專利名稱：一種球蘭組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種球蘭組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
隨著植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，球蘭通過組培技術(shù)進(jìn)行商業(yè)化批量培育生產(chǎn)已是趨勢。傳統(tǒng)的球蘭的培育幾乎都是通過扦插繁殖法，但此繁殖法生根慢，成活移植后，發(fā)苗勢不旺，生長也比較緩慢。因此，通過組織培養(yǎng)技術(shù)來繁殖球蘭，是解決以上繁殖問題的重要技術(shù)手段。目前，球蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室階段性實(shí)驗(yàn)已有報(bào)道，有了建立起無菌系并能擴(kuò)繁的先例，然而此技術(shù)日前還只停留在實(shí)驗(yàn)室可行階段，只是提供了應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)的手段，而非是良好運(yùn)用組織培養(yǎng)技術(shù)的方法。隨著市場的需要，組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用在球蘭的培育上，主要是期望能進(jìn)行批量生產(chǎn)并提高瓶苗的移栽成活率，這也是目前亟待解決的重點(diǎn)問題。而要提高瓶苗的質(zhì)量和移栽成活率，在球蘭組織培養(yǎng)的過程中，組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方是關(guān)鍵。而采用現(xiàn)有的球蘭組織培養(yǎng)基配方進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，球蘭組織培養(yǎng)瓶苗的成活率低，使用效果差，限制了球蘭繁殖技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種球蘭組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基，通過在球蘭組織培養(yǎng)的不同階段選擇不同的類型及配方，大大提高了球蘭組培苗的質(zhì)量，使球蘭的組培苗繁殖得到有效地提高，從而促進(jìn)球蘭的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的另一目的是提供一種利用上述球蘭組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基進(jìn)行球蘭組織培養(yǎng)的方法。為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是提供一種球蘭組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基，其特征在于，包含用下述原料配制成的各種培養(yǎng)基外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg · L—1，基本培養(yǎng)基MS，激動(dòng)素KT O. 5
1.Omg · L1jB-節(jié)基嘿呤 6-BA O. 5 1. Omg · L S 和蔡乙酸 NAA O. 5 1. Omg · L 1 ；增殖繼代培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg · L—1，基本培養(yǎng)基MS，6_芐基嘌呤6-BA1. 5
2.Omg ·L \ 蔡乙酸 NAA O. Zmg.L1,赤霉素 GA O. 5 O. 8mg ·L S 和硝酸鋪 Ce (NO3) 3 O. 20
0.30mg · L 1 ；芽分化培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg ·Ι^，基本培養(yǎng)基MS，激動(dòng)素KT O. 5
1.Omg · L \ 蔡乙酸 NAA O. 5mg · L S 赤霉素 GA1. Omg .L1,硝酸倆 La(NO3)3 O. 15
0.20mg · ΙΛ 和硝酸鋪 Ce (NO3) 3 O. 20 O. 30mg · L-1 ；生根培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg · L—1，基本培養(yǎng)基White，赤霉素GA0. 5
1.Omg · L 1J 氯化鑭 LaCl3 10 20mg · L 1 ；生根浸泡液，包括萘乙酸NAA O. 2 1. Omg · I71,赤霉素GA O. 5mg · I71,硝酸鋪Ce (NO3) 3 O. 15 O. 25mg · L S 和氣化倆 LaCl3 15 30mg · L、
