專利名稱：鏈霉菌及其在防治十字花科根腫病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種鏈霉菌及其在防治十字花科根腫病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
十字花科根腫病(plasmodiophoa brassicae Woron)是一種世界性土傳病害，致病菌為蕓苔根腫菌，屬于一種專性寄生低等鞭毛菌(也有學(xué)者將其歸入粘菌)，目前尚無(wú)法人工培養(yǎng)。主要危害十字花科蔬菜如:大白菜、甘藍(lán)、蘿卜等。其病菌以孢子囊在土壤或未腐熟的廄肥中越冬越夏，對(duì)不良環(huán)境抵抗力強(qiáng)，一般能存活十年以上。田間最初侵染源來(lái)自土壤和未腐熟的廄肥帶菌。病菌又可隨菜苗、泥土攜帶傳播到無(wú)病區(qū)。病菌從菜苗的幼根或根毛侵入，并刺激根部細(xì)胞加速分裂，造成根部畸形腫大，導(dǎo)致植株輸導(dǎo)組織受阻，地上部生長(zhǎng)緩慢，葉片萎蔫，重者根部腐爛，植株死亡。近年，根腫病在湖北、云南、四川、貴州、浙江、福建等地高山十字花科蔬菜種植區(qū)發(fā)生嚴(yán)重，已成為制約我國(guó)高山大白菜、甘藍(lán)、蘿卜反季節(jié)生產(chǎn)的主要因素之一，其中尤以大白菜、甘藍(lán)受害最重，嚴(yán)重地塊甚至絕收，每畝損失3000元以上。目前，防治十字花科根腫病常用方法主要包括撒石灰調(diào)節(jié)土壤pH、輪作、種植抗病品種等，但由于存在土壤板結(jié)、經(jīng)濟(jì)效益差、不耐儲(chǔ)運(yùn)等缺點(diǎn)，上述措施均未大面積推廣。常規(guī)殺菌劑有多菌靈、福美雙、代森錳鋅等，但防效均不明顯，防效表現(xiàn)較好的是日本石原株式會(huì)社的50%氟啶胺SC與10%氰霜唑SC組合，但由于抑制種子萌發(fā)及使用成本高昂(每畝近400元)等原因，也尚未得到大面積推廣應(yīng)用。關(guān)于十字花科根腫病生物農(nóng)藥在真菌、放線菌、芽孢桿菌等方面均有一定的研究報(bào)道，并且取得了一定的成績(jī)，如日本研究者將大白菜播種在從麥田、油菜田、白菜地及草地采回的土壤中，從大白菜根中分離得到大量?jī)?nèi)生真菌，通過(guò)盆栽試驗(yàn)篩選獲得2株內(nèi)生真菌(Heteroconium chaetospira)H4007,M4006,病指分別為23，15， 顯著高于其他屬種處理及空白對(duì)照，通過(guò)種子處理顯示有促生作用；有研究者利用(Phoma glomerata) JCM 9972有效控制根腫病的發(fā)生；也有國(guó)外研究者通過(guò)溫室和田間試驗(yàn)得到可抑制根腫病菌的3個(gè)木霉菌株(TC32，TC45和TC63)和I個(gè)鏈霉菌菌株(S99);韓國(guó)研究人員從大白菜根部分離獲得81株內(nèi)生放線菌，通過(guò)大白菜根腫病盆栽試驗(yàn)，獲得3株具有開(kāi)發(fā)潛力的內(nèi)生放線菌,其中2株(Microbispora rosea)和(subsp.rosea)防效分別為 58% 和 33%, I 株(Streptomyces olivochromogenes)防效達(dá) 42% ;我國(guó)四川農(nóng)大研究人員從四川根際土中分離出I株灰紅鏈霉菌(Streptomyces griseoruber),其對(duì)大白菜根腫病盆栽實(shí)驗(yàn)防效達(dá)到73.69%;何月秋等研究人員從大白菜根際土壤中分離到I株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)XF-l，其對(duì)根腫病的室內(nèi)防效達(dá)85%，田間防效達(dá)68.6^84.8% ;長(zhǎng)江大學(xué)將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)與固氮類芽孢桿菌(Paenibacillus azotofixans)用于根腫病綜合防治，防效達(dá)到85%。鏈霉菌具有抗生作用，還具有可田間定殖等作為生物農(nóng)藥予以開(kāi)發(fā)的優(yōu)點(diǎn)。美國(guó)環(huán)境保護(hù)署美國(guó)環(huán)保局2012年公布了 I項(xiàng)瘡痂鏈霉菌(Streptomyces acidiscabies)RL-1lO用于除草的生物農(nóng)藥研究計(jì)劃。