專利名稱：一種誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)的組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法。
背景技術(shù)：
煙草(AYcoiiaaa tabacum)是最早開展組織培養(yǎng)的模式植物之一,20世紀90年代戰(zhàn)淑敏(煙草葉組織培養(yǎng)直接獲得再生植株，萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報，1993，10(2):13Γ132)建立了采用葉片不經(jīng)過愈傷組織直接誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽、再誘導(dǎo)叢生芽生根的煙草組織快速培養(yǎng)方法，2003年施和平和黃群聲(煙草葉片組織培養(yǎng)及植株再生，亞熱帶植物科學(xué)，2003, 32(4):63)在煙草葉組織培養(yǎng)直接獲得再生植株中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面的根產(chǎn)生大量的白色根毛，發(fā)明人在利用抗病單株葉片培養(yǎng)進行再生植株時發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面的根產(chǎn)生大量白色根毛的類似現(xiàn)象。本領(lǐng)域內(nèi)，誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽生根是將叢生芽的莖栽入培養(yǎng)基的方式，但是，實際操作中發(fā)現(xiàn)這種誘導(dǎo)生根方式生根不整齊，生根時間較長，通常2廣26天左右，而且叢生芽的根上會粘有大量的培養(yǎng)基，移栽煅苗時需要洗根，以防止根所帶培養(yǎng)基繁殖微生物，影響根的生長，甚至引起爛根。為此，開發(fā)一種工藝簡化、成株速度快、培養(yǎng)周期短、生產(chǎn)成本低的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，對于組織培養(yǎng)的發(fā)展非常有利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種工藝簡化、成株速度快、培養(yǎng)周期短、生產(chǎn)成本低的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法。除另有說明外，本發(fā)明中所采用的百分數(shù)均為質(zhì)量百分數(shù)。

本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的，包括以下步驟:
Α、選擇叢生芽:選取生長均勻一致、苗高2.(Γ3.0cm煙草葉片的叢生芽剪下，去除底部葉片，保留頂部葉片和頂芽；
B、誘導(dǎo)生根:用培養(yǎng)瓶盛裝培養(yǎng)基，以頂部葉片接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的方式放置煙草葉片叢生芽，頂芽離培養(yǎng)基表面為0.5 1.0cm,在常規(guī)光照條件下恒溫培養(yǎng)12 14d,培養(yǎng)溫度為26 28°C，培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度為90%以上。本發(fā)明利用已馴化煙草葉片其吸收營養(yǎng)物質(zhì)、生長物質(zhì)極性運輸?shù)奶匦?，取其叢生芽作為誘導(dǎo)生根材料，采用倒置培養(yǎng)方式，實現(xiàn)煙草葉片叢生芽的快速生根。與常規(guī)的正向放置方式相比，提高了叢生芽生根的效率，縮短擴12天，節(jié)省了培養(yǎng)時間和培養(yǎng)空間，誘導(dǎo)所生根系不接觸培養(yǎng)基省去了煅苗時洗根操作，節(jié)省了勞力，具有廣泛的應(yīng)用前景。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限定，任何基于本發(fā)明的技術(shù)思路的等同替換，均落入本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，包括以下步驟:A、選擇叢生芽:選取生長均勻一致、苗高2.(Γ3.0cm煙草葉片的叢生芽剪下，去除底部葉片，保留頂部葉片和頂芽；
B、誘導(dǎo)生根:用培養(yǎng)瓶盛裝培養(yǎng)基，以頂部葉片接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的方式放置煙草葉片叢生芽，頂芽離培養(yǎng)基表面為0.5 1.0cm,在常規(guī)光照條件下恒溫培養(yǎng)12 14d,培養(yǎng)溫度為26 28°C，培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度為90%以上。所述的煙草葉片為已經(jīng)馴化了的煙草葉片，所述的馴化是葉片不經(jīng)過愈傷組織直接在葉片上分化為叢生芽。所述的煙草葉片叢生芽保留頂部葉片2 3片。所述的煙草葉片叢生芽是以頂部葉片直立或傾斜接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基。所述的煙草葉片叢生芽在誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基上的放置量為1(Γ30枝。所述的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為加入了吲哚丁酸(IBA)和蔗糖的MS培養(yǎng)基，吲哚丁酸的加入量為0.5^1.5mg/L，蔗糖的加入量為MS培養(yǎng)基的2 4%。作為優(yōu)選方式，所述的吲哚丁酸的加入量為1.0mg/L，蔗糖的加入量為MS培養(yǎng)基的3%。所述的培養(yǎng)瓶為蘭花培養(yǎng)瓶、罐頭瓶或三角瓶盛裝。所述的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基厚度為 1.0 2.0cm。本發(fā)明的工作原理:
本發(fā)明利用已馴化煙草葉片其吸收營養(yǎng)物質(zhì)、生長物質(zhì)極性運輸?shù)奶匦?，取其叢生芽作為誘導(dǎo)生根材料，采用倒置培養(yǎng)方式，實現(xiàn)煙草葉片叢生芽的快速生根。實施例1
選取生長均勻一致、苗高2.(Γ3.0cm煙草葉片的叢生芽剪下，去除底部葉片，保留2 3片頂部葉片和頂芽；所述的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為加入0.5mg/L吲哚丁酸和4%蔗糖的MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基由蘭花培養(yǎng)瓶盛裝，培養(yǎng)基厚度為1.0cm ;煙草葉片叢生芽頂部葉片直立接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，放置量為10枝，頂芽離培養(yǎng)基表面為0.5^1.0cm，在常規(guī)光照條件下恒溫培養(yǎng)12d，培養(yǎng)溫度為26°C，培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度為91%。實施例2
