專利名稱：海鮮菇液體菌種發(fā)酵工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物工程領(lǐng)域，具體的說是一種海鮮菇液體菌種發(fā)酵工藝方法。
背景技術(shù)：
海鮮燕，學(xué)名[Hypsizygusmarmoreus (Peck) H. E. Bigelow],中文名真姬燕，又名玉蕈、斑玉蕈，質(zhì)地脆嫩，味道鮮美，具有海蟹味，在日本稱之為“蟹味菇”、“海鮮菇”。海鮮菇營養(yǎng)豐富，是近年來十分具有商業(yè)潛力的食用菌品，目前多為工廠化栽培。現(xiàn)階段海鮮菇的栽培是固體菌種栽培法，在試管中的固體斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)好菌種之后直接從試管中接入菌包中，上述固體菌種栽培法接種時完全依靠人工，效率較低。此夕卜，固體菌種培養(yǎng)過程是靜止的，在靜止的條件下，在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周圍，形成透過養(yǎng)分的壁障，養(yǎng)分的攝入受到阻礙，導(dǎo)致菌種的活力低，培養(yǎng)時間長，間接導(dǎo)致提高了成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種海鮮燕液體菌種發(fā)酵工藝方法，該方法具有培養(yǎng)時間短、菌種活力強、接種效率高的特點。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是海鮮菇液體菌種發(fā)酵工藝方法，其特征是，包括以下步驟(I)培養(yǎng)試管種；將海鮮菇的純菌種接種在試管中的固體斜面培養(yǎng)基上，于21 23°C恒溫培養(yǎng)10 15天；上述的固體斜面培養(yǎng)基由馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖及蒸餾水構(gòu)成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，瓊脂與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，PH自然；(2)將試管種轉(zhuǎn)移到搖瓶中；用接種鉤和接種鏟將試管中固體培養(yǎng)基上的菌種劃分為小塊，在無菌操作下將試管中的菌種接種到搖瓶中的液體培養(yǎng)基上，每個搖瓶中接種6 8塊；上述的液體培養(yǎng)基由馬鈴薯、麩皮、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂及蒸餾水構(gòu)成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，麩皮與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，蛋白胨與蒸餾水的重量比為O. 05 O. 07%，磷酸二氫鉀與蒸餾水的重量比為O. 2%，硫酸鎂與蒸餾水的重量比為O. 05%，并根據(jù)液體培養(yǎng)基體積總量按照10毫克/升的含量添加入維生素BI，PH自然；(3)在搖瓶中培養(yǎng)液體菌種；搖瓶中的菌種在21 23°C靜止培養(yǎng)3 4天后，觀察長勢和有沒有污染雜菌，確定沒有染菌后放置于搖床上，搖床為旋轉(zhuǎn)式搖床，搖床的轉(zhuǎn)速為120 140轉(zhuǎn)/分；然后搖瓶中的菌種于搖床上21 23°C恒溫培養(yǎng)3 4天；(4)將搖瓶中的菌種接種到發(fā)酵罐中；按照菌種與發(fā)酵罐的體積比為10%將菌種接種到發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的內(nèi)壓為正壓且內(nèi)壓小于O. 02兆帕，菌種在發(fā)酵罐中于21 23°C恒溫培養(yǎng)4 6天；
