專利名稱：綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種貝類水產(chǎn)生物雜交制種方法，尤其是涉及一種綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法。
背景技術(shù)：
鮑是海洋貝類的一種，被譽(yù)為海產(chǎn)八珍之首，素有“軟黃金”之稱，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來，福建省鮑養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅猛，2011年產(chǎn)量突破6萬噸，約占全國的70%，產(chǎn)值近百億元，鮑養(yǎng)殖業(yè)已成為福建省增長速度最快、經(jīng)濟(jì)效益最好的水產(chǎn)支柱產(chǎn)業(yè)。皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai)為冷水性種，原為我國北方的主要鮑養(yǎng)殖對(duì)象，但經(jīng)在南方多年的馴化，目前已成為我國南方最主要的養(yǎng)殖鮑種。皺紋盤鮑的耐高溫能力雖然較先前已有顯著提高，但由于皺紋盤鮑自身的生活習(xí)性所限，皺紋盤鮑渡夏存活率低，仍是當(dāng)前困擾鮑養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的最主要問題和風(fēng)險(xiǎn)所在。綠鮑(Haliotis fulgens)主要分布于美洲太平洋亞熱帶沿岸，屬暖水性種類,在9 30°C的水溫條件下可繁殖生長。該鮑種體型大，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，現(xiàn)為美國和墨西哥的主要養(yǎng)殖鮑種之一。廈門大學(xué)鮑類遺傳育種項(xiàng)目組于2009年從美國引進(jìn)綠鮑，并進(jìn)行了馴化養(yǎng)殖，在此期間，綠鮑表現(xiàn)出良好的生長及抗高溫特性。同時(shí)，項(xiàng)目組開展了綠鮑和皺紋盤鮑的種間雜交研究，結(jié)果表明，二者在性狀方面具有一定的互補(bǔ)性，通過雜交途徑，可以集兩種鮑的優(yōu)良性狀于一體，培育出適溫范圍廣、生長迅速的雜交鮑種，雜交種有望改良皺紋盤鮑的渡夏高死亡率問題，為產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供潛在的新品種(系)。在綠鮑的引種與雜交育種方面，王子臣(1985)等從美國加利福尼亞引進(jìn)綠鮑，并開展了綠鮑自繁及與皺紋盤鮑種間雜交的試驗(yàn)，但由于當(dāng)年的條件所限，在大連的氣候條件下難以適應(yīng)存活，并未獲得成功。許國領(lǐng)等(許國領(lǐng)，勞贊，楊小立，美國綠鮑馴育和人工育苗，熱帶海洋，1989,8(3):75-80)于1985年11月引進(jìn)40只6 7cm的綠鮑，該批次綠鮑于1987年I月多批次產(chǎn)下后代，受當(dāng)時(shí)養(yǎng)殖技術(shù)限制，由于找不到適合的`藻類食物，綠鮑自繁后代損耗嚴(yán)重，因此未見后續(xù)報(bào)道。Fabiola(Fabiola Lafarga de la Cruz, Cristian Gallardo-Escarate.1ntraspeciesand interspecies hybrids in Haliotis:natural and experimental evidence and itsimpact on abalone aquaculture.Reviews in Aquaculture, 2011，3:74 - 99)就目前國際上已開展的鮑種間雜交研究進(jìn)行了綜述，從文獻(xiàn)看，目前國內(nèi)外尚未見綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交成功的報(bào)道。本申請(qǐng)人在中國專利CN101167444公開一種西氏鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法，在自然海水溫度為22 26°C時(shí)，取西氏鮑為種鮑，取皺紋盤鮑為種鮑；將種鮑按照雌雄分別放置在不同的親鮑培育池中培育；將性腺發(fā)育成熟的個(gè)體采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，直至雌雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止。