專利名稱：一種畜禽用合生素飼料添加劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種畜禽用合生素及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前畜禽飼養(yǎng)中的養(yǎng)豬業(yè)已成為關(guān)系國計(jì)民生的重要產(chǎn)業(yè)，而養(yǎng)豬生產(chǎn)中乳仔豬飼養(yǎng)是關(guān)鍵。營養(yǎng)、生理、環(huán)境及病原微生物等因素可引起仔豬腸道微生物菌群失調(diào)，導(dǎo)致功能紊亂，引起消化不良、腹瀉、生長抑制、死亡等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，腹瀉引起的仔豬死亡率平均為12%。每年因腹瀉死亡的仔豬約2000多萬頭，造成直接經(jīng)濟(jì)損失約100多億元。當(dāng)前生產(chǎn)實(shí)際中迫切需要采取有效措施改善仔豬的腸道發(fā)育狀況、維護(hù)和充分發(fā)揮腸道的功能，提高乳仔豬對腹瀉的抗病能力，減少因腹瀉而導(dǎo)致的死亡比例，進(jìn)而提高仔豬生長性能、健康水平和經(jīng)濟(jì)效益。
而抗生素長期以來一直在動物生產(chǎn)中發(fā)揮著巨大作用，可有效地治療和預(yù)防動物疾病發(fā)生，但是抗生素的持續(xù)使用會造成細(xì)菌耐藥性和動物產(chǎn)品藥物殘留等諸多問題，尋求和開發(fā)綠色、無污染、低殘留的飼料添加劑替代抗生素飼料添加劑日益為人們所重視。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種畜禽用合生素飼料添加劑，該合生素添加劑適用于畜禽特別是仔豬的飼養(yǎng)。本發(fā)明的另一目的在于提供這種合生素飼料添加劑在畜禽的增重和預(yù)防腹瀉的應(yīng)用。本發(fā)明為研究出一種由枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、酵母菌和米曲霉菌與殼聚糖組成的畜禽用合生素飼料添加劑。本發(fā)明的技術(shù)方案是該飼料添加劑是由組分重量比為70% 80%的復(fù)合益生菌制劑和20% 30%的殼聚糖協(xié)同劑組成；所述的復(fù)合益生菌制劑為重量比為20% 30%枯草芽孢桿菌、20% 30%納豆芽孢桿菌、20% 30%酵母菌和20% 30%米曲霉菌的干粉劑的組合物；所述的復(fù)合益生菌制劑中含活菌數(shù)不低于100億/g。所述的畜禽用合生素飼料添加劑，混合益生菌劑的優(yōu)選為25%枯草芽孢桿菌+25%納豆芽孢桿菌+ 25%酵母菌+ 25%米曲霉的混合物。混合益生菌粉劑中含活菌數(shù)100億/g。所述的枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和酵母菌是分別經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制成，發(fā)酵方式為高密度液體發(fā)酵；米曲霉的分生孢子是經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制成，發(fā)酵方式為固體發(fā)酵。所述的高密度液體發(fā)酵條件為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的40-60%，接種占培養(yǎng)基體積的1-5%的搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度28-35°C，通氣量1:0. 4 O. 7，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)180 250r / min，發(fā)酵時間22 30h。其中，納豆芽孢桿菌發(fā)酵時間為22_24h，枯草芽孢桿菌發(fā)酵時間為24_26h，酵母菌發(fā)酵時間為28-30h。
枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、酵母菌的干粉劑的制備包括菌種活化，制備種子培養(yǎng)物后，將種子培養(yǎng)物接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行高密度液體發(fā)酵培養(yǎng)；離心分離得到活性菌泥；將菌泥與麥麩吸附，吸附后50 60°C干燥，粉碎。所述的菌泥與麥麩按I :10質(zhì)量比吸附，粉碎到60 80目。米曲霉菌干粉劑的制備包括菌種活化后，將米曲霉稀釋至IO6個 IOVml孢子數(shù)的菌懸液；將固體培養(yǎng)基滅菌后按接種量Iml 2ml/10g接入菌懸液，置3 0°C恒溫培養(yǎng)48-52小時；將固體發(fā)酵培養(yǎng)物置50°C恒溫干燥，粉碎。本發(fā)明的應(yīng)用在于，將所述的合生素飼料添加劑作為畜禽用增重、預(yù)防腹瀉的飼料添加劑。所述的飼料添加劑在全價飼料中添加重量比為O. I O. 3%。