專利名稱：鐵皮石斛高效組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是ー種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛(Dendrobium candidu m Wall, ex Until.)為蘭科石斛屬多年生草本植物，別名鐵皮蘭、黑節(jié)草等。是ー種分布在巖溶地區(qū)的珍貴中藥材植物，民間有“救命仙草”、“中華仙草”的美稱。石斛屬植物的莖段又名“石斛楓斗”，為ー種傳統(tǒng)中藥，其中所含有的石斛多糖具有益胃生津、抑制腫瘤等作用。早在1900年前的《神農(nóng)本草經(jīng)》上就有關(guān)于石斛的記載。入藥的石斛主要有鐵皮石斛、霍山石斛、束花石斛、美花石斛以及金釵石斛，其中以鐵皮石斛的藥效最為顯著。然而鐵皮石斛生長條件十分苛刻，自然產(chǎn)量極少，更因民間長期過度采挖，致使野生資源瀕臨絕種，國內(nèi)市場供應(yīng)緊缺，國際市場干品價(jià)已達(dá)1000美元/kg以上。建立高效的組培快繁體系是推進(jìn)鐵皮石斛藥源良性發(fā)展的有效途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，以提高鐵皮石斛的組織培養(yǎng)的分芽率和苗木質(zhì)量。本發(fā)明通過如下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，包括提供LED光源；提供適宜于所述LED光源的多層矮化培養(yǎng)架；在所述LED光源下鐵皮石斛分芽培養(yǎng)；和在所述LED光源下鐵皮石斛生根培養(yǎng)。優(yōu)選地，所述培養(yǎng)架層間距15cm，寬50cm，長150cm，15m2培養(yǎng)室，可放置12個(gè)培養(yǎng)架，每個(gè)培養(yǎng)架12層，實(shí)現(xiàn)苗木培養(yǎng)14，400瓶。優(yōu)選地，所述LED光源使用24V LED燈帶，每架3條，實(shí)現(xiàn)30001X的均勻光照強(qiáng)度。優(yōu)選地，所述LED光源的光照控制器采用14/10小時(shí)的光/暗培養(yǎng)。優(yōu)選地，所述鐵皮石斛分芽培養(yǎng)所使用的原球莖増殖培養(yǎng)基中的藥品包括1800mg/L 的 KNO3360mg/L 的 NH4NO3270mg/L 的 KH2PO4600mg/L 的 Ca (NO3) 2362. 5mg/L 的 MgSO4. 7H2022. 3mg/L 的 MnSO4. 4H208. 6mg/L 的 ZnSO4. 7H206. 2mg/L 的 H3BO30. 83mg/L 的 KI
適量的Na2Mo4. 2H200. 025mg/L 的 CuSO4. 5H200. 025mg/L 的 CoCl2. 6H200. 025mg/L 的 AlCl337. 3mg/L 的 Na2EDTA27. 8mg/L 的 FeSO4. 7H20
lOOmg/L 的肌醇4mg/L的甘氨酸12mg/L 的 VB1I. 2mg/L 的 VB62. 5mg/L 的煙酸2-4mg/L 的 D_ 泛酸鈣2mg/L 的 VC5mg/L的L_半胱氨酸0. 24mg/L 的生物素2mg/L 的 6BAI. 2mg/L 的活性炭I. 5g/L的香蕉泥l(xiāng).Og/L 的土豆泥。優(yōu)選地，所述鐵皮石斛生根培養(yǎng)所使用的生根壯苗培養(yǎng)基中的藥品包括246. 6mg/L 的 KNO3216mg/L 的 NH4NO3334. 8mg/L 的 KH2PO4250. 2mg/L 的 Ca (NO3) 2258. 8mg/L 的 MgSO4. 7H2022. 3mg/L 的 MnSO4. 4H208. 6mg/L 的 ZnSO4. 7H206. 2mg/L 的 H3BO30.83mg/L 的 KI適量的Na2Mo4. 2H200. 025mg/L 的 CuSO4. 5H200. 025mg/L 的 CoCl2. 6H200. 025mg/L 的 AlCl337. 3mg/L 的 Na2EDTA27. 8mg/L 的 FeSO4. 7H2040mg/L 的肌醇I. 6mg/L 的甘氨酸4. 8mg/L 的 VB10.48mg/L 的 VB6
lmg/L 的煙酸0. 8-1. 6mg/L 的 D_ 泛酸鈣0. 8mg/L 的 VC2mg/L的L_半胱氨酸0. 09mg/L6 的生物素0. 6mg/L 的根太陽