本發(fā)明采用的另一個(gè)技術(shù)方案是提供一種球蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟a、外植體選取選擇長勢較好、無病蟲害的若干成熟葉片作為外植體；b、外植體消毒滅菌將外植體的葉片用洗衣粉溶液洗滌，再用清水沖洗10 20分鐘；在超凈工作臺上，用體積分?jǐn)?shù)為65 75%乙醇溶液浸泡5 15s，無菌水沖洗I 3次，再置于升汞溶液中浸泡10 15min，最后用無菌水沖洗4 5次,濾干水分；再將經(jīng)表面滅菌的葉片切成O. 5 2. 5cm2的小塊，待接種。C、組織培養(yǎng)將步驟 b制得的外植體在超凈工作臺上接種于外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30 50天后，將形成的愈傷組織進(jìn)行分切，分別轉(zhuǎn)接于增殖繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；愈傷組織進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)后，再將其轉(zhuǎn)接于芽分化培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽和芽點(diǎn)的促生培養(yǎng)；當(dāng)芽生長為2 3cm高的壯苗時(shí)，放入生根浸泡液中浸泡20 30min，再將浸泡后的壯苗取出，將壯苗表面的液體吸干并轉(zhuǎn)入White培養(yǎng)基中，6-8天后取出，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；d、移栽將進(jìn)行生根培養(yǎng)后的球蘭組培苗進(jìn)行煉苗后移栽。綜上所述本發(fā)明具有以下有益效果(I)本發(fā)明通過在球蘭各階段培養(yǎng)基中采用特定濃度的激素和稀土元素調(diào)配成的培養(yǎng)基對球蘭進(jìn)行培養(yǎng)，解決了通過扦插培育出的球蘭壯苗生長緩慢，出苗不齊，移栽成活率低的問題，所培育出的球蘭組培苗較非稀土配方培養(yǎng)基培育出的苗質(zhì)量高，葉片健康，根系發(fā)達(dá)，出芽及生根率都得到保障，從而打破了僅能在實(shí)驗(yàn)室培育的限制，使球蘭的組培苗繁殖得到有效地提高，進(jìn)而促進(jìn)球蘭的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。(2)本發(fā)明在球蘭培養(yǎng)基中加入特定濃度和種類的稀土元素，該稀土元素在特定的濃度下對培養(yǎng)基中添加的其它生長調(diào)節(jié)物質(zhì)有促進(jìn)作用，如稀土元素可增加植物體中生長素的含量，稀土元素對GA活性有促進(jìn)作用，鑭對植物生根有促進(jìn)生長的作用；該稀土元素與其它生長調(diào)節(jié)物質(zhì)之間的相互作用，使本發(fā)明的培養(yǎng)基配方更有利于球蘭組培苗的生長，大大提高了球蘭組培苗的移栽成活率。(3)本發(fā)明提供的球蘭組織培養(yǎng)方法在球蘭組培苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基之前進(jìn)行生根浸泡液浸泡處理，能有效提高生根率和后期存活率，更易被植物吸收；并在轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基前轉(zhuǎn)入White培養(yǎng)基過渡生長，有效調(diào)整苗的代謝狀態(tài)，使之更易存活。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述，但它們不是對本發(fā)明的進(jìn)一步限制。實(shí)施例1培養(yǎng)基配方外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基瓊脂7g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 5mg · L^+6-芐基嘿呤 6-BA O. 5mg .L1+ 蔡乙酸 NAA O. 5mg · L 1 ；增殖繼代培養(yǎng)基瓊脂7g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+6-芐基嘌呤6-BA1. 5mg · Γ1+萘乙酸 NAA O. 2mg .L1+ 赤霉素 GA O. 5mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 30· 20mg · L 1 ；芽分化培養(yǎng)基瓊脂7g .171+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 5mg · L—1+萘乙酸NAA O. 5mg · L W 赤霉素 GA1. Omg · L k 硝酸倆 La (NO3) 30· 15mg · L W 硝酸鋪 Ce (NO3) 3O. 20mg · L 1 ；生根培養(yǎng)基瓊脂7g .171+基本培養(yǎng)基White+赤霉素GA O. 5mg .171+氯化鑭LaCl3IOmg · L-1 ；生根浸泡液，包括萘乙酸NAA O. 2mg · L_\赤霉素GA O. 5mg · L_\硝酸鋪Ce(NO3)3O. 15mg .L1+ 氣化倆 LaCl315mg · L、采用上述培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法如下a、外植體選取從市場上買入較好的球蘭品種，選擇長勢較好，無病蟲害的若干成熟葉片作為外植體。b、外植體消毒滅菌將外植體的葉片用洗衣粉溶液洗滌,然后用清水沖洗20分 鐘；在超凈工作臺上，用體積分?jǐn)?shù)為65%乙醇溶液浸泡15s，無菌水沖洗2次，再置于O. 1%升汞溶液中浸泡lOmin，最后用無菌水沖洗4 5次,濾干水分；用解剖刀將經(jīng)表面滅菌的葉片切成O. 5cm2的小塊，待接種。C、培養(yǎng)基制備①基本堵養(yǎng)基MS和White的制備根據(jù)基本培養(yǎng)基MS和White成分及用量稱取藥品，使其充分溶解，并按相應(yīng)濃度分別依次取用，先量取大量元素母液，再依次加入微量元素母液、鐵鹽母液和有機(jī)成分。