所述的畜禽用合生素飼料添加劑的制備方法，其步驟為先制備混合益生菌劑，再將70% 80%的混合益生菌劑和20% 30%殼聚糖協(xié)同劑按比例混合均勻，制成為畜禽用合生素飼料添加劑。具體包括以下步驟(I)枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、酵母菌的培養(yǎng)A.菌種活化取斜面上菌種一鉬金耳接種于裝有培養(yǎng)基(枯草和納豆用LB培養(yǎng)基，酵母用土豆培養(yǎng)基)的試管內(nèi)，恒溫(枯草34°C、納豆和酵母均30°C，下同)靜置培養(yǎng)20小時(酵母為28小時)，作為母培養(yǎng)物。B.種子培養(yǎng)物的制備將母培養(yǎng)物接入種子液體培養(yǎng)基中，接種量為1_3%，置搖床200rpm恒溫培養(yǎng)22小時(酵母為30小時)，作為種子培養(yǎng)物。C.單菌發(fā)酵培養(yǎng)將種子培養(yǎng)物接入液體培養(yǎng)基中，在恒溫條件下進(jìn)行發(fā)酵罐高密度培養(yǎng)，發(fā)酵罐發(fā)酵條件為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的40-60%，接種占培養(yǎng)基體積的1-5%的搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度28-35°C，通氣量1:0. 4 O. 7，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)180 250r /min，發(fā)酵時間22 30h (納豆22_24h、枯草24_26h、酵母28_30h)。D.離心分離取上述發(fā)酵液用離心機(jī)在4°C條件下4000rpm高速離心15min,用無菌水洗滌2-3次，取下層沉淀即為活性菌泥。E.將菌泥與麥麩按I : 10質(zhì)量比吸附，吸附后50 60°C干燥I 6h，粉碎到60 80目。(2)米曲霉菌的培養(yǎng)A.菌種活化取斜面上菌種接種于裝有土豆培養(yǎng)基的茄子瓶內(nèi)，30°C恒溫靜置培養(yǎng)48小時,備用。B、將米曲霉茄子瓶斜面稀釋至IO6個/ml孢子數(shù)的菌懸液；備用。C、將固體培養(yǎng)基(麩皮豆餅粉=9 :1 ;含水量50%、PH自然)滅菌后按接種量lml/10g接入菌懸液，置30°C恒溫培養(yǎng)48-52小時。D、將固體發(fā)酵培養(yǎng)物置50°C恒溫干燥(至水分彡8%)。E、將干燥后的米曲霉培養(yǎng)物粉碎到60 80目。(3)合生素飼料添加劑的制備將上述粉碎后的枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌的培養(yǎng)物、酵母菌和米曲霉菌的培養(yǎng)物與殼聚糖進(jìn)行混合配比，制成合生素飼料添加劑。4、所述的畜禽用合生素飼料添加劑用于制備家畜增重和預(yù)防腹瀉的制劑。具體可將所述的菌制劑添加到飼料中，喂飼家畜(一般使用對象為豬，尤其是斷奶仔豬)。在飼料中添加濃度為O. I O. 3%。本發(fā)明采用的芽孢桿菌是益生菌常用的菌種之一，，材料來源廣泛，由于其能形成芽孢，抗逆性強(qiáng)，因此比乳酸桿菌和鏈球菌穩(wěn)定。芽孢桿菌可減少糞和消化道中的大腸桿菌數(shù)。芽孢桿菌與乳酸菌和酵母菌相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和特性耐高溫、耐酸堿及耐壓等，能耐受飼料加工過程中的影響；在貯藏過程中以芽孢形式存在，不消耗飼料中的養(yǎng)分，確保飼料質(zhì)量穩(wěn)定；進(jìn)入腸道后，能在腸道前部快速復(fù)活，復(fù)活率接近100% ;在動物腸道中，芽孢桿菌能產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶及多種氨基酸和B族維生素；芽孢桿菌能消耗腸道中的氧，保持厭氧環(huán)境，抑制有害菌生長，維持腸道菌群平衡；促進(jìn)腸道內(nèi)乳酸桿菌和雙歧桿菌增殖；枯草芽孢桿菌還能有效降解果膠、羧甲基纖維素及多聚半乳糖醛酸等復(fù)雜植物性碳水化合物。酵母菌是動物腸道的有益微生物，酵母細(xì)胞含有蛋白質(zhì)、核酸、維生素和消化酶，可加強(qiáng)動物消化和吸收功能。反芻動物日糧中添加酵母可促進(jìn)瘤胃發(fā)酵菌數(shù)量上升。酵母細(xì)胞壁的主要成分是甘露寡糖和葡萄糖，其中前者可增強(qiáng)吞噬細(xì)胞活性。 米曲霉是一類產(chǎn)復(fù)合酶的菌株，除產(chǎn)蛋白酶外，還可產(chǎn)淀粉酶、糖化酶、纖維素酶、植酸酶等。在淀粉酶的作用下，將原料中的直鏈、支鏈淀粉降解為糊精及各種低分子糖類，如麥芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，將不易消化的大分子蛋白質(zhì)降解為蛋白胨、多肽及各種氨基酸，而且可以使輔料中粗纖維、植酸等難吸收的物質(zhì)降解，提高營養(yǎng)價值、保健功效和消化率。殼聚糖具有抗微生物活性、提高機(jī)體免疫力、改善產(chǎn)品質(zhì)量等生物學(xué)特性，飼料中添加殼聚糖，對促進(jìn)動物生長、提高免疫力、改善動物品質(zhì)等方面都有良好作用。