(5)將發(fā)酵罐中的菌種接入菌包；每一個菌包接入菌種的量為15 25毫升，終止發(fā)酵。所述的固體斜面培養(yǎng)基的制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發(fā)芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片，置于鋁鍋加水煮沸30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水；瓊脂按量稱取，剪碎后加入馬鈴薯汁液內(nèi)，微火加熱，不時攪拌直至瓊脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮3 6分鐘，其液汁裝入試管；2)趁熱分裝入試管，裝量為試管長度的1/4 1/5，緊塞棉塞，分裝時應(yīng)注意不使培養(yǎng)基黏附在試管口上，以免雜菌感染；3)及時高壓滅菌,滅菌時將試管每7 10支扎成一捆,棉塞一端用牛皮紙包好,直立放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行蒸汽滅菌，當(dāng)壓力達(dá)O. 05兆帕?xí)r，打開排氣閥，使壓力降至“0”，繼續(xù)加熱，在O. 110兆帕的壓力下保持30 35分鐘，待壓力表自動降到“O”時再打開鍋蓋，取 出試管按照下述操作趁熱擺斜面；4)試管取出后趁熱將試管口一端墊高,斜靠在桌上的小木棒上,使試管內(nèi)培養(yǎng)液斜面長度達(dá)試管長度的2/3 3/5，試管上面覆蓋毛巾，冷卻后即成斜面固體培養(yǎng)基；5)滅菌后置常溫下48小時，未發(fā)現(xiàn)有雜菌產(chǎn)生，即可接種。試管中固體培養(yǎng)基上的菌種劃分為小塊的體積大小為O. 3立方厘米。所述的液體培養(yǎng)基制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發(fā)芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片；麩皮選用新鮮無霉變的大麩，按量稱取后與馬鈴薯同煮，煮沸后文火維持20 30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水和其他原料煮沸然后分裝；2)分裝入搖瓶，容量為1000毫升的搖瓶每瓶裝入500 600毫升，瓶口用棉塞、牛皮紙密封；3)及時高壓滅菌，直立放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行蒸汽滅菌，在O. 12 O. 14兆帕的壓力下保持40分鐘，高壓鍋排兩次冷氣，冷卻壓力降到O. 03兆帕?xí)r緩慢把高壓鍋內(nèi)的壓力排盡；4)冷卻后即成液體培養(yǎng)基。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果I、菌種活力強。液體培養(yǎng)基在通氣或在振蕩的條件下，可消除固體菌種在靜止條件下形成的壁障，從而消除了菌種吸收養(yǎng)分的障礙，且增加供氧量，所以有利于細(xì)胞生長，提高生產(chǎn)量；僅培養(yǎng)4 6天的菌絲體，正值生長旺盛期，生活力強，接種后，菌絲恢復(fù)生長快，發(fā)菌時間短，菌絲健壯。液體菌種發(fā)滿菌的時間為29 33天，固體菌種40天左右。2、制種周期短。固體菌種制種周期需70 95天，而液體菌種制種周期為24 35天，縮短了一半以上。3、接種速度快。固體菌種接種時完全依靠人工，接種速度為125 150包/人/小時；而液體菌種接種時可采用接種槍，實現(xiàn)了半機械化，接種速度能夠達(dá)到400包/人/小時，效率高，節(jié)省人力，從而節(jié)約了生產(chǎn)成本。4、菌齡一致。固體菌種，瓶或袋上下部的菌齡差異很大，瓶底前端的菌絲正處于萌動階段，而上層表面的菌絲已接近老化程度，上下部菌絲的菌齡相差20 30天。液體菌種因含有許多小的菌絲球和菌絲片段，可以形成許多生長中心，多點同步增殖，菌絲體生長發(fā)育比較整齊、均勻，菌齡比較一致。5、污染率低。液體接種各環(huán)節(jié)無菌條件可控，從而減少了人為因素造成的污染；此夕卜，液體接種方式速度快，使菌包敞口時間縮短，大大縮短了外界空氣與物料的接觸時間，從而減少了污染機率。固體接種污染率在5 15%，液體接種污染率可控制在1%。以內(nèi)。
具體實施例方式海鮮菇液體菌種發(fā)酵工藝方法，包括以下步驟(I)培養(yǎng)試管種；將海鮮菇的純菌種接種在試管中的固體斜面培養(yǎng)基上，于23°C恒溫培養(yǎng)14天；上述的固體斜面培養(yǎng)基的配方是馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，蒸餾水1000克，PH自然； 