專利名稱：決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，具體涉及決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途。
背景技術(shù)：
草魚(Ctenopharyngodon idellus)屬鯉形目鯉科雅羅魚亞科草魚屬,俗稱有:_、油鯇、草鯇、白鯇、草根、混子、黑青魚等。草魚的味道鮮美，含有豐富的不飽和脂肪酸，對(duì)血液循環(huán)有利；還含有豐富的硒元素，經(jīng)常食用有抗衰老、養(yǎng)顏的功效，對(duì)腫瘤也有一定的防治作用。草魚與青魚、鰱魚、鳙魚并稱為我國淡水養(yǎng)殖的“四大家魚”，也是人們喜食的經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的一個(gè)品種。常規(guī)養(yǎng)殖中草魚的疾病種類繁多，如細(xì)菌性出血病、病毒性出血病、爛鰓病、腸炎病、赤皮病、草魚絳蟲病、小瓜蟲病等(單曉鸞，2005),而且同一池塘中、同一時(shí)段的并發(fā)癥或同一尾魚體上的并發(fā)癥也特別多，這給草魚的疾病防治工作帶來了很大的難度。在防治水生動(dòng)物疾病中，中草藥不但可以解決使用化學(xué)藥物造成的耐藥性和藥物殘留超標(biāo)問題，而且符合發(fā)展無公害水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，生產(chǎn)綠色水產(chǎn)品的疾病防治原則。在大規(guī)模和高密度人工養(yǎng)殖環(huán)境下，水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)病原的敏感性大大提高，易造成傳染病發(fā)生和流行。免疫增強(qiáng)劑可以增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)多種傳染性病原的非特異性免疫反應(yīng)，提高機(jī)體抗病力。魚類免疫學(xué)的研究也證實(shí)，魚類的免疫系統(tǒng)雖較低級(jí)，但與人類及哺乳動(dòng)物有相似之處。因此，人與哺乳動(dòng)物所用的中藥免疫增強(qiáng)劑大多數(shù)都適用于魚類。以鼠科動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)效果確切的中藥決明子蛋白質(zhì)為對(duì)象，開發(fā)新型植物源水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑有著廣闊的前景。

中藥決明子所含有的蛋白質(zhì)對(duì)大鼠有降血壓、降血脂、改善血液流變學(xué)的作用。決明子蛋白還有增強(qiáng)小鼠免疫功能的作用:能增加衰老模型小鼠免疫器官系數(shù)、降低其腦組織丙二醛(MDA)的含量、提高腦組織超氧化物岐化酶(SOD)水平和減少肝組織中脂褐素含量，降低腦組織單胺氧化酶含量等，體外促進(jìn)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的作用。而決明子蛋白對(duì)魚類養(yǎng)殖的生長促進(jìn)及非特異免疫功能的增強(qiáng)作用未見報(bào)道。SOD是機(jī)體清除氧自由基的重要抗氧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過氧化物分解的酶，而MDA是機(jī)體被自由基氧化后的產(chǎn)物。增加SOD和GSH-Px的活力，降低MDA含量，能減少機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生、預(yù)防機(jī)體組織的損傷，可提高魚類的非特異免疫功，促進(jìn)魚類健康生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途，決明子蛋白能夠促進(jìn)草魚生長，以及提高草魚部分非特異免疫功能。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途；所述的決明子蛋白由以下方法制備得到:
將決明子粉碎，加入KH2PO4-NaOH緩沖液，浸提4_8h ;然后離心，取上清液；往上清液中加入硫酸銨至飽和，然后離心，收集沉淀；將沉淀轉(zhuǎn)移至透析袋中，透析至透析液無色為止；最后將透析袋中的成分冷凍干燥，得到?jīng)Q明子蛋白；所述的KH2PO4-NaOH緩沖液，濃度優(yōu)選50mmol/L，pH值優(yōu)選8.0 ；所述的離心，優(yōu)選在3000r/min離心IOmin ；所述的決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途，是在草魚生長飼料中添加
