青皮提取物的提取方法，該方法包括:將核桃青皮置于50°c烘箱內(nèi)烘干至恒重并粉碎，過90目篩，稱取核桃青皮粉以無(wú)水甲醇為提取溶劑，料液比為1:15，65°C下回流提取3次，每次2h，合并提取液減壓濃縮成浸膏狀至恒重。然后，用1:1的丙酮-水溶解完全，依次用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，經(jīng)減壓濃縮后獲得甲醇提取物各萃取相提取物； 其中，上述提取方法中提到的料液比1:15為質(zhì)量/體積比(《八)，即I克材料用15毫升溶劑；上述方法中提到的1:1的丙酮-水為體積/體積比(v/v)，即I毫升丙酮與I毫升水混合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核桃青皮提取物的提取方法，該方法包括:核桃青皮置于50°C烘箱內(nèi)烘干至恒重并粉碎，過90目篩，稱取核桃青皮粉以石油醚為提取溶劑，料液比為1:15，65°C下回流提取3次，每次2h，合并提取液減壓濃縮成浸膏狀至恒重； 其中，上述提取方法中提到的料液比1:15為質(zhì)量/體積比(w/v)，即I克材料用15毫升溶劑。
3.一種核桃青皮提取物，其特征在于，所述提取物為按照權(quán)利要求1或2的方法獲得的石油醚提取物經(jīng)減壓濃縮獲得的石油醚膏狀物。
4.權(quán)利要求3所述的核桃青皮提取物在作為抗菌劑中的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述用途為將上述核桃青皮提取物作為抗菌劑的有效成分用于由意大利青霉菌(Penicillium italium)和/或綠霉菌(Penicillium digitau m)引起的植物病害防治產(chǎn)品上。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從核桃青皮中提取對(duì)柑桔病原菌有抑制作用的提取物的制備方法及其在由該病原菌引起的植物病害防治上的用途。
文檔編號(hào)A01N65/08GK103222486SQ20131019539
公開日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2013年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月23日
發(fā)明者何開澤, 張衛(wèi)星, 蒲薔 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所