0. 6mg/L 的 ABT0. 5mg/L 的 IBAI. 2mg/L 的活性炭1.5g/L的香蕉泥l(xiāng).Og/L 的土豆泥。通過以上技術(shù)方案，本發(fā)明能夠達(dá)到如下技術(shù)效果。(I)利用LED光源替代傳統(tǒng)白熾燈或自然光，作為鐵皮石斛組培快繁的光源，實(shí)現(xiàn)低成本高效苗木培育。LED (light-emitting diodes),即發(fā)光二極管,是ー種可以有效地把電能轉(zhuǎn)變成電磁輻射的裝置。LED具有較窄的波譜，波譜半寬范圍從幾納米到幾十納米，在±20nm左右，波長正好與植物光合成和光形態(tài)形成的光譜范圍相吻合。在植物組織培養(yǎng)中米用LED提供照明，不僅能夠調(diào)控組培植物的生長發(fā)育和形態(tài)建成、縮短培養(yǎng)周期、提高品質(zhì)，而且能夠大大減少能耗，降低成本。(2)提供了適宜于LED光源的多層矮化培養(yǎng)架，實(shí)現(xiàn)了空間利用的高效率。本發(fā)明的技術(shù)方案，提高培養(yǎng)空間利用率I倍以上；且能有效控制污染，適應(yīng)了鐵皮石斛培養(yǎng)周期長(3個(gè)月)的特點(diǎn)(3)對(duì)LED光源下鐵皮石斛分芽培養(yǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，提高了分芽率。本發(fā)明對(duì)MS培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，以適應(yīng)LED光源下鐵皮石斛的原球莖高效分化，主要優(yōu)化內(nèi)容包括，大量元素品種及使用量調(diào)整、有機(jī)元素的品種及使用量調(diào)整、外源有機(jī)物添加、激素使用量調(diào)整等。(4)對(duì)LED光源下鐵皮石斛生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，提高了苗木質(zhì)量。鐵皮石斛生根苗培育，一般采用1/2MS培養(yǎng)基。本發(fā)明對(duì)生根培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，以適應(yīng)LED光源下鐵皮石斛的高質(zhì)量苗木培育，主要優(yōu)化內(nèi)容包括，大量元素品種及使用量調(diào)整、有機(jī)元素的品種及使用量調(diào)整、外源有機(jī)物添加、外源生根刺激物質(zhì)添加、激素使
用量調(diào)整等。經(jīng)優(yōu)化的生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)的苗木，75天，苗高普遍7cm以上，莖粗0. 4cm以上，莖6節(jié)以上，根系數(shù)量8條以上，普遍高于目前培養(yǎng)的生根苗。


圖I是根據(jù)本發(fā)明的LED光源培養(yǎng)室。圖2是根據(jù)本發(fā)明的LED光源培養(yǎng)室中的LED光帯。圖3是根據(jù)本發(fā)明的LED光源培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架。圖4a是使用現(xiàn)有技術(shù)中的MS培養(yǎng)基的分芽培養(yǎng)效果。
圖4b是使用根據(jù)本發(fā)明的原球莖増殖培養(yǎng)基的分芽培養(yǎng)效果。圖5a_5c是使用根據(jù)本發(fā)明的生根壯苗培養(yǎng)基的生根培養(yǎng)效果。
具體實(shí)施例方式I.高效LED光源培養(yǎng)室培養(yǎng)架設(shè)計(jì)層間距15cm，寬50cm，長150cm，15m2培養(yǎng)室，可放置12個(gè)培養(yǎng)架，每個(gè)培養(yǎng)架12層，實(shí)現(xiàn)苗木培養(yǎng)14，400瓶，即144，000株。
LED燈帶選擇使用24V LED燈帶，每架3條，實(shí)現(xiàn)30001x的光照強(qiáng)度；光照控制器采用14/10小時(shí)的光/暗培養(yǎng)2.高效鐵皮石斛原球莖増殖培養(yǎng)基配方如下
權(quán)利要求
