專利名稱：一種富硒冬蟲夏草菌絲體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富硒冬蟲夏草菌絲體的制備方法。
背景技術(shù)：
蟲草(Cordyc印s)為我國特有的名貴藥用真菌。蟲草中含有多種生理活性物質(zhì)，中醫(yī)藥文獻(xiàn)認(rèn)為冬蟲夏草味甘性溫，有秘精益氣、保肺補(bǔ)腎、止血化痰的功效。近代醫(yī)學(xué)臨床研究表明，冬蟲夏草能治療勞咳痰血、盜汗、陽痿、遺精、黃膽病、肺結(jié)核及老年衰弱、慢性咳喘等癥，有強(qiáng)壯兼收斂鎮(zhèn)靜的效果。冬蟲夏草所含蟲草素能明顯增強(qiáng)紅細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞的能力，抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移 ，能明顯提升白血球和血小板數(shù)量，迅速改善放化療后的嘔吐惡心、胃口差、頭發(fā)脫落、失眠等癥狀。但天然的冬蟲夏草產(chǎn)量十分稀少，因此，人們采用培養(yǎng)冬蟲夏草菌絲體來替代天然冬蟲夏草。目前，人工蟲草菌絲體的生產(chǎn)多以液體深層發(fā)酵為主。硒是人和動物體內(nèi)必需的一種元素，缺硒可以導(dǎo)致多種癥狀。例如人體缺硒會誘發(fā)心血管疾病、癌癥、克山病及大骨節(jié)病等，而動物缺硒主要表現(xiàn)為白肌病和生長緩慢等。例如牛缺硒時(shí)，會出現(xiàn)骨骼肌和心肌變性，生長緩慢，消瘦，犢牛腹瀉，豬缺硒時(shí)，表現(xiàn)為肝營養(yǎng)不良；仔豬出現(xiàn)白肌病，桑堪心，胃潰瘍等，雞缺硒則會出現(xiàn)胰腺變性壞死，腦軟化，成年雞產(chǎn)蛋率和孵化率都下降等。期刊《湖北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2006年03期文章《富硒蟲草菌絲體的發(fā)酵培養(yǎng)及其生物學(xué)功能研究》采用菌種Cordyceps Sinensis,以鹿糖、大豆粉和玉米粉為基質(zhì)進(jìn)行液體發(fā)酵，在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加微量Na2SeO3,蟲草菌絲體收得率達(dá)2.52%，其中硒含量達(dá)7.90 mg/kg。該文獻(xiàn)中，雖然得到了富硒菌絲體，但是該法使用的基質(zhì)是蔗糖、大豆粉等，成本增高，不具備經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢。啤酒糟(豆柏、麩皮)等因原料不同、生產(chǎn)工藝不同、水分含量不同，使得營養(yǎng)價(jià)值有差異，但從技術(shù)、質(zhì)量、環(huán)保、投資、效益及市場幾方面綜合考慮，通過微生物將這類糟渣轉(zhuǎn)化為營養(yǎng)豐富、適口性好、附加值高、經(jīng)濟(jì)效益顯著的食品添加劑或者微生物飼料是最經(jīng)濟(jì)有效的方法之一。廢渣中含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)，經(jīng)微生物發(fā)酵后，可轉(zhuǎn)變成更加有效的生物活性物質(zhì)，作為動物飼料不僅能夠提高飼料的營養(yǎng)價(jià)值，更能提高畜禽的抗病能力和生產(chǎn)能力。如果將這些活性成分進(jìn)一步分離純化，可以作為食品添加劑甚至是藥品。通過生物技術(shù)對啤酒糟進(jìn)行深加工開發(fā)，可大大提高啤酒糟的利用率和深加工產(chǎn)品的附加值，為企業(yè)變廢為寶提供新思路，提升啤酒生產(chǎn)企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。為此，本申請發(fā)明人嘗試以農(nóng)產(chǎn)副產(chǎn)物酒糟作為發(fā)酵的培養(yǎng)基，以蟲草菌絲體中硒含量為發(fā)酵指標(biāo)，對冬蟲夏草進(jìn)行富硒液態(tài)發(fā)酵，生產(chǎn)飼料添加劑。

發(fā)明內(nèi)容
為了獲得營養(yǎng)和藥用價(jià)值較高的富硒蟲草菌絲體，克服發(fā)酵成本過高，造成不利于工業(yè)化生產(chǎn)的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種新的培養(yǎng)條件易于實(shí)現(xiàn)、生產(chǎn)成本低、設(shè)備投資少，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的富硒蟲草菌絲體的生產(chǎn)工藝。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種富硒冬蟲夏草菌絲體的制備方法，所述方法包括:將冬蟲夏草菌種(常規(guī)菌株，市購可得)接種至啤酒糟為基質(zhì)的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，2(T30°C、12(T200r/min條件下培養(yǎng)Γ8天，于發(fā)酵液中得到所述富硒蟲草菌絲體；所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制:啤酒糟l(T50g/L，Na2SeO3 l(T30mg/L，溶劑為水，pH 4 8。所得發(fā)酵液可進(jìn)一步按常規(guī)方法進(jìn)行分離獲得所述富硒蟲草菌絲體。將所得的蟲草菌絲體粉碎，草酸銨溶液提取f 4 h，以提取物刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞，觀察細(xì)胞增值情況，結(jié)果顯示50(^g/mL時(shí)細(xì)胞增值率為296.32% (為實(shí)施例8所得的數(shù)據(jù))，可見本發(fā)明方法制得的富硒蟲草菌絲體具有較強(qiáng)的生物活性。優(yōu)選的，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制:啤酒糟2(T40g/L，Na2SeO315 25mg/L，溶劑為水，pH 5 7。