專利名稱：一種食用菌調(diào)節(jié)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食用菌調(diào)節(jié)劑，屬于食用菌栽培技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前應(yīng)用于食用菌增產(chǎn)方面的物質(zhì)主要是化學(xué)制劑和激素類產(chǎn)品，如三十烷醇、黃腐酸、尿素等，該類產(chǎn)品增產(chǎn)效果在10% — 30%之間。現(xiàn)有使用后存在化學(xué)殘留，對產(chǎn)品及環(huán)境都會造成不同程度的污染，對產(chǎn)品的品質(zhì)也有不利影響，不符合綠色食品生產(chǎn)的要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種無污染、無殘留且有效提高食用菌產(chǎn)量和質(zhì)量的食用菌生長調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明采取的技術(shù)方案
一種食用菌調(diào)節(jié)劑，包括重量比為O. 2^0. 5 :9(Γ95的EccPR蛋白和水，所述EccPR蛋白是按照如下方法提取得到
(1)將min1-Tn5-Km轉(zhuǎn)座子插入胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜軟腐亞種份carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601中，篩選出不能使煙草葉片出現(xiàn)過敏反應(yīng)即葉片上出現(xiàn)壞死斑的突變菌；
(2)利用轉(zhuǎn)座子min1-Tn5-Km上的Km標(biāo)簽，通過RACE-PCR擴增上述突變菌中轉(zhuǎn)座子插入點兩端的DNA片段，經(jīng)過測序拼接后，獲得DNA序列；
(3)將步驟(2)得到的DNA序列連接到pET30a(+)上，并將其轉(zhuǎn)入到大腸桿菌E.coliBL21 中，獲得工程菌 E. coli BL21 (pET30a_EccPR)；
(4)將工程菌Ε·coli BL21 (pET30a-EccPR)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得具有植物免疫激活作用的免疫激活蛋白；
所述軟腐歐文氏菌份carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601 于2012年8月15日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No. 6433。為進一步提高增產(chǎn)效果，本發(fā)明食用菌調(diào)節(jié)劑還包括水解氨基酸，三者的重量比為EccPR蛋白水水解氨基酸=0. 2 O. 5 :90 95 :5 8，所述水解氨基酸為市售的蛋白水解氨基酸。按上述重量百分比，將上述三種成分混勻，即得所述的食用菌生長調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明可用于食用菌栽培料的拌種及食用菌生長過程中噴施，食用菌調(diào)節(jié)劑用于拌料使用時按1:3500倍使用，用于噴施使用時1000-1200倍稀釋使用。本發(fā)明食用菌調(diào)節(jié)劑的主要優(yōu)點是
(I)增產(chǎn)效果顯著，本發(fā)明產(chǎn)品中存在食用菌生長所需的營養(yǎng)成分，對食用菌生長具有很好的促進作用，與清水對照相比能增加產(chǎn)量25%-40%。(2)提高食用菌品質(zhì)，本發(fā)明產(chǎn)品中不含化學(xué)肥料及激素，無任何有毒有害難降解成份，在食用菌生產(chǎn)中使用具有無毒、無污染、無殘留的優(yōu)點，符合我國生產(chǎn)綠色食品的要求，為食用菌安全生產(chǎn)及食品安全提供了必要保證，具有良好經(jīng)濟效益和社會效益。該產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于平菇、金針菇、滑子菇、香菇等食用菌的生產(chǎn)。
具體實施例方式下面對本發(fā)明的技術(shù)方案作詳細(xì)說明，以下實施例是以本發(fā)明技術(shù)為前提下進行實施，給出了詳細(xì)的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述實施例。以下實施例中，所用EccPR蛋白是利用本實驗室所篩選的軟腐歐文氏菌iZnfifliacarotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601 (于 2012 年 8 月 15 日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No. 6433)，通過分子生物學(xué)方法將EccPR蛋白表達(dá)基因構(gòu)建了工程菌厶co7i BL21 (pET30a-EccPR)，獲得EccPR蛋白。具體提取步驟如下