所述的固體斜面培養(yǎng)基的制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發(fā)芽的要挖掉芽眼，稱取200克切成薄片，置于鋁鍋加水煮沸30分鐘，用6層紗布過濾取汁，補足蒸餾水1000克；瓊脂20克，剪碎后加入馬鈴薯汁液內(nèi)，微火加熱，不時攪拌直至瓊脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮4分鐘，其液汁裝入試管；2)趁熱分裝入試管，裝量為試管長度的1/4，緊塞棉塞，分裝時應(yīng)注意不使培養(yǎng)基黏附在試管口上，以免雜菌感染；3)及時高壓滅菌，滅菌時將試管每7支扎成一捆，棉塞一端用牛皮紙包好，直立放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行蒸汽滅菌，當(dāng)壓力達(dá)O. 05兆帕?xí)r，打開排氣閥，使壓力降至“0”，繼續(xù)加熱，在O. 110兆帕的壓力下保持33分鐘，待壓力表自動降到“O”時再打開鍋蓋，取出試管趁熱按照下述操作擺斜面；4)試管取出后趁熱將試管口一端墊高,斜靠在桌上的小木棒上,使試管內(nèi)培養(yǎng)液斜面長度達(dá)試管長度的2/3，試管上面覆蓋毛巾，冷卻后即成斜面固體培養(yǎng)基；5)滅菌后置常溫下48小時，未發(fā)現(xiàn)有雜菌產(chǎn)生，即可接種。(2)將試管種轉(zhuǎn)移到搖瓶中；用接種鉤和接種鏟將試管中固體培養(yǎng)基上的菌種劃分為體積為O. 3立方厘米的小塊，在無菌操作下將試管中的菌種接種到搖瓶中的液體培養(yǎng)基上，每個搖瓶中接種7塊；上述的液體培養(yǎng)基的配方是馬鈴薯200克，麩皮20克，葡萄糖20克，蛋白胨O. 6克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂O. 5克，蒸餾水1000克，并根據(jù)液體培養(yǎng)基體積總量按照10毫克/升的含量添加入維生素BI，PH自然；所述的液體培養(yǎng)基制作方法如下I)將馬鈴薯洗凈去皮，已發(fā)芽的要挖掉芽眼，稱取200克切成薄片；麩皮選用新鮮無霉變的大麩，稱取20克與馬鈴薯同煮，煮沸后文火維持25分鐘，用6層紗布過濾取汁，補足蒸餾水1000克和其他原料煮沸，添加入維生素BI，然后分裝；2)分裝入搖瓶，容量為1000毫升的搖瓶每瓶裝入500 600毫升，瓶口用棉塞、牛皮紙密封；3)及時高壓滅菌，直立放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行蒸汽滅菌，在O. 13兆帕的壓力下保持40分鐘，高壓鍋排兩次冷氣，冷卻壓力降到O. 03兆帕?xí)r緩慢把高壓鍋內(nèi)的壓力排盡；4)冷卻后即成液體培養(yǎng)基。
(3)在搖瓶中培養(yǎng)液體菌種；搖瓶中的菌種在23°C靜止培養(yǎng)3天后，觀察長勢和有沒有污染雜菌，確定沒有染菌后放置于搖床上，搖床為旋轉(zhuǎn)式搖床，搖床的轉(zhuǎn)速為130轉(zhuǎn)/分；然后搖瓶中的菌種于搖床上23°C恒溫培養(yǎng)4天；(4)將搖瓶中的菌種接種到發(fā)酵罐中；按照菌種與發(fā)酵罐的體積比為10%將菌種接種到發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的內(nèi)壓為O. 015兆帕，菌種在發(fā)酵罐中于23°C恒溫培養(yǎng)5天；(5)將發(fā)酵罐中的菌種接入菌包；每一個菌包內(nèi)接入菌種的量為20毫升，終止發(fā)·酵。
權(quán)利要求
1.海鮮菇液體菌種發(fā)酵エ藝方法，其特征是，包括以下步驟 (1)培養(yǎng)試管種；將海鮮菇的純菌種接種在試管中的固體斜面培養(yǎng)基上，于21 23°C恒溫培養(yǎng)10 15天； 上述的固體斜面培養(yǎng)基由馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖及蒸餾水構(gòu)成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，瓊脂與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，PH自然； (2)將試管種轉(zhuǎn)移到搖瓶中；用接種鉤和接種鏟將試管中固體培養(yǎng)基上的菌種劃分為小塊，在無菌操作下將試管中的菌種接種到搖瓶中的液體培養(yǎng)基上，每個搖瓶中接種6 8塊； 上述的液體培養(yǎng)基由馬鈴薯、麩皮、葡萄糖、蛋白胨、磷酸ニ氫鉀、硫酸鎂及蒸餾水構(gòu)成，馬鈴薯與蒸餾水的重量比為20%，麩皮與蒸餾水的重量比為I. 5 2. 0%，葡萄糖與蒸餾水的重量比為2%，蛋白胨與蒸餾水的重量比為0. 05 0. 07%，磷酸ニ氫鉀與蒸餾水的重量比為0. 2%，硫酸鎂與蒸餾水的重量比為0. 