選取生長均勻一致、苗高2.(Γ3.0cm煙草葉片的叢生芽剪下，去除底部葉片，保留2 3片頂部葉片和頂芽；所述的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為加入1.5mg/L吲哚丁酸和2%蔗糖的MS培養(yǎng)基，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基由罐頭瓶，培養(yǎng)基厚度為2.0cm ;煙草葉片叢生芽頂部葉片傾斜接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，放置量為30枝，頂芽離培養(yǎng)基表面為0.5^1.0cm，在常規(guī)光照條件下恒溫培養(yǎng)14d，培養(yǎng)溫度為28°C，培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度為92%。實施例3
選取生長均勻一致、苗高2.(Γ3.0cm煙草葉片的叢生芽剪下，去除底部葉片，保留2 3片頂部葉片和頂芽；所述的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為加入1.0mg/L吲哚丁酸和3%蔗糖的MS培養(yǎng)基，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基由三角瓶盛裝，培養(yǎng)基厚度為1.5cm ;煙草葉片叢生芽頂部葉片直立和傾斜接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，放置量為20枝，頂芽離培養(yǎng)基表面為0.5^1.0cm，在常規(guī)光照條件下恒溫培養(yǎng)13d，培養(yǎng)溫度為27°C，培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度為94%。

實施例4
選擇了 30個煙草葉片叢生芽樣本，分別以正向放置方式和倒置培養(yǎng)方式培養(yǎng)，倒置培養(yǎng)方式按實施例廣3操作，對比兩種培養(yǎng)方式的生根率效果。培養(yǎng)12天后統(tǒng)計誘導(dǎo)叢生芽生根情況，結(jié)果見表I。表I不同放置方式誘導(dǎo)生根12天時叢生芽生根情況比較
權(quán)利要求
1.一種誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征在于包括以下步驟: A、選擇叢生芽:選取生長均勻一致、苗高2.(Γ3.0cm煙草葉片的叢生芽剪下，去除底部葉片，保留頂部葉片和頂芽； B、誘導(dǎo)生根:用培養(yǎng)瓶盛裝培養(yǎng)基，以頂部葉片接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的方式放置煙草葉片叢生芽，頂芽離培養(yǎng)基表面為0.5 1.0cm,在常規(guī)光照條件下恒溫培養(yǎng)12 14d,培養(yǎng)溫度為26 28°C，培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度為90%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的煙草葉片為已經(jīng)馴化了的煙草葉片，所述的馴化是葉片不經(jīng)過愈傷組織直接在葉片上分化為叢生芽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的煙草葉片叢生芽保留頂部葉片2 3片。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的煙草葉片叢生芽是以頂部 葉片直立或傾斜接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的煙草葉片叢生芽在誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基上的放置量為1(Γ30枝。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為加入了吲哚丁酸和蔗糖的MS培養(yǎng)基，吲哚丁酸的加入量為0.5^1.5mg/L,蔗糖的加入量為MS培養(yǎng)基的2 4%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的吲哚丁酸的加入量為1.0mg/L，蔗糖的加入量為MS培養(yǎng)基的3%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的培養(yǎng)瓶為蘭花培養(yǎng)瓶、罐頭瓶或三角瓶盛裝。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，其特征是:所述的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基厚度為1.(Γ2.0cm0
全文摘要
本發(fā)明公開了一種誘導(dǎo)煙草葉片叢生芽快速生根的方法，選取生長均勻一致、苗高2.0~3.0cm煙草葉片的叢生芽剪下，去除底部葉片，保留頂部葉片和頂芽；用培養(yǎng)瓶盛裝培養(yǎng)基，以頂部葉片接觸誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基的方式放置煙草葉片叢生芽，頂芽離培養(yǎng)基表面為0.5~1.0cm，在常規(guī)光照條件下恒溫培養(yǎng)12~14d，培養(yǎng)溫度為26~28℃，培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度為90%以上。本發(fā)明利用已馴化煙草葉片其吸收營養(yǎng)物質(zhì)、生長物質(zhì)極性運輸?shù)奶匦?，取其叢生芽作為誘導(dǎo)生根材料，采用倒置培養(yǎng)方式，實現(xiàn)煙草葉片叢生芽的快速生根。與常規(guī)正向放置方式相比，提高了叢生芽生根的效率，縮短9~12天，節(jié)省了培養(yǎng)時間和培養(yǎng)空間，誘導(dǎo)所生根系不接觸培養(yǎng)基省去了煅苗時洗根操作，節(jié)省了勞力，具有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號A01H4/00GK103168687SQ20131009416
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月22日
發(fā)明者陳學(xué)軍, 方敦煌, 李永平, 童治軍, 肖炳光, 高玉龍, 宋中邦 申請人:云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院