全球已登記在冊(cè)的鏈霉菌農(nóng)藥共有6種，登記國(guó)家和地區(qū)分別為韓國(guó)、歐盟、烏克蘭、加拿大、美國(guó)，具體為(Streptomyces colombiensis)(韓國(guó))、(Streptomyces kasugaensis)(韓國(guó))、(Streptomyces griseoviridis)K61 (歐盟、力口拿大、美國(guó))、(Streptomyces albus)(烏克蘭)、(Streptomyces avermitilis)(烏克蘭)、(Streptomyces lydicus) WYEC 108 (加拿大、美國(guó))，防治對(duì)象主要為真菌病害包括葉部病害與土傳性病害(其中S.avermitilis用于防治甲蟲(chóng)與葉螨)。但截至目前，尚無(wú)防治十字花科根腫病的鏈霉菌農(nóng)藥登記。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是要提供一種具有防治十字花科根腫病用途的鏈霉菌，該鏈霉菌包括瘡痂鏈霉菌(Sti ^ptomyces scabiei ) WS-24926 CCTCC NO:M 2012393 和 / 或尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus)WS_29246 CCTCC NO:M 2012413。本發(fā)明所提供的瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei)WS_24926已于2012年10月10日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC);保藏登記號(hào)為CCTCC M 2012393 ;保藏地點(diǎn)為:中國(guó)、武漢、武漢大學(xué)。尖抱鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus)WS_29246 已于 2012 年 10 月 18 日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC);保藏登記號(hào)為CCTCC M 2012413，保藏地點(diǎn)為:中國(guó)、武漢、武漢大學(xué)。所述瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei) WS-24926是從湖南瀏陽(yáng)遠(yuǎn)郊植物根際土壤中分離得到的。綜合瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei)WS_24926的形態(tài)學(xué)特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析的結(jié)果，將其鑒定為瘡痂鏈霉菌。具體鑒定結(jié)果如下:( I)菌體的形態(tài)特征瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei) WS-24926菌株在ISP-2固體培養(yǎng)基上，菌落干燥、表面不光滑，有突起，淺灰色；孢子多，鏈狀，短棍狀，大小(長(zhǎng)1.5 μ m-2 μ m，寬
0.6 μ m-0.8 μ m)，灰色，氣絲乳白色或灰色，有螺旋孢子絲產(chǎn)生；色素不明顯；在察氏固體培養(yǎng)基上無(wú)色素產(chǎn)生，氣絲及孢子堆白色，基絲無(wú)色。在天門(mén)冬素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)基絲黃色，氣絲及孢子堆灰白色，無(wú)色素產(chǎn)生。(2)生理生化特性不產(chǎn)生黑色素，能利用糊精、吐溫40、L 一阿拉伯糖、D-木糖、琥珀酸單甲酯、丙酮酸、丙二醇、D-核糖、D-L-α -憐酸甘油。不能利用:吐溫80、α _環(huán)糊精、糖原、甘露聚糖、D-阿拉伯糖、D-果糖、D-纖維二糖、D-半乳糖、D-半乳糖醛酸、D-甘露醇、a -D-葡萄糖、D-葡萄糖酸、麥芽糖、乳果糖、D-甘露糖、L-丙氨酸、D-丙氨酸、琥珀酸、L-丙氨酰甘氨酸、L-丙氨酸胺、L-谷氨酸、腺苷、肌苷、胸苷、L-鼠李糖、尿苷、蔗糖、水楊苷、6-磷酸-D-果糖、6-磷酸-D-葡萄糖。(3) 16SrDNA 序列分析瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei)WS_24926菌株經(jīng)PCR技術(shù),DNA測(cè)序儀分析，該菌株的16SrDNA序列由1391個(gè)堿基組成。用BLAST程序?qū)Ο忦桄溍咕?Sti^ptomycesscabiei) WS-24926的16SrDNA序列和GenBank中已登錄的16SrDNA序列進(jìn)行核昔酸同源性比較，結(jié)果與已報(bào)道的瘡痂鏈霉菌(S.scabiei) ATCC 49173 (T)(登錄號(hào)AB026199)的16SrDNA序列同源性達(dá)到100%，鑒定其為瘡痂鏈霉菌。