②再按外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖繼代培養(yǎng)基、芽分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及生根浸泡液來加入激素及稀土，其分別添加為外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基瓊脂7g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 5mg · L^+6-芐基嘿呤 6-BA O. 5mg .L1+ 蔡乙酸 NAA O. 5mg · L 1 ；增殖繼代培養(yǎng)基瓊脂7g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+6-芐基嘌呤6-BA1. 5mg · Γ1+萘乙酸 NAA O. 2mg .L1+ 赤霉素 GA O. 5mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 30· 20mg · L 1 ；芽分化培養(yǎng)基瓊脂7g .171+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 5mg · L—1+萘乙酸NAA O. 5mg · L W 赤霉素 GA1. Omg · L k 硝酸倆 La (NO3) 3 O. 15mg · L W 硝酸鋪 Ce (NO3) 3O. 20mg · L 1 ；生根培養(yǎng)基瓊脂7g .171+基本培養(yǎng)基White+赤霉素GA O. 5mg .171+氯化鑭LaCl3IOmg · L-1 ；生根浸泡液，包括萘乙酸NAA O. 2mg · Γ1，赤霉素GA O. 5mg · Γ1，硝酸鈰Ce (NO3) 3O. 15mg .L1+ 氯化鑭 LaCl315mg · L、③溶化瓊脂稱取瓊脂7g · L—1，用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂，待瓊脂完全熔化后，把調(diào)配好的激素和稀土元素溶液加入，用PH試紙測pH值，并用O. lmol/L的NaOH或HCl調(diào)節(jié)PH值為5. 8，最后加水定容至所需體積。④分裝將配好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中，分裝時(shí)注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上，以防引起污染，然后用封口膜或瓶蓋封口，裝入高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。d、組織培養(yǎng)將步驟b制得的外植體在超凈工作臺上接種于外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30天后，將形成的愈傷組織用解剖刀進(jìn)行分切，分別轉(zhuǎn)接于增殖繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；愈傷組織進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)后，再將其轉(zhuǎn)接于芽分化培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽和芽點(diǎn)的促生培養(yǎng)；當(dāng)芽生長至2 3cm高的壯苗時(shí)，從瓶中取出，放入生根浸泡液中浸泡20min，再將浸泡后的壯苗取出，將壯苗用無菌吸水紙將表面液體吸干并轉(zhuǎn)入White培養(yǎng)基中，7天后取出，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。e、移栽將生根后的球蘭組培苗進(jìn)行煉苗后移栽。實(shí)施例2培養(yǎng)基配方外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基瓊脂IOg · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT1. Omg · L^+6-芐基嘌呤 6-BA1. Omg · Γ1+ 萘乙酸 NAA1. Omg · Γ1 ；增殖繼代培養(yǎng)基瓊脂IOg -Γ1+基本培養(yǎng)基MS+6-芐基嘌呤6-BA 2. Omg -Γ1+萘乙酸 NAA O. 2mg .L1+ 赤霉素 GA O. 8mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 3 O. 30mg · L 1 ；芽分化培養(yǎng)基瓊脂IOg · L—1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT1. Omg · L—1+萘乙酸 NAA O. 5mg · L W 赤霉素 GA1. Omg · L k 硝酸倆 La (NO3) 3 O. 20mg · L W 硝酸鋪 Ce (NO3) 3O. 30mg · L 1 ；生根培養(yǎng)基瓊脂IOg · I71+基本培養(yǎng)基White+赤霉素GA1. Omg · I71+氯化鑭LaCl3 20mg · L 1 ；生根浸泡液，包括萘乙酸NAA1. Omg · Γ1，赤霉素GA O. 5mg · Γ1，硝酸鈰Ce (NO3) 3O. 25mg .L1+ 氣化倆 LaCl330mg · L、采用上述培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法如下a、外植體選取從市場上買入較好的球蘭品種，選擇長勢較好，無病蟲害的若干成熟葉片作為外植體。