一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于獸藥的【技術(shù)領(lǐng)域】，本發(fā)明公開了一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法，包括以下操作步驟：（1）提供雌性昆明小鼠，小鼠的年齡為10周齡，小鼠體重為22~25g，動(dòng)物級(jí)別為SPF級(jí)；（2）提供Buxco無創(chuàng)檢測(cè)系統(tǒng)，該Buxco無創(chuàng)密閉體描艙連接有聲音監(jiān)聽設(shè)備和信號(hào)轉(zhuǎn)化器，將上述小鼠置于體描艙內(nèi)自由活動(dòng)；(3)使用氨水霧化激發(fā)小鼠咳嗽，實(shí)時(shí)監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音，通過聲音分析軟件記錄聲波，并通過Finepointe軟件將艙內(nèi)氣流變化轉(zhuǎn)化為呼吸波形進(jìn)行記錄并自動(dòng)實(shí)時(shí)分析。本方法同時(shí)監(jiān)測(cè)小鼠咳嗽聲音和呼吸波形，可大大降低工作強(qiáng)度，節(jié)省工作時(shí)間，提高工作效率，有利于小鼠咳嗽模型的推廣和應(yīng)用。
【專利說明】一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于獸藥研究領(lǐng)域，涉及一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]由于生理解剖結(jié)構(gòu)微小，聲音信號(hào)極為微弱，研究較少且結(jié)果不一，小鼠有無咳嗽目前在國際上還存在很大爭(zhēng)議。印度學(xué)者和墨西哥學(xué)者將藥物刺激后的小鼠用漏斗形裝置罩住，將聽診器置于頂端進(jìn)行小鼠聲音的監(jiān)測(cè)，但結(jié)果相對(duì)主觀且不能記錄分析。我國的吳康松于2002年發(fā)表了小鼠咳嗽模型的建立方法,主要模仿日本的Junzo Kamei教授的檢測(cè)方法進(jìn)行，并沒有進(jìn)行特殊的改進(jìn)。Kamei教授自上世紀(jì)九十年代起開始并堅(jiān)持使用小鼠咳嗽模型進(jìn)行鎮(zhèn)咳藥的研究，是目前使用小鼠咳嗽模型最多的學(xué)者。他使用雙腔體描艙將小鼠的頭部和身體分處于相對(duì)獨(dú)立的密閉艙中，小鼠處于清醒半固定狀態(tài)，定量霧化氨水，連接呼吸波形描記儀檢測(cè)胸部氣流的變化，主要通過觀察小鼠腹部急速抽搐運(yùn)動(dòng)同時(shí)合并異常呼吸波形進(jìn)行咳嗽的判斷。但由于沒有咳嗽聲音檢測(cè)，因此說服力較弱。因始終未能像豚鼠一樣得到聲音和波形的統(tǒng)一，小鼠咳嗽檢測(cè)至今未得到學(xué)術(shù)界的公認(rèn)，小鼠咳嗽聲音檢測(cè)是逾越這一障礙的關(guān)鍵。
[0003]豚鼠性情溫和，咳嗽反射容易引出，聲音響亮可直接聽到，自1955年Charles監(jiān)聽豚鼠咳嗽聲音以來，豚鼠一直是進(jìn)行咳嗽反射機(jī)制及咳嗽新藥研究的最常用動(dòng)物。2004年美國Buxco公司和諾華公司共同研發(fā)了豚鼠咳嗽自動(dòng)檢測(cè)軟件，其人工檢測(cè)和軟件自動(dòng)檢測(cè)的符合率已達(dá)到98%以上，在2005年ATS大會(huì)發(fā)布后得到了廣泛的認(rèn)可。雖然豚鼠的咳嗽檢測(cè)已十分成熟，但使用豚鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)成本較高，豚鼠體質(zhì)嬌嫩容易死亡，篩選藥物時(shí)藥物耗費(fèi)大，難以進(jìn)行多組及大批量研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法。
[0005]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法，包括以下操作步驟:
(I)提供雌性昆明小鼠，小鼠的年齡為8~12周齡，小鼠體重為22~25g，動(dòng)物級(jí)別為SPF 級(jí)；
(2)利用Buxco無創(chuàng)檢測(cè)系統(tǒng)，該Buxco無創(chuàng)密閉體描艙連接有聲音監(jiān)聽設(shè)備和信號(hào)轉(zhuǎn)化器，將上述小鼠置于體描艙內(nèi)自由活動(dòng)；