1.2-2.0% (質(zhì)量比)的決明子蛋白。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑，能夠促進(jìn)草魚生長，以及提高草魚部分非特異免疫功能。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。

實(shí)施例(I)決明子蛋白添加飼料的制備決明子為豆科植物決明C.0btusifolialL.的干燥成熟種子,購自廣州二天堂石牌藥店。決明子經(jīng)粉碎后，加入50mmol/L (pH值8.0)的KH2PO4-NaOH提取緩沖液，攪拌提取6h左右，3000r/min離心IOmin,上清液保留；上清液在不斷攪拌下緩慢加入粉末狀硫酸銨至飽和，離心(條件同上)，收集硫酸銨沉淀的蛋白質(zhì)，將沉淀蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至透析袋，透析7d (平均每隔24h換一次水，至所換的水幾乎為無色，改用雙蒸水透析一次)，收集透析袋中的成分并冷凍干燥，即得決明子蛋白質(zhì)。在草魚飼料制粒過程中按1.2%。、1.6%。、2.0%。的質(zhì)量比在基礎(chǔ)飼料中加入決明子蛋白質(zhì)，制成添加決明子蛋白質(zhì)的詞料；所用的基礎(chǔ)飼料由以下質(zhì)量百分比的成分組成:菜柏30%、豆柏10%、棉柏20%、米糠20%、麩皮18%、多維(即復(fù)合維生素，廣州海因特生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào):粵飼預(yù)字(2008) 193061，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào):Q/HTS2_2011) 2%。( 2 )草魚試驗(yàn)分組及養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)用草魚(Ctenpharyngodon idelIus),購自廣東順德大良，初始質(zhì)量30.22±0.04g，共120尾。購回后置于水族箱中暫養(yǎng)21天后隨機(jī)分為對(duì)照組(喂食基礎(chǔ)飼料)、1%決明子組(將購買的決明子經(jīng)粉粹機(jī)粉粹，過160目篩，在基礎(chǔ)飼料制粒過程中以1%質(zhì)量比添加)和1.2%。、1.6 %。、2.0 %。的3個(gè)決明子蛋白組(喂食決明子蛋白添加詞料)。每組30尾，每組設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)平行10尾養(yǎng)殖于容量為0.1m3的水族箱內(nèi)。水族箱內(nèi)水體pH值為1.2-7.5，氨氮含量低于(λ 2mg/L,亞硝酸鹽含量低于0.05mg/L,水溫30.2-32.6°C。草魚飼喂過程中每日定時(shí)定量飼喂2次，投餌率為魚體重的2-4%，飽食投喂。投餌2h后吸取殘餌和糞便，每周換水I次。共養(yǎng)殖60d。(3)草魚生長性能指標(biāo)測定對(duì)飼喂60d的實(shí)驗(yàn)草魚稱重。增重率(％)=[(試驗(yàn)?zāi)┚?試驗(yàn)初均重)/試驗(yàn)初均重]X 100特定生長率(％/d) = (In試驗(yàn)?zāi)┚?1n試驗(yàn)初均重)/試驗(yàn)天數(shù)X 100
飼料系數(shù)=均攝食量/ (試驗(yàn)?zāi)┚?試驗(yàn)初均重)(4)血清及肝臟部分非特異免疫指標(biāo)檢測分別于飼喂草魚的第30d和第60d血清取樣，取樣前Id停止投餌。每個(gè)平行隨機(jī)取5尾魚，即每組取15尾魚。取血采用穿刺尾動(dòng)脈取血法，采集的血樣，置于4°C冰箱過夜，4000r/min離心lOmin，收集上層血清，保存在_20°C冰箱中備用。同時(shí)將魚解剖，取出肝臟，用生理鹽水清洗、濾紙吸干，稱重后保存在-20 V冰箱中備用。血清總超氧化物歧化酶(SOD)活力、肝臟丙二醛(MDA)含量、肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定:均按各自試劑盒方法進(jìn)行測定，所有試劑盒均為南京建成生物工程研究所市售產(chǎn)品(批號(hào)均為20130116)。(5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(X 士SD)表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。(6)決明子蛋白不同添加比例對(duì)草魚生長及部分非特異免疫功能的影響6.1添加1.2%。決明子蛋白飼料對(duì)生長及部分非特異免疫功能的影響以1.2%。決明子蛋白添加到草魚喂養(yǎng)的飼料中，對(duì)其生長性能指標(biāo)和部分非特異免疫功能進(jìn)行測定，結(jié)果見表I。與對(duì)照組或1%決明子組比較，添加1.2%。決明子蛋白的飼料喂養(yǎng)30d，可增加草魚的血清總SOD活力(P〈0.05)、降低其肝臟MDA含量(P〈0.01、P〈0.05)、增強(qiáng)其肝臟GSH-Px的活力(P〈0.0Ol);喂養(yǎng)60d，能增加草魚的增重率(P〈0.05)和特定生長率(P〈0.05)、降低飼料系數(shù)(P〈0.05)，可增加草魚的血清總SOD活力(P〈0.05)、降低其肝臟MDA含量(P〈0.05)。有促進(jìn)草魚生長和提高其部分非特異免疫功能的作用。