1.一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法,包括 提供LED光源； 提供適宜于所述LED光源的多層矮化培養(yǎng)架； 在所述LED光源下鐵皮石斛分芽培養(yǎng)；和 在所述LED光源下鐵皮石斛生根培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)架層間距15cm，寬50cm,長150cm，15m2培養(yǎng)室，可放置12個(gè)培養(yǎng)架，每個(gè)培養(yǎng)架12層，實(shí)現(xiàn)苗木培養(yǎng)14，400瓶。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述LED光源使用24VLED燈帶，每架3條，實(shí)現(xiàn)30001x的均勻光照強(qiáng)度。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述LED光源的光照控制器采用14/10小時(shí)的光/暗培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述鐵皮石斛分芽培養(yǎng)所使用的原球莖增殖培養(yǎng)基中的藥品包括 . 1800mg/L 的 KNO3 . 360mg/L 的 NH4NO3 . 270mg/L 的 KH2PO4 . 600mg/L 的 Ca (NO3) 2 . 362. 5mg/L 的 MgSO4. 7H20 . 22. 3mg/L 的 MnSO4. 4H20.8.6mg/L 的 ZnSO4. 7H20.6.2mg/L 的 H3BO3 . 0.83mg/L 的 KI適量的 Na2Mo4. 2H20.O.025mg/L 的 CuSO4. 5H20 . 0. 025mg/L 的 CoCl2. 6H20.0.025mg/L 的 AlCl3.37. 3mg/L 的 Na2EDTA . 27. 8mg/L 的 FeSO4. 7H20.lOOmg/L的肌醇.4mg/L的甘氨酸.12mg/L 的 VBi . 1.2mg/L 的 VB6 . 2.5mg/L的煙酸 .2-4mg/L的D-泛酸隹丐 . 2mg/L 的 VC .5mg/L的L-半胱氨酸 .O.24mg/L的生物素 .2mg/L 的 6BA1.2mg/L的活性炭 1. 5g/L的香蕉泥 1. Og/L的土豆泥。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述鐵皮石斛生根培養(yǎng)所使用的生根壯苗培養(yǎng)基中的藥品包括 · 246.6mg/L 的 KNO3·216mg/L 的 NH4NO3·334. 8mg/L 的 KH2PO4·250. 2mg/L 的 Ca (NO3) 2·258. 8mg/L 的 MgSO4. 7H20·22. 3mg/L 的 MnSO4. 4H20·8.6mg/L 的 ZnSO4. 7H20·6.2mg/L 的 H3BO3·0.83mg/L 的 KI適量的 Na2Mo4. 2H20O. 025mg/L 的 CuSO4. 5H20·0.025mg/L 的 CoCl2. 6H20·0.025mg/L 的 AlCl3·37. 3mg/L 的 Na2EDTA·27. 8mg/L 的 FeSO4. 7H2040mg/L的肌醇 ·1.6mg/L的甘氨酸·4.8mg/L 的 VB1 · 0.48mg/L 的 VB6lmg/L的煙酸 ·0.8-1. 6mg/L 的 D-泛酸 丐O.8mg/L 的 VC2mg/L的L-半胱氨酸 O.09mg/L6的生物素 O.6mg/L的根太陽O.6mg/L 的 ABT·0.5mg/L 的 IBA ·1.2mg/L的活性炭 I. 5g/L的香蕉泥 I.Og/L的土豆泥。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛高效組培快繁方法，利用LED光源替代傳統(tǒng)白熾燈或自然光，作為鐵皮石斛組培快繁的光源，實(shí)現(xiàn)低成本高效苗木培育；提供了適宜于LED光源的多層矮化培養(yǎng)架，實(shí)現(xiàn)了空間利用的高效率。本發(fā)明還對(duì)LED光源下鐵皮石斛分芽培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，提高了分芽率和苗木質(zhì)量。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102763596SQ20121027975
公開日2012年11月7日 申請日期2012年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月8日
發(fā)明者丁曉綱, 張弘, 曾雷, 王洪峰 申請人:廣東省林業(yè)科學(xué)研究院, 王洪峰