(3)使用辣椒素激發(fā)液霧化激發(fā)小鼠咳嗽，實(shí)時(shí)監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音，通過聲音分析軟件記錄聲波，并通過Finepointe軟件將艙內(nèi)氣流變化轉(zhuǎn)化為呼吸波形進(jìn)行記錄并自動(dòng)實(shí)時(shí)分析。
[0006]步驟(1)所述小鼠的年齡優(yōu)選為10周齡。
[0007]步驟(2)所述聲音監(jiān)聽設(shè)備為微型麥克風(fēng)。[0008]步驟(3)所述辣椒素激發(fā)液的濃度為10 μ mol/L ;所述氨水激發(fā)液的霧化劑量為
2.0ml/3mino
[0009]步驟(3)所述聲音分析軟件為cooledit軟件。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，僅需在監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音的同時(shí)觀察小鼠咳嗽呼吸波形即可即時(shí)確定小鼠咳嗽，在小鼠咳嗽檢測(cè)同時(shí)就能得到最終數(shù)據(jù)。具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果:
(1)本發(fā)明利用原本用于肺功能檢測(cè)的Buxco的無創(chuàng)肺功能檢測(cè)系統(tǒng)儀器裝置，來進(jìn)行小鼠咳嗽的檢測(cè)，這是國際首創(chuàng)；
(2)直接監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音，并記錄保存進(jìn)行回放分析，從而確?？人詳?shù)據(jù)的客觀性和準(zhǔn)確性，為FP軟件開發(fā)提供可靠的數(shù)據(jù)來源；
(3)小鼠呼吸波形分析更為細(xì)致，通過Buxco系統(tǒng)FP軟件得到的呼吸波形區(qū)分為7類，可更加準(zhǔn)確地辨認(rèn)性質(zhì)特征；
(4)無需觀察小鼠腹部運(yùn)動(dòng)情況，減少主觀因素對(duì)判斷的影響；
(5)無需分析聲波變化，避免雜音干擾影響數(shù)據(jù)分析。
[0011](6)本方法可大大降低工作強(qiáng)度，節(jié)省工作時(shí)間，提高工作效率，有利于小鼠咳嗽模型的推廣和應(yīng)用。在本研究基礎(chǔ)上與美國Buxco公司合作開發(fā)的Finepointe小鼠咳嗽檢測(cè)軟件具有較高的相關(guān)性和一致性，顯示了良好的開發(fā)前景和應(yīng)用價(jià)值。
【權(quán)利要求】
1.一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法，其特征在于包括以下操作步驟: (1)提供雌性KM小鼠，小鼠的年齡為8~12周齡,小鼠體重為22~25g,動(dòng)物級(jí)別為SPF 級(jí)； (2)提供Buxco無創(chuàng)檢測(cè)系統(tǒng)，該Buxco無創(chuàng)密閉體描艙連接有聲音監(jiān)聽設(shè)備和信號(hào)轉(zhuǎn)化器，將上述小鼠置于體描艙內(nèi)自由活動(dòng)； (3)使用辣椒素激發(fā)液霧化激發(fā)小鼠咳嗽，實(shí)時(shí)監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音，通過聲音分析軟件記錄聲波，并通過Finepointe軟件將艙內(nèi)氣流變化轉(zhuǎn)化為呼吸波形進(jìn)行記錄并自動(dòng)實(shí)時(shí)分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(1)所述小鼠的年齡為10周齡。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(2)所述聲音監(jiān)聽設(shè)備為微型麥克風(fēng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(3)所述氨水的濃度為lOymol/L;所述氨水的霧化劑量為2.0ml/3min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(3)所述聲音 分析軟件為cooledit軟件。
【文檔編號(hào)】A61D7/00GK103876855SQ201210561734
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2012年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月22日
【發(fā)明者】邱梅, 沈巍, 王德軍 申請(qǐng)人:青島康地恩藥業(yè)股份有限公司