b、外植體消毒滅菌將外植體的葉片用洗衣粉溶液洗滌,然后用清水沖洗10分鐘；在超凈工作臺上，用體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇溶液浸泡10s，無菌水沖洗3次，再置于O. 1%升汞溶液中浸泡15min，最后用無菌水沖洗4 5次,濾干水分；用解剖刀將經(jīng)表面滅菌的葉片切成1. 5cm2的小塊，待接種。C、培養(yǎng)基制備①基本培養(yǎng)基MS和White的制備根據(jù)基本培養(yǎng)基MS和White成分及用量稱取藥品，使其充分溶解，并按相應(yīng)濃度分別依次取用，先量取大量元素母液，再依次加入微量元素母液、鐵鹽母液和有機(jī)成分。②再按外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及生根浸泡液來加入激素及稀土，其分別添加為外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基瓊脂IOg · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT1. Omg · L^+6-芐基嘌呤 6-BA1. Omg · Γ1+ 萘乙酸 NAA1. Omg · Γ1 ；增殖繼代培養(yǎng)基瓊脂IOg -Γ1+基本培養(yǎng)基MS+6-芐基嘌呤6-BA 2. Omg -Γ1+萘乙酸 NAA O. 2mg .L1+ 赤霉素 GA O. 8mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 3 O. 30mg · L 1 ；芽分化培養(yǎng)基瓊脂IOg · L—1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT1. Omg · L—1+萘乙酸NAA O. 5mg · L W 赤霉素 GA1. Omg · L k 硝酸倆 La (NO3) 3 O. 20mg · L W 硝酸鋪 Ce (NO3) 3O. 30mg · L 1 ；生根培養(yǎng)基瓊脂IOg · I71+基本培養(yǎng)基White+赤霉素GA1. Omg · I71+氯化鑭LaCl3 20mg · L 1 ；生根浸泡液，包括萘乙酸NAA1. Omg · Γ1，赤霉素GA O. 5mg · Γ1，硝酸鈰Ce (NO3) 3O. 25mg .L1+ 氣化倆 LaCl3 30mg · L、
③溶化瓊脂稱取瓊脂IOg ·Ι^，用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂，待瓊脂完全熔化后，把調(diào)配好的激素和稀土元素溶液加入，用PH試紙測pH值，并用O. lmol/L的NaOH或HCl調(diào)節(jié)PH值為5. 8，最后加水定容至所需體積。④分裝將配好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中，分裝時(shí)注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上，以防引起污染，然后用封口膜或瓶蓋封口，裝入高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。d、組織培養(yǎng)將步驟b制得的外植體在超凈工作臺上接種于外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)50天后，將形成的愈傷組織用解剖刀進(jìn)行分切，分別轉(zhuǎn)接于增殖繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；愈傷組織進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)后，再將其轉(zhuǎn)接于芽分化培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽和芽點(diǎn)的促生培養(yǎng)；當(dāng)芽生長至2 3cm高的壯苗時(shí)，從瓶中取出，放入生根浸泡液中浸泡30min，再將浸泡后的壯苗取出，將壯苗用無菌吸水紙將表面液體吸干并轉(zhuǎn)入White培養(yǎng)基中，6天后取出，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。
e、移栽將生根后的球蘭組培苗進(jìn)行煉苗后移栽。實(shí)施例3培養(yǎng)基配方外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基瓊脂6g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 80mg · L^+6-芐基嘌呤 6-BA O. 8mg · Γ1+ 萘乙酸 NAA O. 75mg · Γ1 ；增殖繼代培養(yǎng)基瓊脂6g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+6-芐基嘌呤6-BA1. 