05%,并根據(jù)液體培養(yǎng)基體積總量按照10毫克/升的含量添加入維生素BI，PH自然； (3)在搖瓶中培養(yǎng)液體菌種；搖瓶中的菌種在21 23°C靜止培養(yǎng)3 4天后，觀察長勢和有沒有污染雜菌，確定沒有染菌后放置于搖床上，搖床為旋轉(zhuǎn)式搖床，搖床的轉(zhuǎn)速為120 140轉(zhuǎn)/分；然后搖瓶中的菌種于搖床上21 23°C恒溫培養(yǎng)3 4天； (4)將搖瓶中的菌種接種到發(fā)酵罐中；按照菌種與發(fā)酵罐的體積比為10%將菌種接種到發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的內(nèi)壓為正壓且內(nèi)壓小于0. 02兆帕，菌種在發(fā)酵罐中于21 23°C恒溫培養(yǎng)4 6天； (5)將發(fā)酵罐中的菌種接入菌包；每一個菌包接入菌種的量為15 25毫升，終止發(fā)酵。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的海鮮菇液體菌種發(fā)酵エ藝方法，其特征是，所述的固體斜面培養(yǎng)基的制作方法如下 1)將馬鈴薯洗凈去皮，已發(fā)芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片，置于鋁鍋加水煮沸30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水；瓊脂按量稱取，剪碎后加入馬鈴薯汁液內(nèi)，微火加熱，不時攪拌直至瓊脂全部溶化，再加入葡萄糖，煮3 6分鐘，其液汁裝入試管； 2)趁熱分裝入試管，裝量為試管長度的1/4 1/5，緊塞棉塞，分裝時應(yīng)注意不便培養(yǎng)基黏附在試管口上，以免雜菌感染； 3)及時高壓滅菌,滅菌時將試管姆7 10支扎成ー捆,棉塞一端用牛皮紙包好，直立放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行蒸汽滅菌，當(dāng)壓カ達(dá)0. 05兆帕?xí)r，打開排氣閥，使壓カ降至“ 0”，繼續(xù)加熱，在0. 110兆帕的壓力下保持30 35分鐘，待壓カ表自動降到“0”時再打開鍋蓋，取出試管按照下述操作趁熱擺斜面； 4)試管取出后趁熱將試管ロー端墊高，斜靠在桌上的小木棒上，使試管內(nèi)培養(yǎng)液斜面長度達(dá)試管長度的2/3 3/5，試管上面覆蓋毛巾，冷卻后即成斜面固體培養(yǎng)基； 5)滅菌后置常溫下48小時，未發(fā)現(xiàn)有雜菌產(chǎn)生，即可接種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的海鮮菇液體菌種發(fā)酵エ藝方法，其特征是，試管中固體培養(yǎng)基上的菌種劃分為小塊的體積大小為0. 3立方厘米。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的海鮮菇液體菌種發(fā)酵エ藝方法，其特征是，所述的液體培養(yǎng)基制作方法如下1)將馬鈴薯洗凈去皮，已發(fā)芽的要挖掉芽眼，按量稱取后切成薄片；麩皮選用新鮮無霉變的大麩，按量稱取后與馬鈴薯同煮，煮沸后文火維持20 30分鐘，用4 6層紗布過濾取汁，加入按照重量比稱取的蒸餾水和其他原料煮沸然后分裝； 2)分裝入搖瓶，容量為1000毫升的搖瓶每瓶裝入500 600毫升，瓶ロ用棉塞、牛皮紙密封； 3)及時高壓滅菌，直立放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行蒸汽滅菌，在0.12 0. 14兆帕的壓力下保持40分鐘，高壓鍋排 兩次冷氣，冷卻壓カ降到0. 03兆帕?xí)r緩慢把高壓鍋內(nèi)的壓カ排盡； 4)冷卻后即成液體培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種海鮮菇液體菌種發(fā)酵工藝方法，它包括以下步驟培養(yǎng)試管種，將試管種轉(zhuǎn)移到搖瓶中，在搖瓶中培養(yǎng)液體菌種，將搖瓶中的菌種接種到發(fā)酵罐中，將發(fā)酵罐中的菌種接入菌包。本發(fā)明具有菌種活力強，制種周期短、接種速度快、菌齡一致、污染率低等優(yōu)點，液體菌種可以通過接種槍進(jìn)行接種，實現(xiàn)半機械化，效率高，節(jié)省人力，適于在食用菌栽培領(lǐng)域推廣。
文檔編號A01G1/04GK102845225SQ20121036477
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者劉克東, 盧欽寶, 侯有福, 張娟, 胥寶剛, 錢立雙, 溫麗君, 劉振濤, 楊華威 申請人:濟南蓬生農(nóng)業(yè)科技有限公司