所述尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus) WS-29246是從安徽岳西遠(yuǎn)郊植物根際土壤中分離得到的。綜合尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus)WS_29246的形態(tài)學(xué)特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析的結(jié)果，將其鑒定為尖孢鏈霉菌。具體鑒定結(jié)果如下:(I)菌體的形態(tài)特征尖抱鏈霉菌(Streptomycescuspidosporus)WS_29246 在 ISP-2 固體培養(yǎng)基上，菌落干燥、表面不光滑，有突起，有褶皺，乳白色或微黃色，有螺旋狀孢子絲，2-5圈不等；基絲黃褐色，無(wú)分隔，不斷裂，呈波浪型，多分枝，直徑0.4 μ m-0.6 μ m。在察氏固體培養(yǎng)基上無(wú)色素產(chǎn)生，菌落表面光滑，不產(chǎn)孢。在PDA培養(yǎng)基上產(chǎn)生朽1檬黃色素。(2)生理生化特性不產(chǎn)生黑色素，利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、鼠李糖、棉子糖、肌醇、D-甘露醇以及D-半乳糖、乳糖、甘露糖、蜜二糖、海藻糖、D-麥芽糖、檸檬酸鈉、琥珀酸鈉。(3) 16SrDNA 序列分析尖抱鏈霉菌(Streptomycescuspidosporus) WS-29246 經(jīng) PCR 技術(shù)，DNA 測(cè)序儀分析，獲得該菌株的16S rDNA序列，然后用BLAST程序?qū)怄哝溍咕?Str印tomycescuspidosporus)WS_29246的16S rDNA序列和GenBank中已登錄的16S rDNA序列進(jìn)行核苷酸同源性比較，結(jié)果與已報(bào)道的尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus)的16S rDNA序列同源性達(dá)到100%,鑒定其為尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus)。所述瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei) WS-24926和所述尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus) WS-29246采用液體發(fā)酵培養(yǎng),其使用的培養(yǎng)基如下:(I)斜面培養(yǎng)基:培養(yǎng)基配方如下:稱取麥芽提取物:1.(Γ2.0g/L，可溶性淀粉:0 5g/L，酵母提取物:0.4 1.0g/L,葡萄糖:0 2.0g/L,蔗糖:0 2.0g/L,瓊脂:1.5 2.0g/L,pH 值 7.0 8.0,定容至 IOOOmL0(2)種子培養(yǎng)基:甘露醇:l(T20g/L，大豆蛋白胨:5 20g/L，魚(yú)粉:(T5.0g/L，豆油:
0.5 5.0g/L, K2HPO4:0.15 0.5g/L, CaCO3:0.Γθ.4g/L, pH 值 7.0 8.0,定容至 IOOOmL0(3)發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖:2 8g/L，葡萄糖:2 8g/L，可溶性淀粉:5 10g/L，大豆粉:(Tl0g/L，棉子粉:0 25g/L，酵母提取物:1 3g/L，CaCO3:2 5g/L，NaCl:2 5g/L，pH 值
7.0 8.0，定容至 IOOOmL0培養(yǎng)流程:(I)將所述瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei) WS-24926和所述尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus) WS-29246菌種分別接種試管斜面培養(yǎng)基上，在溫度28 ± I °C條件下，活化培養(yǎng)5d;(2)將活化的菌種接種至種子培養(yǎng)基中，在溫度28±1°C的搖床內(nèi)培養(yǎng)3 4d ；(3)將步驟2)中培養(yǎng)的菌種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度28±1°C的條件下發(fā)酵培養(yǎng)3 4d。