7mg · Γ1+萘乙酸 NAA O. 2mg .L1+ 赤霉素 GA O. 6mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 30· 25mg · L 1 ；芽分化培養(yǎng)基瓊脂6g · L—1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 7mg · L—1+萘乙酸NAA O. 5mg .L1+ 赤霉素 GA1. Omg .L1+ 硝酸倆 La(NO3) 3 O. 18mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 3O. 25mg · L 1 ；生根培養(yǎng)基瓊脂6g · I71+基本培養(yǎng)基White+赤霉素GA O. 75mg · I71+氯化鑭LaCl3 15mg · L 1 ； 生根浸泡液，包括萘乙酸NAA O. 6mg · L—1，赤霉素GA O. 5mg · L—1，硝酸鈰Ce (NO3) 3O. 20mg .L1+ 氣化倆 LaCl3 23mg · L、采用上述培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法如下a、外植體選取從市場上買入較好的球蘭品種，選擇長勢較好，無病蟲害的若干成熟葉片作為外植體。b、外植體消毒滅菌將外植體的葉片用洗衣粉溶液洗滌,然后用清水沖洗15分鐘；在超凈工作臺上，用體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇溶液浸泡5s，無菌水沖洗I次，再置于O. 1%升汞溶液中浸泡13min，最后用無菌水沖洗4 5次,濾干水分；用解剖刀將經(jīng)表面滅菌的葉片切成2. 5cm2的小塊，待接種。C、培養(yǎng)基制備①基本培養(yǎng)基MS和White的制備根據(jù)基本培養(yǎng)基MS和White成分及用量稱取藥品，使其充分溶解，并按相應(yīng)濃度分別依次取用，先量取大量元素母液，再依次加入微量元素母液、鐵鹽母液和有機(jī)成分。②再按外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖繼代培養(yǎng)基、芽分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及生根浸泡液來加入激素及稀土，其分別添加為外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基瓊脂6g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 80mg · L^+6-芐基嘌呤 6-BA O. 8mg · Γ1+ 萘乙酸 NAA O. 75mg · Γ1 ；增殖繼代培養(yǎng)基瓊脂6g · Γ1+基本培養(yǎng)基MS+6-芐基嘌呤6-BA1. 7mg · Γ1+萘乙酸 NAA O. 2mg .L1+ 赤霉素 GA O. 6mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 3 O. 25mg · L 1 ；芽分化培養(yǎng)基瓊脂6g · L—1+基本培養(yǎng)基MS+激動(dòng)素KT O. 7mg · L—1+萘乙酸NAA O. 5mg .L1+ 赤霉素 GA1. Omg .L1+ 硝酸倆 La(NO3) 3 O. 18mg .L1+ 硝酸鋪 Ce (NO3) 3O. 25mg · L 1 ；生根培養(yǎng)基瓊脂6g · I71+基本培養(yǎng)基White+赤霉素GA O. 75mg · I71+氯化鑭LaCl3 15mg · L 1 ；生根浸泡液，包括萘乙酸NAA O. 6mg · Γ1，赤霉素GA O. 5mg · Γ1，硝酸鈰Ce (NO3) 3O. 20mg .L1+ 氣化倆 LaCl3 23mg · L、
③溶化瓊脂稱取瓊脂6g · L—1，用蒸餾水加熱燒開熔化瓊脂，待瓊脂完全溶熔化后，把調(diào)配好的激素和稀土元素溶液加入，用PH試紙測pH值，并用O. lmol/L的NaOH或HCl調(diào)節(jié)PH值為5. 8，最后加水定容至所需體積。④分裝將配好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶中，分裝時(shí)注意不要把培養(yǎng)基倒在瓶口上，以防引起污染，然后用封口膜或瓶蓋封口，裝入高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。d、組織培養(yǎng)將步驟b制得的外植體在超凈工作臺上接種于外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)40天后，將形成的愈傷組織用解剖刀進(jìn)行分切，分別轉(zhuǎn)接于增殖繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；愈傷組織進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)后，再將其轉(zhuǎn)接于芽分化培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽和芽點(diǎn)的促生培養(yǎng)；當(dāng)芽生長至2 3cm高的壯苗時(shí)，從瓶中取出，放入生根浸泡液中浸泡25min，再將浸泡后的壯苗取出，將壯苗用無菌吸水紙將表面液體吸干并轉(zhuǎn)入White培養(yǎng)基中，8天后取出，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。e、移栽將生根后的球蘭組培苗進(jìn)行煉苗后移栽。雖然結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