本發(fā)明的添加劑通過充分發(fā)揮了以上成分的協(xié)同作用，成功實(shí)現(xiàn)了對包括仔豬在內(nèi)的畜禽的增重和預(yù)防腹瀉的作用。本發(fā)明產(chǎn)品無毒無害功能性強(qiáng)，有效活性作用成分眾多，具有多功能的內(nèi)在因素，具備預(yù)防、保健、以及調(diào)節(jié)免疫等多重功效。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。實(shí)施例I一、混合益生菌劑的制備(I)枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、酵母菌的培養(yǎng)A.菌種活化取斜面上菌種一鉬金耳接種于裝有培養(yǎng)基(枯草和納豆用LB培養(yǎng)基，酵母用土豆培養(yǎng)基)的試管內(nèi)，恒溫(枯草34°C、納豆和酵母均30°C，下同)靜置培養(yǎng)20小時(酵母為28小時)，作為母培養(yǎng)物。B.種子培養(yǎng)物的制備將母培養(yǎng)物接入種子液體培養(yǎng)基中，接種量為1_3%，置搖床200rpm恒溫培養(yǎng)22小時(酵母為30小時)，作為種子培養(yǎng)物。C.單菌發(fā)酵培養(yǎng)將種子培養(yǎng)物接入液體培養(yǎng)基中，在恒溫條件下進(jìn)行發(fā)酵罐高密度培養(yǎng)，發(fā)酵罐發(fā)酵條件為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的40-60%，接種占培養(yǎng)基體積的1-5%的搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度28-35°C，通氣量1:0. 4 O. 7，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)180 250r /min，發(fā)酵時間22 30h (納豆22_24h、枯草24_26h、酵母28_30h)。D.離心分離取上述發(fā)酵液用離心機(jī)在4°C條件下4000rpm高速離心15min,用無菌水洗滌2-3次，取下層沉淀即為活性菌泥。E.將菌泥與麥麩按I : 10質(zhì)量比吸附，吸附后50 60°C干燥I 6h，粉碎到60 80目。(2)米曲霉菌的培養(yǎng)A.菌種活化取斜面上菌種接種于裝有土豆培養(yǎng)基的茄子瓶內(nèi)，30°C恒溫靜置培養(yǎng)48小時,備用。B、將米曲霉茄子瓶斜面稀釋至IO6個/ml孢子數(shù)的菌懸液；備用。C、將固體培養(yǎng)基(麩皮豆餅粉=9 :1 ;含水量50%、PH自然)滅菌后按接種量lml/10g接入菌懸液，置30°C恒溫培養(yǎng)48-52小時。
D、將固體發(fā)酵培養(yǎng)物置50°C恒溫干燥(至水分彡8%)。E、將干燥后的米曲霉培養(yǎng)物粉碎到60 80目。二、合生素飼料添加劑的制備(I)稱重配料，稱取益生菌75%，殼聚糖25%為原料；(2)混合均勻；(3)密閉包裝，避光保存。實(shí)施例2混合益生菌劑的制備方法與實(shí)施例I相同。(I)稱重配料，稱取益生菌70%，殼聚糖30%為原料；(2)混合均勻；(3)密閉包裝，避光保存。實(shí)施例3混合益生菌劑的制備方法與實(shí)施例I相同。(I)稱重配料，稱取益生菌80%，殼聚糖20%為原料；(2)混合均勻；(3)密閉包裝，避光保存。實(shí)施例4畜禽用合生素飼料添加劑對保育豬生產(chǎn)性能的影響按實(shí)施例I、實(shí)施例2、實(shí)施例3技術(shù)方案制備的終產(chǎn)品進(jìn)行臨床試驗(yàn)，具體方案為試驗(yàn)地點(diǎn)湖南新五豐股份有限公司永安分公司；試驗(yàn)動物杜洛克X長白X大白原種斷奶仔豬；試驗(yàn)分組將300頭7kg左右的杜洛克X長白X大白原種斷奶仔豬隨機(jī)分成10組,每組30頭。以豬場飼喂的常規(guī)日糧為基礎(chǔ)日糧(見表1)，對照組和試驗(yàn)組飼喂方案(見表2)；預(yù)試期5d，試驗(yàn)期28天，試驗(yàn)期間自由采食，自由飲水。計(jì)算試驗(yàn)起始平均體重，試驗(yàn)結(jié)束平均體重，平均日增重(ADG)，平均日采食量(ADFI)，飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)，每日觀察記錄腹瀉情況，計(jì)算腹瀉率。結(jié)果表明十個處理組中，F(xiàn) (試驗(yàn)組，O. 2%合生素，25%殼聚糖)的效果最好，其平均日增重O. 478kg/d和平均日采食量O. 762kg/d均大于對照組；腹瀉率小于對照CK處理組腹瀉率。因此本發(fā)明產(chǎn)品按0.2%濃度(其中合生素中殼聚糖比例為25%)添加到飼喂日糧對斷奶仔豬具有增重和預(yù)防腹瀉的作用，而且作用效果優(yōu)于對照組和其他處理組。
表1基礎(chǔ)飼糧原料組成及營養(yǎng)水平
權(quán)利要求
