專利名稱：一種油棕胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種油棕胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
油棕屬多年生單子葉植物，是熱帶木本油料作物，其果肉、果仁含油豐富，是世界重要的木本油料作物，單位面積的產(chǎn)油量是花生的7 8倍，被譽為“世界油王”。油棕組織培養(yǎng)技術(shù)是一種油棕新型繁育技術(shù)，通過油棕組織培養(yǎng)技術(shù)培育的油棕優(yōu)良無性系具有產(chǎn)量高、抗逆性強等優(yōu)良性狀，具有良好的市場應(yīng)用前景。目前，油棕組織培養(yǎng)技術(shù)中，主要采用油棕嫩葉和花序作為外植體材料，由于棕櫚屬植物本身的生物學(xué)特性，外植體材料中含多酚類等物質(zhì)含量高，因此通過組織培養(yǎng)途徑獲得離體再生植株比較困難，特別是在胚性愈傷組織誘導(dǎo)、體細(xì)胞胚發(fā)生等階段誘導(dǎo)率較 低，目前胚性愈傷組織的平均誘導(dǎo)率在2% 10%，因此能否獲得油棕胚性愈傷組織，并達(dá)到相對較高的誘導(dǎo)率水平是影響油棕?zé)o性繁殖效率的主要瓶頸之一，是整個技術(shù)的主要難點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種油棕胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，以油棕幼嫩葉片為外植體誘導(dǎo)形成胚性愈傷組織，建立高效的油棕胚性愈傷組織培養(yǎng)體系，提高油棕胚性愈傷組織的產(chǎn)量，為建立油棕組織培養(yǎng)體系、快速繁育油棕組培苗奠定基礎(chǔ)，是一條提高油棕組培苗產(chǎn)量的有效途徑。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案一種油棕胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其步驟如下I、外植體的選取選取樹齡8 10年的油棕母株，切取莖干生長點上15cm至95cm處的油棕莖段，經(jīng)表面除雜、清洗后進(jìn)行消毒處理，然后將晾干后的外植體轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉。油棕母株的切面在外植體采集后，對切面進(jìn)行防護(hù)處理，待恢復(fù)生長后可以重新取樣。2、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)將油棕嫩葉修剪至大小為lcmX2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得到愈傷組織，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以改良MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加激素和活性炭I 5g/L，pH值為5. O 6. O，所述激素是NAA、2，4_D或TCPP中的一種、兩種或三種，其添加量分別為NAA200mg/L 以下、2，4-D 60mg/L 以下、TCPP 2mg/L 以下。所述改良MS培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整其中的肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為0. I 5mg/L、0. I 5mg/L、0. I 5mg/L、0. I 5mg/L,并添加精氨酸50 300mg/L、天冬氨酸50 300mg/L、谷氨酸50 300mg/L。3、胚性愈傷組織的培養(yǎng)將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得到胚性愈傷組織，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。所述胚性愈傷組織培養(yǎng)基是以改良MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加激素和活性炭I 5g/L，pH值為5. O 6. 0，所述激素是NAA或2，4-D中的一種或兩種，其添加量分別為NAA 140mg/L以下、 2，4_D 20mg/L以下。本發(fā)明步驟簡單，以油棕幼嫩葉片為外植體誘導(dǎo)形成胚性愈傷組織，建立高效的油棕胚性愈傷組織培養(yǎng)體系，提高油棕胚性愈傷組織的產(chǎn)量，有效地解決了油棕胚性愈傷組織誘導(dǎo)困難、誘導(dǎo)率低的問題，為建立油棕組織培養(yǎng)體系、快速繁育油棕組培苗奠定基礎(chǔ)，是一條提高油棕組培苗產(chǎn)量的有效途徑。


圖I為油棕葉片培養(yǎng)3個月后獲得的油棕愈傷組織。圖2為油棕愈傷組織培養(yǎng)3個月后獲得的油棕胚性愈傷組織。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明的具體實施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實施例一I、外植體的選取選取樹齡8年的油棕高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)母株5株,切取莖干生長點上25cm至60cm處的油棕莖段，將得到的油棕莖干除去表面雜質(zhì)后，在油棕莖干表面噴涂75%的酒精進(jìn)行殺菌，晾干，然后將晾干的油棕莖干轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉。2、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)將油棕嫩葉修剪至大小為IcmX 2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+ NAA 180mg/L +活性炭2. 5g/L，pH值為5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)6個月后在油棕葉片的次級葉脈出開始出現(xiàn)油棕愈傷組織，所得結(jié)果見表I。3、胚性愈傷組織的培養(yǎng)將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+NAA20mg/L+活性炭2. 5g/L，pH值為5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)3個月后可得到油棕胚性愈傷組織。所得結(jié)果見表I。實施例二I、外植體的選取選取樹齡約9年的油棕高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)母株5株,切取莖干生長點上30cm至60cm處的油棕莖段，將得到的油棕莖干除去表面雜質(zhì)后，在油棕莖干表面噴涂75%的酒精進(jìn)行殺菌，晾干，然后將晾干后的油棕莖干轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉。2、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)