進(jìn)行了詳細(xì)地描述，但并非是對本專利保護(hù)范圍的限定。在權(quán)利要求書所限定的范圍內(nèi)，本領(lǐng)域的技術(shù)人員不經(jīng)創(chuàng)造性勞動(dòng)即可做出的各種修改或調(diào)整仍受本專利的保護(hù)。
權(quán)利要求
1.一種球蘭組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基，其特征在于，包含用下述原料配制成的各種培養(yǎng)基 外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg · L—1，基本培養(yǎng)基MS，激動(dòng)素KT O. 5 1.Omg · L1jB-節(jié)基嘿呤 6-BA O. 5 1. Omg · L S 和蔡乙酸 NAA O. 5 1. Omg · L 1 ； 增殖繼代培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg · L—1，基本培養(yǎng)基MS，6-芐基嘌呤6-BA1.5 2.Omg ·L \ 蔡乙酸 NAA O. Zmg.L1,赤霉素 GA O. 5 O. 8mg ·L S 和硝酸鋪 Ce (NO3) 3 O. 20 O. 30mg · L 1 ； 芽分化培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg · ΙΛ基本培養(yǎng)基MS，激動(dòng)素KT O. 5 1. Omg · L_S蔡乙酸 NAA O. 5mg · L S 赤霉素 GA1. Omg · L \ 硝酸倆 La(NO3) 3 O. 15 O. 20mg · L S 和硝酸鈰 Ce (NO3) 3 O. 20 O. 30mg · L-1 ； 生根培養(yǎng)基，包括瓊脂6 IOg · L—1，基本培養(yǎng)基White,赤霉素GA0. 5 1. Omg · L-1，氯化鑭 LaCl3 10 20mg · L 1 ； 生根浸泡液，包括萘乙酸NAA O. 2 1. Omg · Λ赤霉素GA O. 5mg · Λ硝酸鈰Ce (NO3) 3O. 15 O. 25mg · L \ 和氣化倆 LaCl3 15 30mg · L、
2.—種球蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟 a、外植體選取選擇長勢較好、無病蟲害的若干成熟葉片作為外植體； b、外植體消毒滅菌將外植體的葉片用洗衣粉溶液洗滌,再用清水沖洗10 20分鐘；在超凈工作臺上，用體積分?jǐn)?shù)為65 75%乙醇溶液浸泡5 15s，無菌水沖洗I 3次，再置于升汞溶液中浸泡10 15min，最后用無菌水沖洗4 5次,濾干水分；再將經(jīng)表面滅菌的葉片切成O. 5 2. 5cm2的小塊，待接種。
C、組織培養(yǎng)將步驟b制得的外植體在超凈工作臺上接種于外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30 50天后，將形成的愈傷組織進(jìn)行分切，分別轉(zhuǎn)接于增殖繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；愈傷組織進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)后，再將其轉(zhuǎn)接于芽分化培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽和芽點(diǎn)的促生培養(yǎng)；當(dāng)芽生長為2 3cm高的壯苗時(shí)，放入生根浸泡液中浸泡20 30min，再將浸泡后的壯苗取出，將壯苗表面的液體吸干并轉(zhuǎn)入White培養(yǎng)基中，6-8天后取出，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)； d、移栽將進(jìn)行生根培養(yǎng)后的球蘭組培苗進(jìn)行煉苗后移栽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種球蘭組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，該培養(yǎng)基包含由瓊脂、基本培養(yǎng)基MS、激動(dòng)素KT、6-芐基嘌呤6-BA和萘乙酸NAA組成的外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，由瓊脂、基本培養(yǎng)基MS、6-芐基嘌呤6-BA、萘乙酸NAA、赤霉素GA和硝酸鈰組成的增殖繼代培養(yǎng)基，由瓊脂、基本培養(yǎng)基MS、激動(dòng)素KT、萘乙酸NAA、赤霉素GA、硝酸鑭La(NO3)3和硝酸鈰Ce(NO3)3組成的芽分化培養(yǎng)基，由瓊脂、基本培養(yǎng)基White、赤霉素GA、氯化鑭LaCl3組成的生根培養(yǎng)基，和生根浸泡液；該培養(yǎng)基大大提高了球蘭組培苗的質(zhì)量，使球蘭的組培苗繁殖得到有效地提高，進(jìn)而促進(jìn)球蘭的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK103004608SQ20131000527
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月8日
發(fā)明者葉萌, 唐敏, 段曉宇, 汪維雙 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)