1.一種畜禽用合生素飼料添加劑，其特征在于該飼料添加劑是由組分重量比為70% 80%的復(fù)合益生菌制劑和20% 30%的殼聚糖協(xié)同劑組成；所述的復(fù)合益生菌制劑為重量比為20% 30%枯草芽孢桿菌、20% 30%納豆芽孢桿菌、20% 30%酵母菌和20% 30%米曲霉菌的干粉劑的組合物；所述的復(fù)合益生菌制劑中含活菌數(shù)不低于100億/g。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的畜禽用合生素飼料添加劑，其特征在于所述的復(fù)合益生菌制劑為25%枯草芽孢桿菌+ 25%納豆芽孢桿菌+ 25%酵母菌+ 25%米曲霉的干粉劑的組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的畜禽用合生素飼料添加劑，其特征在于所述的枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和酵母菌是分別經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制成，發(fā)酵方式為高密度液體發(fā)酵；米曲霉的分生孢子是經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制成，發(fā)酵方式為固體發(fā)酵。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的畜禽用合生素飼料添加劑，其特征在于所述的高密度液體發(fā)酵條件為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的40-60%，接種占培養(yǎng)基體積的1-5%的搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度28-35°C，通氣量1:0. 4 O. 7，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)180 250r / min，發(fā)酵時間22 30h。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的畜禽用合生素飼料添加劑，其特征在于其中，納豆芽孢桿菌發(fā)酵時間為22-24h，枯草芽孢桿菌發(fā)酵時間為24-26h，酵母菌發(fā)酵時間為28_30h。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的畜禽用合生素飼料添加劑，其特征在于枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、酵母菌的干粉劑的制備包括菌種活化，制備種子培養(yǎng)物后，將種子培養(yǎng)物接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行高密度液體發(fā)酵培養(yǎng)；離心分離得到活性菌泥；將菌泥與麥麩吸附，吸附后50 60°C干燥，粉碎。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的合生素飼料添加劑，其特征在于菌泥與麥麩按I:10質(zhì)量比吸附，粉碎到60 80目。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的畜禽用合生素飼料添加劑，其特征在于米曲霉菌干粉劑的制備包括菌種活化后，將米曲霉稀釋至IO6個 107/ml孢子數(shù)的菌懸液；將固體培養(yǎng)基滅菌后按接種量Iml 2ml/10g接入菌懸液，置30°C恒溫培養(yǎng)48-52小時；將固體發(fā)酵培養(yǎng)物置50°C恒溫干燥，粉碎。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的畜禽用合生素飼料添加劑的應(yīng)用，其特征在于將所述的合生素飼料添加劑作為畜禽用增重、預(yù)防腹瀉的飼料添加劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的畜禽用合生素飼料添加劑的應(yīng)用，其特征在于所述的飼料添加劑在全價飼料中添加重量比為O. I O. 3%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種畜禽用合生素飼料添加劑及其制備方法，其組分為70%～80%的復(fù)合益生菌制劑和20%～30%的寡糖協(xié)同劑，復(fù)合益生菌為枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、酵母菌和米曲霉的混合物，寡糖為殼聚糖。復(fù)制備方法為先制備復(fù)合益生菌制劑，再將復(fù)合益生菌制劑和益生元—?dú)ぞ厶菂f(xié)同劑按比例混合均勻，從而制成畜禽用合生素飼料添加劑。
文檔編號A23K1/16GK102805209SQ20121031592
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月30日
發(fā)明者吳勝蓮, 胡新旭, 周映華, 周小玲, 高書鋒, 孔利華, 靳磊, 繆東, 楊祎, 劉惠知 申請人:湖南省微生物研究所, 劉惠知