優(yōu)選的，所述發(fā)酵在22 28°C、12(Tl80r/min條件下進(jìn)行。本發(fā)明所述的菌體接種量為常規(guī)接種量，一般在5 15%(ν/ν，種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基體積比)，優(yōu)選為10%，種子液可按常規(guī)方法進(jìn)行種子培養(yǎng)獲得。具體的，本發(fā)明方法可按如下步驟進(jìn)行:I)種子液培養(yǎng):先將制備好的斜面培養(yǎng)基上的母種用接種鏟取一塊約20 mm2大小的菌苔接入種子培養(yǎng)基(蔗糖50g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L，溶劑為水)，裝樣量為100mL/250mL的三角瓶中，在25°C、160r/min恒溫振蕩器上發(fā)酵3天，形成微小的菌球；2)發(fā)酵培養(yǎng)基配制:啤酒糟l(T50g/L，Na2SeO3 l(T30mg/L，溶劑為水，pH 4 8 (用以 0.1N HCl 和 0.1N Na OH 調(diào)整)；3)發(fā)酵培養(yǎng)基120°C滅菌20分鐘，種子液以5 15% (v/v，種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基體積比)接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，2(T3(rC、12(T200r/min條件下培養(yǎng)4 8天。4)所得發(fā)酵液經(jīng)60目篩過濾，并反復(fù)沖洗三次，再過濾，干燥，即得富硒蟲草菌絲體。本發(fā)明可以通過控制培養(yǎng)條件，獲得一定硒富集度的蟲草菌絲體；且本發(fā)明所制得的富硒蟲草菌絲體具有良好的生物學(xué)活性。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法反應(yīng)條件溫和、生產(chǎn)成本低、設(shè)備投資少，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化，獲得的菌絲體具有較強(qiáng)的生物學(xué)活性，從而有望在動物疾病的預(yù)防和治療上取得突破。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此:實(shí)施例1:出發(fā)菌株:菌株冬蟲夏草I號購自山東梁山縣正大菌業(yè)科技開發(fā)中心。種子培養(yǎng):制備好的斜面培養(yǎng)基上的母種用接種鏟取一塊約20 mm2大小的菌苔接入種子培養(yǎng)基(蔗糖50g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L，溶劑為水)，裝樣量為100mL/250mL的三角瓶中，在25°C、160r/min恒溫振蕩器上發(fā)酵3天，種子液中形成微小的菌球。優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基中啤酒糟的濃度，分別選擇10g/L，20g/L, 30g/L, 40g/L和50g/L，添加25mg/L Na2SeO3, pH值調(diào)整為6，種子液接種量為10%，在溫度為22°C，搖瓶轉(zhuǎn)速為160r/min條件下，培養(yǎng)6天，發(fā)酵液經(jīng)60目篩過濾，并反復(fù)沖洗三次，再過濾，干燥，即得富硒蟲草菌絲體，所得菌絲體量及菌絲體中有機(jī)硒量結(jié)果見下表。
權(quán)利要求
1.一種富硒冬蟲夏草菌絲體的制備方法，所述方法包括:將冬蟲夏草菌種接種至啤酒糟為基質(zhì)的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，2(T30°C、12(T200r/min條件下培養(yǎng)Γ8天，于發(fā)酵液中得到所述富硒蟲草菌絲體；所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制:啤酒糟 l(T50g/L，Na2SeO3 10 30mg/L，溶劑為水，pH 4 8。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制:啤酒糟 20 40g/L，Na2SeO3 15 25mg/L，溶劑為水，pH 5 8。
3.如權(quán)利要 求1所述的方法，其特征在于:所述發(fā)酵在2(T28°C、12(Tl80r/min條件下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種富硒冬蟲夏草菌絲體的制備方法，所述方法包括將冬蟲夏草菌種接種至啤酒糟為基質(zhì)的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，20~30℃、120~200r/min條件下培養(yǎng)4~8天，于發(fā)酵液中得到所述富硒蟲草菌絲體；所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制啤酒糟10~50g/L，Na2SeO3 10~30mg/L，溶劑為水，pH4~8。所得發(fā)酵液可進(jìn)一步按常規(guī)方法進(jìn)行分離獲得所述富硒蟲草菌絲體。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法反應(yīng)條件溫和、生產(chǎn)成本低、設(shè)備投資少，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化，獲得的菌絲體具有較強(qiáng)的生物學(xué)活性，從而有望在動物疾病的預(yù)防和治療上取得突破。
文檔編號A23K1/00GK103070011SQ20131000571
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月7日
發(fā)明者楊勝利 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)