專利名稱：松針提取物用于抗植物病原菌的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術領域，具體來說是涉及松針提取物用于抗植物病原菌及采用松針提取物的抗植物病原菌的生物農(nóng)藥。
背景技術：
目前，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用的農(nóng)藥主要是化學農(nóng)藥，雖然能殺死農(nóng)作物上的有害病原菌，但施用過后的殘留物對人體依舊有極大的傷害，施用過化學農(nóng)藥的農(nóng)產(chǎn)品也常因農(nóng)藥殘留成分過高而被國內外銷售市場拒絕，造成很大一部分的農(nóng)產(chǎn)品滯銷。此外，部分化學農(nóng)藥常帶有劇毒，時常會造成人、畜農(nóng)藥中毒事故。因此，農(nóng)民迫切希望尋求一種防治植物病菌效果好，對人畜無害，且價格便宜的農(nóng)藥，以提高農(nóng)產(chǎn)品的安全性和環(huán)保性，并能降低生產(chǎn)成本。植物源農(nóng)藥具有在環(huán)境中生物降解快、對人畜及對非靶標生物毒性低、有害生物不易產(chǎn)生抗性、成本低、易得等特點，符合現(xiàn)代農(nóng)業(yè)環(huán)保、健康、持續(xù)發(fā)展的時代要求，具有極高的開發(fā)價值，越來越受到重視。目前已有大量研究者在進行生物農(nóng)藥的研發(fā)，聞雙婷開發(fā)出一種中草藥制成的生物農(nóng)藥，主要用于農(nóng)作物害蟲的防治；程國金等開發(fā)出一種以桑葉為來源的生物農(nóng)藥，主要用于滅殺菜青蟲、蝗蟲等害蟲；洪偉等研發(fā)出一種以雷公藤為原料的生物農(nóng)藥，能夠防治農(nóng)作物害蟲。雖然我國在生物農(nóng)藥的研發(fā)上已取得一定的成果，但對植物源農(nóng)藥的開發(fā)依舊處于初級階段，廣泛尋求理想的植物源農(nóng)藥仍然刻不容緩。隨著對植物源生 物農(nóng)藥的不斷研究與開發(fā)，為松針的利用提供了新的思路。松針資源豐富，來源廣泛、再生速度快、可一年四季采收。其成分主要有黃酮、有機酸、揮發(fā)油等，具有一定的抗菌活性，可以考慮開發(fā)松針源生物農(nóng)藥。目前我國對針松抗菌活性成分的提取和應用尚處于起步階段，對松針在抗菌活性方面的研究還處在基礎階段，提取松針內的有效抑菌成分并用于生產(chǎn)實踐依然有一段較長的路要走。如中國發(fā)明專利(申請?zhí)?200810162531.5申請日:2008-12-01)公開了濕地松松針提取物用于食品抗菌保鮮。得到的濕地松松針提取物對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、霉菌有較強的抑制作用，并具有較強的抗氧化功能，該保鮮劑對熱具有良好的穩(wěn)定性，具有較寬的PH使用范圍，用水將松針提取物溶解成不同濃度溶液，用于不同食品保鮮，保鮮效果明顯。雖然已知松針含有抗菌活性物質，對大腸桿菌、枯草芽抱桿菌、黑曲霉、黃曲霉等幾種常見的食品腐敗菌有廣泛的抑制作用，但對抗植物病害菌活性的研究依舊缺乏，沒有其對植物病害菌的殺菌譜。因此，利用松針提取物對植物病原菌進行更加深入的研究，研發(fā)出新型的抗植物病原菌制劑，為豐富植物源的生防制劑品種，綜合開發(fā)利用松針提供重要的理論依據(jù)。

發(fā)明內容
為了解決上述的技術問題，本發(fā)明的第一個目的是提供松針提取物用于抗植物病原菌的方法，該方法具有方法簡便、實用，成本低效果好，對環(huán)境污染小且農(nóng)藥本身易降解的特點。本發(fā)明的第二個目的是提供抗植物病原菌的生物農(nóng)藥，該生物農(nóng)藥中包括了松針提取物。為了實現(xiàn)上述的第一個目的，本發(fā)明采用了以下的技術方案:松針提取物用于抗植物病原菌的方法。作為優(yōu)選，所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。作為優(yōu)選，上述的松針提取物采用以下的方法步驟制備得到:I)收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末；2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60_90°C，回流提取得到濾液；3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發(fā)為膏狀物提取物；4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。作為優(yōu)選，上述的步驟I)中松針粉末是30 100目。作為優(yōu)選，上述的步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數(shù)為2 4次，每次提取時間I 2小時。為了實現(xiàn)上述的第二個目的，本發(fā)明采用了以下的技術方案:抗植物病原菌的生物農(nóng)藥，該生物農(nóng)藥中包括松針提取物。作為優(yōu)選，所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。作為優(yōu)選，上述的松針提取物采用以下的方法步驟制備得到:I)收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末；2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60_90°C，回流提取得到濾液；3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發(fā)為膏狀物提取物；4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。作為優(yōu)選，上述的步驟I)中松針粉末是30 100目。作為優(yōu)選，上述的步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數(shù)為2 4次，每次提取時間I 2小時。本發(fā)明的技術方案具有以下優(yōu)點，原料來源豐富、易得。方法工藝簡單，生產(chǎn)成本低，無任何毒害污染；該松針源生物農(nóng)藥為干粉狀態(tài)，易于保存，可成功防治苦瓜枯萎病原菌、煙草赤星病原菌、小麥赤霉病原菌、番茄早疫病原菌等植物病原菌，是新一代的植物源無公害的生物農(nóng)藥。