本發(fā)明提供了所述鏈霉菌在防治十字花科根腫病中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了所述鏈霉菌制備而成的防治十字花科根腫病的生防懸浮劑及其制備方法。所述生防懸浮劑按重量百分比由1(Γ80%的發(fā)酵菌液、0.4 10%的分散劑、0.5^5%的乳化劑、0.Γ10%的增稠劑、0.Γ10%的防腐劑、(Γ3.0%的消泡劑、(Γ10.0%的防凍劑和余量的水組成，其中，所述發(fā)酵菌液是由所述鏈霉菌發(fā)酵得到的菌液。進(jìn)一步地，所述分散劑選用木質(zhì)素磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈣、萘磺酸鈉甲醛縮合物、脂肪酰胺-N-甲基牛磺酸鹽、烷基磺基琥珀酸鈉鹽、二丁基萘磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、多芳基酚聚氧乙烯醚和乙二胺四乙酸鹽中的任選一種或者幾種；所述乳化劑為烷基苯磺酸鹽、烷基醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚、山梨酸酯和多元醇脂肪酸酯中任選一種或者幾種；所述增稠劑選用黃原膠、明膠、阿拉伯膠、瓜膠、海藻酸鈉、可溶性淀粉、雜多糖、羧甲基纖維素鈉、羧乙基纖維素鈉、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、聚丙烯酸胺、尿素、硅酸鎂鋁、二氧化硅、硅藻土、膨潤(rùn)土和凹凸棒任選一種或者幾種；所述防腐劑選用苯甲酸鈉、山梨酸鉀和對(duì)羥基苯甲酸乙酯任選一種或者幾種；所述防凍劑為乙二醇、丙二醇、丙三醇、二甘醇、三甘醇、聚乙二醇中的任選一種或者幾種；所述的消泡劑為異辛醇、異戊醇、硬脂酸、月桂酸、聚乙二醇醚和有機(jī)硅中任選一種或者幾種。所述生防懸浮劑的制備方法，包括以下步驟:I)將所述鏈霉菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，在400(Tl0000r/min條件下離心5 20min,得到發(fā)酵菌液；2)按照所述重量百分比將所述發(fā)酵菌液、分散劑、乳化劑、增稠劑、防腐劑、消泡齊U、防凍劑和余量的水混合均勻，得到混合物料；3)將混合物料剪切分散均勻后，研磨至90%以上物料粒度度達(dá)到5Mm以下，攪拌均勻，調(diào)節(jié)PH至4.(Γ5.0,即得到生防懸浮劑。實(shí)驗(yàn)表明:本發(fā)明的生防懸浮劑對(duì)十字花科根腫病田間試驗(yàn)防治效果達(dá)55 80%，其盆栽試驗(yàn)防治效果為75 90%，高于氟啶胺與氰霜唑等對(duì)照藥劑。

本發(fā)明的生防懸浮劑使用方法為:噴霧法:移栽前采用噴霧法進(jìn)行土壤處理，按畝用所述懸浮劑1000 2000mL的使用量將所述懸浮劑稀釋5(Γ200倍噴霧使用f 2次。灌根法:移栽時(shí)采用灌根法處理，將懸浮劑稀釋5(Γ200倍，按每株灌根所述稀釋后的懸浮液5(Tl00mL，畝用所述懸浮劑劑量為100(T3000mL，整個(gè)生長(zhǎng)期灌根廣3次。本發(fā)明還提供了一種所述鏈霉菌制備而成的防治十字花科根腫病的生防緩釋膠囊劑及其制備方法。所述生防緩釋膠囊劑包括包括廣3份重量的發(fā)酵菌液、f 3份重量的阿拉伯膠或者海藻膠、Γ3份重量的明膠或者羧甲基纖維素鈉，其中，所述發(fā)酵菌液是由所述鏈霉菌發(fā)酵得到的菌液。所述生防緩釋膠囊劑的制備方法:包括以下步驟:I)先將所述鏈霉菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，在400(Tl0000r/min條件下離心5 20min,
得到發(fā)酵菌液，取f 3份重量的發(fā)酵菌液加入反應(yīng)容器；2)其次，取f 3份重量的明膠或者羧甲基纖維素鈉加水配置成重量百分比為3 8%的水溶液后，加入反應(yīng)容器，并用醋酸溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)物的PH值至3飛；3)再次，取f 3份重量的阿拉伯膠或者海藻膠加水配制成重量百分比為2 8%的水溶液后，加入然應(yīng)容器，繼續(xù)攪拌l(T30min ；4)然后，向反應(yīng)容器中中加入甲醛水溶液固化囊壁，繼續(xù)攪拌l(T30min，即得微膠囊水溶液；
5)最后，將得到微膠囊水溶液離心處理后噴霧干燥后即可獲得生防緩釋膠囊劑。實(shí)驗(yàn)證明:本發(fā)明的生防緩釋膠囊劑，對(duì)大白菜根腫病田間防效為65 80%，田間使用技術(shù)為大白菜或者甘藍(lán)移栽時(shí)每穴撒施2g生防緩釋膠囊劑。