分別取西氏鮑的精子和皺紋盤鮑的卵子，將二者混合，調(diào)節(jié)受精卵海水PH值，待受精卵分裂至二細(xì)胞期后開始洗卵；西氏鮑早X皺紋盤鮑雜交種受精卵的獲得:分別取皺紋盤鮑的精子和西氏鮑的卵子混合，調(diào)pH值，待受精卵分裂至二細(xì)胞期后洗卵；按照常規(guī)的孵化及后期培育方法即可。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交所存在的受精率較低等問題，提供一種受精率高，可應(yīng)用于規(guī)?；a(chǎn)的綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法。本發(fā)明所述一種綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法，包括以下步驟:I)種鮑的選擇與促熟培育:將皺紋盤鮑與綠鮑個(gè)體作為種鮑，通過控溫設(shè)施，將海水溫度控制在24 26°C的條件下進(jìn)行親鮑的性腺同步促熟，將種鮑按照雌、雄分別放置在不同的培育池中進(jìn)行飼育，每個(gè)培育池內(nèi)親鮑的性別特征必須單一；2)人工催產(chǎn):將性腺發(fā)育成熟的個(gè)體采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，直至雌、雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止；3)授精:在20 22°C水溫條件下授精，通過正交組合，即皺紋盤鮑早X綠鮑7組合，或通過反交組合，即綠鮑早X皺紋盤鮑組合，獲得授精后的雜交鮑苗；4)將授精后的雜交鮑苗按照常規(guī)的幼體、苗種及中間培育方法進(jìn)行培育，最終獲得綠鮑與皺紋盤鮑正雜交或反雜交鮑苗。在步驟I)中，所述綠鮑最好殼長大于7cm，個(gè)體重量大于50g ;所述皺紋盤鮑最好殼長大于7cm,個(gè)體重量大于50g。在步驟2)中，所述人工催產(chǎn)最好是在18 22°C條件下，陰干60 120min，然后將綠鮑和皺紋盤鮑的雌、雄種鮑分別置于不同的容器內(nèi)，注入照射強(qiáng)度為500 1200mWh/L的紫外線處理海水，每隔40 60min更換一次紫外線處理海水，直至雌、雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止。 在步驟3)中，正交組合時(shí)，綠鮑的精子濃度最好為3.39 X IO5 6.31 X IO6個(gè)/ml ；反交組合時(shí)，皺紋盤鮑的精子濃度最好為6.76X IO5 6.31 X IO6個(gè)/ml。與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明具有如下突出優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明通過控溫設(shè)施使綠鮑與皺紋盤鮑性腺同步發(fā)育成熟，用陰干與紫外線照射海水相結(jié)合的方法獲得兩種鮑的精子與卵子，在適宜的水溫與精子濃度條件下，正交組合與反交組合的受精率可分別穩(wěn)定在60%和15%以上，按照常規(guī)方法進(jìn)行苗種培育，經(jīng)養(yǎng)殖試驗(yàn)，所培育的正、反雜交鮑苗在抗高溫能力與生長速度方面表現(xiàn)出顯著的雜交優(yōu)勢(shì)，有望為產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供優(yōu)良新品種。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1挑選個(gè)體活力良好、肌肉無損傷的綠鮑和皺紋盤鮑做為種鮑，綠鮑平均殼長
7.54cm，皺紋盤鮑平均殼長8.32cm ;通過循環(huán)水降溫設(shè)施，將水溫控制在24°C，雌、雄分別放置在不同的親鮑培育池中進(jìn)行飼育；待種鮑性腺發(fā)育成熟后，將性腺發(fā)育成熟的個(gè)體陰干70min，隨后注入照射強(qiáng)度為1000mWh/L紫外線處理海水，海水水溫22°C，每隔60min更換一次紫外線處理海水，直至雌雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止。人工催產(chǎn)過程中將綠鮑和皺紋盤鮑的雌雄種鮑分別置于不同的容器內(nèi)，雌、雄個(gè)體嚴(yán)格區(qū)分。取綠鮑的精子和皺紋盤鮑的卵子，將二者混合，其中綠鮑的精子濃度為9.43X 105個(gè)/ml ;結(jié)果皺紋盤鮑早X綠鮑雜交受精率為63.42±2.14%，按照常規(guī)的幼體、苗種及中間培育方法進(jìn)行，最終獲得綠鮑與皺紋盤鮑的正交鮑苗。