6.2添加1.6%。決明子蛋白飼料對(duì)草魚生長及部分非特異免疫功能的影響以1.6%。決明子蛋白添加到草魚喂養(yǎng)的飼料中，對(duì)其生長性能指標(biāo)和部分非特異免疫功能進(jìn)行測定，結(jié)果見表I。與對(duì)照組或1%決明子組比較，添加1.6%。決明子蛋白的飼料喂養(yǎng)30d，可增加草魚的血清總SOD活力(P〈0.05)、降低其肝臟MDA含量(P〈0.01、P〈0.05)、增強(qiáng)其肝臟GSH-Px的活力(P〈0.001);喂養(yǎng)60d，能增加草魚的增重率(P〈0.05)和特定生長率(P〈0.05)、降低飼料系數(shù)(P〈0.05)，可增加草魚的血清總SOD活力(P〈0.01、P〈0.05)、降低其肝臟MDA含量(P〈0.01、P〈0.05)。有促進(jìn)草魚生長和提高其部分非特異免疫功能的作用。6.3添加2.0%。決明子蛋白飼料對(duì)草魚生長及部分非特異免疫功能的影響以2.0%。決明子蛋白添加到草魚喂養(yǎng)的飼料中，對(duì)其生長性能指標(biāo)和部分非特異免疫功能進(jìn)行測定，結(jié)果見表I。與對(duì)照組或1%決明子組比較，添加2.0%。決明子蛋白的飼料喂養(yǎng)30d，可增加草魚的血清總SOD活力(P〈0.01)、降低其肝臟MDA含量(P〈0.01、P〈0.05)、增強(qiáng)其肝臟GSH-Px的活力(P〈0.01);喂養(yǎng)60d，能增加草魚的增重率(P〈0.01)和特定生長率(P〈0.01)、降低飼料系數(shù)(P〈0.01)，可增加草魚的血清總SOD活力(P〈0.01)、降低其肝臟MDA含量(P〈0.01、P〈0.05)。有促進(jìn)草魚生長和提高其部分非特異免疫功能的作用。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。表1.決明子蛋白對(duì)草魚生長的促進(jìn)作用( 土SD, n=15)
權(quán)利要求
1.決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途，其特征在于:所述的決明子蛋白由以下方法制備得到: 將決明子粉碎，加入KH2PO4-NaOH緩沖液，浸提4_8h ;然后離心，取上清液；往上清液中加入硫酸銨至飽和，然后離心，收集沉淀；將沉淀轉(zhuǎn)移至透析袋中，透析至透析液無色為止；最后將透析袋中的成分冷凍干燥，得到?jīng)Q明子蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途，其特征在于:所述的KH2PO4-NaOH緩沖液，濃度為50mmol/L，pH值為8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途，其特征在于:所述的離心，是在3000r/min離心l0min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途，其特征在于:是在草魚生長飼料中添加1.2-2.0%。(質(zhì)量比)的決明子蛋白。
全文摘要
本發(fā)明公開了決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑的用途，其是在草魚生長飼料中添加1.2-2.0‰(質(zhì)量比)的決明子蛋白；所述的決明子蛋白由以下方法制備得到將決明子粉碎，加入KH2PO4-NaOH緩沖液，浸提4-8h；然后離心，取上清液；往上清液中加入硫酸銨至飽和，然后離心，收集沉淀；將沉淀轉(zhuǎn)移至透析袋中，透析至透析液無色為止；最后將透析袋中的成分冷凍干燥，得到?jīng)Q明子蛋白。決明子蛋白作為草魚生長飼料添加劑，能夠促進(jìn)草魚生長，以及提高草魚部分非特異免疫功能。
文檔編號(hào)A23K1/18GK103211101SQ20131017535
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月13日
發(fā)明者李小梅, 石俊敏, 勞惠燕, 王蔚淼, 李續(xù)娥 申請(qǐng)人:廣州大學(xué), 華南師范大學(xué)