圖1為瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei) WS-24926在ISP-2固體培養(yǎng)基上菌落形態(tài)。圖2 為尖抱鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus) WS-29246 在 ISP-2 上的菌落形態(tài)。
具體實(shí)施例方式為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合具體實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)附圖對(duì)本發(fā)明的鏈霉菌及其在防治十字花科根腫病中的應(yīng)用作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei) WS-24926及尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus) WS-29246 菌株的分離、篩選取土樣，采用常規(guī)法進(jìn)行分離、純化和保存。我們從土壤中共分離出30000株放線菌，采用先導(dǎo)化合物活性追蹤的辦法，結(jié)合HPLC-MS天然產(chǎn)物化合物數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇相對(duì)低毒、易培養(yǎng)具有產(chǎn)業(yè)化趨勢(shì)的109株放線菌，通過(guò)大白菜根腫病盆栽試驗(yàn)及田間試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表I。最終確定WS-24926及WS-29246最優(yōu)，其病情指數(shù)最小，校正防效分別為95%和 79%。盆栽試驗(yàn)實(shí)施步驟:將各供試菌株菌種活化后，采用二級(jí)搖瓶發(fā)酵法，初級(jí)搖瓶發(fā)酵采用種子培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 為28°C，150rpm，二級(jí)發(fā)酵采用發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為5 10%，培養(yǎng)條件28°C，轉(zhuǎn)速150rpm，培養(yǎng)時(shí)間4 6d，裝液量每500mL三角瓶中裝入培養(yǎng)液100mL。每菌株培養(yǎng)5瓶，每瓶裝IOOmL發(fā)酵培養(yǎng)基。采用穴盤(pán)培養(yǎng)大白菜健康苗，長(zhǎng)至2 3片真葉期供實(shí)驗(yàn)用。盆栽試驗(yàn)采用菌土法接種，將收集的大白菜根腫切碎與盆栽土按1:100 (v/v)混合均勻，裝入花缽(Φ ±=15cm, Φ T =IOcm, h=13cm)中供實(shí)驗(yàn)用。移栽時(shí)，灌入各菌株搖瓶發(fā)酵液，每缽IOOmL,之后每隔IOd灌根I次，每次IOOmL,整個(gè)生長(zhǎng)期共灌根4次。結(jié)果顯示W(wǎng)S-24926及WS-29246對(duì)大白菜根腫病的防治效果最好，校正防效分別為95%和79%。根腫病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):O級(jí):沒(méi)有附著根腫；I級(jí):根腫附著在側(cè)根上，數(shù)量占f 25% ；2級(jí):主根上有根腫附著，側(cè)根上根腫數(shù)量占25%以上；3級(jí):根腫數(shù)量占5(Γ75% ;主根上有根腫附著；4級(jí):主根上有根腫附著，根腫數(shù)量占75%以上的根系。計(jì)算公式:
權(quán)利要求
1.一種鏈霉菌，包括瘡痂鏈霉菌(Sti^ptomyces scabiei ) WS-24926 CCTCC NO:M 2012393 和 / 或尖孢鏈霉菌(Sti^ptomyces cuspidosporus) WS-29246 CCTCC NO:M2012413。
2.—種權(quán)利要求1所述鏈霉菌在防治十字花科根腫病中的應(yīng)用。
3.一種利用權(quán)利要求1所述鏈霉菌制備而成的防治十字花科根腫病的生防懸浮劑，其特征在于:所述生防懸浮劑按重量百分比由1(Γ80%的發(fā)酵菌液、0.riO%的分散劑、0.5^5%的乳化劑、0.riO%的增稠劑、0.riO%的防腐劑、(Γ3.0%的消泡劑、(Γ10.0%的防凍劑和余量的水組成，其中，所述發(fā)酵菌液是由所述鏈霉菌發(fā)酵得到的菌液。