(1)將min1-Tn5_Km 轉(zhuǎn)座子插入軟腐歐文氏菌 Erwinia carotovora subsp.Carotovora strain Ecc 601中，篩選出不能使煙草葉片出現(xiàn)過敏反應(yīng)即葉片上出現(xiàn)壞死斑的突變菌；
(2)利用轉(zhuǎn)座子min1-Tn5-Km上的Km標(biāo)簽，通過RACE-PCR擴增上述突變菌中轉(zhuǎn)座子插入點兩端的DNA片段，經(jīng)過測序拼接后，獲得DNA序列；
(3)將步驟(2)得到的DNA序列連接到pET30a(+)上，并將其轉(zhuǎn)入到大腸桿菌E.coliBL21 中，獲得工程菌 E. coli BL21 (pET30a_EccPR);
(4)將工程菌Ε·coli BL21 (pET30a-EccPR)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得具有植物免疫激活作用的免疫激活蛋白；具體步驟為將工程菌E. coli BL21 (pET30a-EccPR)單菌落挑起與LB培養(yǎng)基中在37 °C下進行過夜培養(yǎng)，將其作為母種，第二天將母種以1%接種量接種于液體LB培養(yǎng)基中，在37°C下進行培養(yǎng)5- 7小時，在其培養(yǎng)液中加入O. 4mM的IPTG進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)6_8小時后，將該培養(yǎng)液進行離心，獲得的菌體然后將其水懸浮并煮沸10-15分鐘，離心后將上清冷凍干燥，獲得含有70-80%發(fā)酵免疫激活蛋白EccPR的粗蛋白，將其過層析柱即可得到純品免疫激活蛋白EccPR。以下實施例中所用水解氨基酸為市售蛋白水解氨基酸(蛋白水解氨基酸,上海雅吉生物科技有限公司)，含17種氨基酸,有效成分大于等于45%。實施例1
本實施例各組分配比如下=EccPR蛋白O. 2g，水解氨基酸5g，水94. 8g，將該產(chǎn)品應(yīng)用于食用菌平菇栽培、生產(chǎn)。使用方法(I)拌培養(yǎng)料按重量比調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)料=1 :3500拌料，充分?jǐn)嚢?，拌勻即可?2)出菇期噴施將本實施例調(diào)節(jié)劑稀釋1100倍，在菇蕾長出后至采摘前噴施2-3次即可(每平方米地噴施稀釋后的調(diào)節(jié)劑O. 5千克)。使用效果可增加平菇產(chǎn)量39%，使用后菇形完整，肉質(zhì)厚嫩，無化學(xué)有害物質(zhì)殘留物。實施例2
本實施例配比為EccPR蛋白O. 3g，水解氨基6g，水93. 7g。將該產(chǎn)品應(yīng)用于食用菌香燕栽培、生產(chǎn)。使用方法(I)拌培養(yǎng)料按重量比調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)料=1 :3500拌料，充分?jǐn)嚢?，拌勻即可?2)出菇期噴施稀釋濃度1100倍，在菇蕾長出后至采摘前噴施2-3次即可(每平方米地噴施稀釋后的調(diào)節(jié)劑O. 5千克)。使用效果可增加香菇產(chǎn)量40%，使用后菇形完整，肉質(zhì)厚嫩，無化學(xué)有害物質(zhì)殘留物。實施例3
本實施例配比為=EccPR蛋白O. 4g，水解氨基酸7g，水92. 6g。將該產(chǎn)品應(yīng)用于食用菌金針燕栽培、生產(chǎn)。使用方法(I)拌培養(yǎng)料按重量比調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)料=1 :3500拌料，充分?jǐn)嚢瑁鑴蚣纯桑?2)出菇期噴施稀釋濃度1100倍，在菇蕾長出后至采摘前噴施2-3次即可(每平方米地噴施稀釋后的調(diào)節(jié)劑O. 5千克)。使用效果可增加金針菇產(chǎn)量35%，使用后菇形完整，肉質(zhì)厚嫩，無化學(xué)有害物質(zhì)殘留物。實施例4 :本實施例配比為=·EccPR蛋白O. 5g，水解氨基酸8g，水91. 5g。將該產(chǎn)品應(yīng)用于食用菌金針菇栽培、生產(chǎn)。