圖1是實施例1制備的松針源農(nóng)藥對苦瓜枯萎病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。 圖2是實施例1制備的松針源農(nóng)藥對煙草赤星病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。
圖3是實施例1制備的松針源農(nóng)藥對番茄早疫病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。圖4是實施例1制備的松針源農(nóng)藥對小麥赤霉病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。
具體實施例方式下面對本發(fā)明的具體實施方式
做一個詳細的說明。實施例1松針源生物農(nóng)藥的制備過程，將采集來的松針除雜洗凈，于50°C電熱恒溫烘箱內烘干，粉碎至40目，得到的粉末常溫保存?zhèn)溆?。稱取一定量松針粉末，加入15倍體積的40-70%乙醇溶液，60-90°C水浴回流提取lh，之后用循環(huán)式真空泵進行抽濾，收集濾液，再向濾渣中加15倍體積40-70%乙醇溶液，進行第二次提取，水浴回流提取Ih后抽濾，收集濾液，按照同樣的方法提取3次，之后合并濾液，用旋轉蒸發(fā)儀將溶液蒸發(fā)掉得到膏狀物，放入真空干燥箱中50°C烘至恒重，取出研磨得到提取物粉末，該粉末即為松針源生物農(nóng)藥，常溫保存即可。實施例2對植物病原菌抗性測定，利用生產(chǎn)速率法對(I)中制得的松針源生物農(nóng)藥進行植物病原菌生物抗性測定，具體操作如下:取(I)中制得的松針源生物農(nóng)藥用水配成20-100mg/ml藥液；加藥培養(yǎng)基的制備:取配制的藥液0.5ml于滅菌的IOml試管中，加入9.5ml50°C左右的PDA培養(yǎng)基,搖勻,倒入滅菌培養(yǎng)皿中即成。菌種培養(yǎng):選取處于同一生長勢的菌落圈，用無菌小鏟鏟取打孔器制得菌餅，并挖出孔內培養(yǎng)基，倒置于上述加藥培養(yǎng)基的平皿上，每皿三個。28°C恒溫倒置培養(yǎng)43h。用十字交叉法量取菌落圈直徑，取其平均值作為實驗結果，計算抑制率。 菌落圈直徑越小則抗菌活性越強。以清水代替藥液作為對照。
抑制率e%) =對照菌，=賴徑χ_
對照_落直徑不同提取條件下所得松針源農(nóng)藥對植物病原菌抑制效果的比較不同提取溶劑對6種植物病原真菌菌絲生長的抑制作用比較
權利要求
1.松針提取物用于抗植物病原菌的方法。
2.根據(jù)權利要求1所述的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于:所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于松針提取物采用以下的方法步驟制備得到: O收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末； 2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60-90°C，回流提取得到濾液； 3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發(fā)為膏狀物提取物； 4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。
4.根據(jù)權利要求3所述的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于步驟I)中松針粉末是30 100目。
5.根據(jù)權利要求3所述 的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數(shù)為2 4次，每次提取時間I 2小時。
6.抗植物病原菌的生物農(nóng)藥，其特征在于:該生物農(nóng)藥中包括松針提取物。
7.根據(jù)權利要求6所述的抗植物病原菌的生物農(nóng)藥，其特征在于:所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的抗植物病原菌的生物農(nóng)藥，其特征在于松針提取物采用以下的方法步驟制備得到: O收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末； 2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60-90°C，回流提取得到濾液； 3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發(fā)為膏狀物提取物； 4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。
9.根據(jù)權利要求8所述的抗植物病原菌的生物農(nóng)藥，其特征在于步驟I)中松針粉末是30 100目。
10.根據(jù)權利要求8所述的抗植物病原菌的生物農(nóng)藥，其特征在于步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數(shù)為2 4次，每次提取時間I 2小時。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術領域，具體來說是涉及松針提取物用于抗植物病原菌及采用松針提取物的抗植物病原菌的生物農(nóng)藥。松針提取物用于抗植物病原菌的方法。本發(fā)明原料來源豐富、易得。方法工藝簡單，生產(chǎn)成本低，無任何毒害污染；該松針源生物農(nóng)藥為干粉狀態(tài)，易于保存，可成功防治苦瓜枯萎病原菌、煙草赤星病原菌、小麥赤霉病原菌、番茄早疫病原菌等植物病原菌，是新一代的植物源無公害的生物農(nóng)藥。
文檔編號A01P3/00GK103141522SQ20131008243
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月15日 優(yōu)先權日2013年3月15日
發(fā)明者徐麗珊, 沈佳鑫, 吳文珊, 馬瑞 申請人:浙江師范大學