雜交種生長迅速，成活率高，抗高溫能力強(qiáng)，具有明顯的雜種優(yōu)勢(shì)，有潛力發(fā)展成為新的鮑養(yǎng)殖品種。實(shí)施例2與實(shí)施例1類似，區(qū)別在于，只是取綠鮑的精子和皺紋盤鮑的卵子，將二者混合，其中皺紋盤鮑的精子濃度為2.58X IO6個(gè)/ml，結(jié)果綠鮑早X皺紋盤鮑( 雜交受精率為18.32±3.12%，按照常規(guī)的幼體、苗種及中間培育方法進(jìn)行，最終獲得綠鮑與皺紋盤鮑的反交鮑苗。雜交種生長 迅速，成活率高，抗高溫能力強(qiáng)，具有明顯的雜種優(yōu)勢(shì)，有潛力發(fā)展成為新的鮑養(yǎng)殖品種。
權(quán)利要求
1.綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法，其特征在于包括以下步驟: 1)種鮑的選擇與促熟培育:將皺紋盤鮑與綠鮑個(gè)體作為種鮑，通過控溫設(shè)施，將海水溫度控制在24 26°C的條件下進(jìn)行親鮑的性腺同步促熟，將種鮑按照雌、雄分別放置在不同的培育池中進(jìn)行飼育，每個(gè)培育池內(nèi)親鮑的性別特征必須單一； 2)人工催產(chǎn):將性腺發(fā)育成熟的個(gè)體采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，直至雌、雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止； 3)授精:在20 22°C水溫條件下授精，通過正交組合，即皺紋盤鮑早X綠鮑組合，或通過反交組合，即綠鮑早X皺紋盤鮑組合，獲得授精后的雜交鮑苗； 4)將授精后的雜交鮑苗按照常規(guī)的幼體、苗種及中間培育方法進(jìn)行培育，最終獲得綠鮑與皺紋盤鮑正雜交或反雜交鮑苗。
2.如權(quán)利要求1所述的綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法，其特征在于在步驟I)中，所述的綠鮑的殼長大于7cm，個(gè)體重量大于50g ;所述的皺紋盤鮑的殼長大于7cm，個(gè)體重量大于50g。
3.如權(quán)利要求1所述的綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法，其特征在于在步驟2)中，所述人工催產(chǎn)是在18 22°C條件下，陰干60 120min，然后將綠鮑和皺紋盤鮑的雌、雄種鮑分別置于不同的容器內(nèi)，注入照射強(qiáng)度為500 1200mWh/L的紫外線處理海水，每隔40 60min更換一次紫外線處理海水，直至雌、雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止。
4.如權(quán)利要求1所述的綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法，其特征在于在步驟3)中，正交組合時(shí)，綠鮑的精子濃度為3.39 X IO5 6.31 X IO6個(gè)/ml ;反交組合時(shí)，皺紋盤鮑的精子濃度為 6.76 X IO5 6 .31 X IO6 個(gè) /ml。
全文摘要
綠鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法，涉及一種貝類水產(chǎn)生物雜交制種方法。將皺紋盤鮑與綠鮑個(gè)體作為種鮑，通過控溫設(shè)施，將海水溫度控制在24～26℃的條件下進(jìn)行親鮑的性腺同步促熟，將種鮑按照雌、雄分別放置在不同的培育池中進(jìn)行飼育，每個(gè)培育池內(nèi)親鮑的性別特征必須單一；將性腺發(fā)育成熟的個(gè)體采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，直至雌、雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止；在20～22℃水溫條件下授精，通過正交組合，即皺紋盤鮑♀×綠鮑組合，或通過反交組合，即綠鮑♀×皺紋盤鮑組合，獲得授精后的雜交鮑苗；將授精后的雜交鮑苗按照常規(guī)的幼體、苗種及中間培育方法進(jìn)行培育，最終獲得綠鮑與皺紋盤鮑正雜交或反雜交鮑苗。
文檔編號(hào)A01K61/00GK103109765SQ201310057589
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月22日
發(fā)明者游偉偉, 柯才煥, 駱軒, 范飛龍 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)