使用方法(I)拌培養(yǎng)料按重量比調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)料=1 :3500拌料，充分?jǐn)嚢?，拌勻即可?2)出菇期噴施稀釋濃度1100倍，在菇蕾長出后至采摘前噴施2-3次即可(每平方米地噴施稀釋后的調(diào)節(jié)劑O. 5千克)。使用效果可增加金針菇產(chǎn)量38%，使用后菇形完整，肉質(zhì)厚嫩，無化學(xué)有害物質(zhì)殘留物。實施例5 :本實施例配比為=EccPR蛋白O. 5g，水99. 5g。將該產(chǎn)品應(yīng)用于食用菌金針菇栽培、生產(chǎn)。使用方法(I)拌培養(yǎng)料按重量比調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)料=1 :3500拌料，充分?jǐn)嚢?，拌勻即可?2)出菇期噴施稀釋濃度1100倍，在菇蕾長出后至采摘前噴施2-3次即可(每平方米地噴施稀釋后的調(diào)節(jié)劑O. 5千克)。使用效果可增加金針菇產(chǎn)量35%，使用后菇形完整，肉質(zhì)比較厚嫩，無化學(xué)有害物質(zhì)殘留物。本產(chǎn)品經(jīng)在食用菌平菇、金針菇、香菇上應(yīng)用，結(jié)果表明，本發(fā)明產(chǎn)品能明顯促進食用菌菌絲生長，提高產(chǎn)量及品質(zhì)，無化學(xué)有害物質(zhì)殘留，增產(chǎn)幅度達(dá)到30-40%。效果顯著。
權(quán)利要求
1.一種食用菌調(diào)節(jié)劑，其特征在于包括重量比為O. 2^0. 5 :9(Γ95的EccPR蛋白和水，所述EccPR蛋白是按照如下方法提取得到 (1)將min1-Tn5_Km 轉(zhuǎn)座子插入軟腐歐文氏菌 Erwinia carotovora subsp.Carotovora strain Ecc 601中，篩選出不能使煙草葉片出現(xiàn)過敏反應(yīng)即葉片上出現(xiàn)壞死斑的突變菌； (2)利用轉(zhuǎn)座子min1-Tn5-Km上的Km標(biāo)簽，通過RACE-PCR擴增上述突變菌中轉(zhuǎn)座子插入點兩端的DNA片段，經(jīng)過測序拼接后，獲得DNA序列； (3)將步驟(2)得到的DNA序列連接到pET30a(+)上，并將其轉(zhuǎn)入到大腸桿菌E.coliBL21 中，獲得工程菌 E. coli BL21 (pET30a_EccPR); (4)將工程菌Ε·coli BL21 (pET30a-EccPR)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得具有植物免疫激活作用的免疫激活蛋白； 所述軟腐歐文氏菌Erwinia carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601 于 2012年8月15日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No. 6433。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用菌調(diào)節(jié)劑，其特征在于還包括水解氨基酸，三者的重量比為EccPR蛋白水水解氨基酸=0. 2 O. 5 :90 95 5 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種食用菌生長調(diào)節(jié)劑，涉及食用菌的栽培技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明具有以下的重量組分配比，EccPR蛋白水=0.2～0.590～95，其中EccPR蛋白是從一種軟腐歐文氏菌中提取得到。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，不僅有較好的增產(chǎn)效果好，能提高食用菌的品質(zhì)，而且無公害、無污染、無殘留，可有效避免其它同類產(chǎn)品在食用菌應(yīng)用后帶來的化學(xué)殘留、污染等不良影響，可為食用菌安全生產(chǎn)及食品安全提供了必要保證，經(jīng)濟效益和社會效益好，可廣泛應(yīng)用于食用菌如平菇、滑子菇、香菇、金針菇等的生產(chǎn)，增產(chǎn)效果可以達(dá)到30%-40%。
文檔編號A01G1/04GK103039528SQ20121033190
公開日2013年4月17日 申請日期2012年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月10日
發(fā)明者賈振華, 宋水山, 馬宏, 趙芊, 黃亞麗 申請人:河北省科學(xué)院生物研究所