4.一種利用權(quán)利要求1所述鏈霉菌制備而成的防治十字花科植物根腫病的生防緩釋膠囊劑，其特征在于:所述生防緩釋膠囊劑包括f 3份重量的發(fā)酵菌液、f 3份重量的阿拉伯膠或者海藻膠、Γ3份重量的明膠或者羧甲基纖維素鈉，其中，所述發(fā)酵菌液是由所述鏈霉菌發(fā)酵得到的菌液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生防懸浮劑，其特征在于:所述分散劑為木質(zhì)素磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈣、萘磺酸鈉甲醛縮合物、脂肪酰胺-N-甲基?；撬猁}、烷基磺基琥珀酸鈉鹽、二丁基萘磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、多芳基酚聚氧乙烯醚和乙二胺四乙酸鹽中的任選一種或者幾種；所述乳化劑為烷基苯磺酸鹽、烷基醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚、山梨酸酯和多元醇脂肪酸酯中任選一種或者幾種；所述增稠劑為黃原膠、明膠、阿拉伯膠、瓜膠、海藻酸鈉、可溶性淀粉、雜多糖、羧甲基纖維素鈉、羧乙基纖維素鈉、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、聚丙烯酸胺、尿素、硅酸鎂鋁、二氧化硅、硅藻土、膨潤(rùn)土和凹凸棒任選一種或者幾種；所述防腐劑為苯甲酸鈉、山梨酸鉀和對(duì)羥基苯甲酸乙酯任選一種或者幾種；所述的消泡劑為異辛醇、異戊醇、硬脂酸、月桂酸、聚乙二醇醚和有機(jī)硅中任選一種或者幾種；所述防凍劑為乙二醇、丙二醇、丙三醇、二甘醇、三甘醇、聚乙二醇中的任選一種或者幾種。
6.一種權(quán)利要 求3所述生防懸浮劑的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟: 1)將所述鏈霉菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，在400(Tl0000;r/min條件下離心5 20min,得到發(fā)酵菌液； 2)按照所述重量百分比將所述發(fā)酵菌液、分散劑、乳化劑、增稠劑、防腐劑、消泡劑、防凍劑和余量的水混合均勻，得到混合物料； 3)將混合物料剪切分散均勻后，研磨至90%以上物料粒度度達(dá)到5Mm以下，攪拌均勻，調(diào)節(jié)PH至4.(Γ5.0,即得到生防懸浮劑。
7.—種權(quán)利要求4所述生防緩釋膠囊劑的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟: 1)先將所述鏈霉菌發(fā)酵得到的發(fā)酵液，在400(Tl0000;r/min條件下離心5 20min,得到發(fā)酵菌液，取廣3份重量的發(fā)酵菌液加入反應(yīng)容器； 2)其次，取f3份重量的明膠或者羧甲基纖維素鈉加水配置成重量百分比為3 8%的水溶液后，加入反應(yīng)容器，并用醋酸溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)物的PH值至3飛； 3)再次，取f3份重量的阿拉伯膠或者海藻膠加水配制成重量百分比為2 8%的水溶液后，加入然應(yīng)容器，繼續(xù)攪拌l(T30min ； 4)然后，向反應(yīng)容器中加入甲醛水溶液固化囊壁，繼續(xù)攪拌l(T30min，即得微膠囊水溶液； 5)最后，將得到微膠囊水溶液離心處理后噴霧干燥處理，即可獲得生防緩釋膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種鏈霉菌及其在防治十字花科根腫病中的應(yīng)用，該鏈霉菌菌種包括瘡痂鏈霉菌(Streptomyces scabiei)WS-24926 CCTCC NOM 2012393和/或尖孢鏈霉菌(Streptomyces cuspidosporus)WS-29246 CCTCC NOM 2012413。所述鏈霉菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵后產(chǎn)生具有強(qiáng)烈抑菌作用的發(fā)酵菌液，該發(fā)酵菌液可用于制備抗植物十字花科根腫病的生防懸浮劑和生防緩釋膠囊劑，用于十字花科根腫病的生物防治。
文檔編號(hào)A01N25/04GK103173385SQ20131004974
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年2月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月7日
發(fā)明者龍同, 萬(wàn)中義, 王開(kāi)梅, 楊自文, 曹春霞, 張志剛, 張亞妮, 閔勇, 廖先清, 方偉, 江愛(ài)兵, 朱志剛, 姚經(jīng)武, 張遵霞 申請(qǐng)人:湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心