將油棕嫩葉修剪至大小為IcmX 2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+2，4-D 40mg/L+活性炭2. 5g/L，pH值為5. 8)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)6個月后在油棕葉片的次級葉脈出開始出現(xiàn)油棕愈傷組織，所得結(jié)果見表I。3、胚性愈傷組織的培養(yǎng) 將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+2，4-D 2mg/L +活性炭2. 5g/L，pH值為5. 8)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)3個月后可得到油棕胚性愈傷組織。所得結(jié)果見表I。實施例三I、外植體的選取選取樹齡約9年的油棕高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)母株5株，切取莖干生長點上20cm至70cm處的油 棕莖段，將得到的油棕莖干除去表面雜質(zhì)后，在油棕莖干表面噴涂75%的酒精進(jìn)行殺菌，晾干，然后將晾干后的油棕莖干轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉。2、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)將油棕嫩葉修剪至大小為IcmX 2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+ NAA 60mg/L + TCPP lmg/L +活性炭2. 5g/L，pH值為5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)6個月后在油棕葉片的次級葉脈出開始出現(xiàn)油棕愈傷組織，所得結(jié)果見表I。3、胚性愈傷組織的培養(yǎng)將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+ NAA 10mg/L +活性炭2. 5g/L，pH值為5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)得到胚性愈傷組織，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)3個月后可得到油棕胚性愈傷組織。所得結(jié)果見表I。實施例四I、外植體的選取選取樹齡約10年的油棕高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)母株5株,切取莖干生長點上15cm至85cm處的油棕莖段，將得到的油棕莖干除去表面雜質(zhì)后，在油棕莖干表面噴涂75%的酒精進(jìn)行殺菌，晾干，然后將晾干后的油棕莖干轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉。2、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)將油棕嫩葉修剪至大小為IcmX 2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+2，4-D 20 mg/L + TCPP lmg/L +活性炭2. Og/L，pH值為5. 8)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)6個月后在油棕葉片的次級葉脈出開始出現(xiàn)油棕愈傷組織，所得結(jié)果見表I。3、胚性愈傷組織的培養(yǎng)將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+ 2，4-D 2. 5mg/L+活性炭2. Og/L, pH值為5. 8)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)3個月后可得到油棕胚性愈傷組織。所得結(jié)果見表I。實施例五I、外植體的選取
選取樹齡約9年的油棕高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)母株5株,切取莖干生長點上45cm至90cm處的油棕莖段，將得到的油棕莖干除去表面雜質(zhì)后，在油棕莖干表面噴涂75%的酒精進(jìn)行殺菌，晾干，然后將晾干后的油棕莖干轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉。2、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)將油棕嫩葉修剪至大小為IcmX 2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基 + NAA 30mg/L+2，4-D 10mg/L+TCPP 2mg/L + 活性炭 2. 5g/L，pH 值為 5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C,每3個月繼代一次。培養(yǎng)6個月后在油棕葉片的次級葉脈出開始出現(xiàn)油棕愈傷組織，所得結(jié)果見表I。 3、胚性愈傷組織的培養(yǎng)將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+ NAA 20mg/L +活性炭2. 5g/L，pH值為5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)3個月后可得到油棕胚性愈傷組織。所得結(jié)果見表I。 實施例六I、外植體的選取選取樹齡9年的油棕高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)母株5株,切取莖干生長點上25cm至95cm處的油棕莖段，將得到的油棕莖干除去表面雜質(zhì)后，在油棕莖干表面噴涂75%的酒精進(jìn)行殺菌，晾干，然后將晾干后的油棕莖干轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉。2、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)將油棕嫩葉修剪至大小為IcmX 2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基 +NAA 20mg/L+2, 4-D 20 mg/L+ TCPP 2mg/L + 活性炭 2. 5g/L，pH 值為 5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)6個月后在油棕葉片的次級葉脈出開始出現(xiàn)油棕愈傷組織，所得結(jié)果見表I。3、胚性愈傷組織的培養(yǎng)將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基(改良MS培養(yǎng)基+ NAA IOmg/L+2，4-D 10 mg/L +活性炭2. 5g/L，pH值為5. 6)中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次。培養(yǎng)3個月后可得到油棕胚性愈傷組織。所得結(jié)果見表I。表I組織培養(yǎng)的效果
權(quán)利要求
1.一種油棕胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，其步驟如下 1)、外植體的選取 選取樹齡8 10年的油棕母株，切取莖干生長點上15cm至95cm處的油棕莖段，經(jīng)表面除雜、清洗后進(jìn)行消毒處理，然后將晾干后的外植體轉(zhuǎn)入超凈工作臺，剝除外層的老葉片，得到無菌的油棕嫩葉； 2)、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng) 將油棕嫩葉修剪至大小為IcmX2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得到愈傷組織，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次；所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以改良MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加激素和活性炭I 5g/L，pH值為·5.O 6. 0，所述激素是NAA、2，4_D或TCPP中的一種、兩種或三種，其添加量分別為NAA200mg/L 以下、2，4-D 60mg/L 以下、TCPP 2mg/L 以下； 所述改良MS培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整其中的肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸卩比卩多醇和煙酸的含量分別為0. I 5mg/L、0. I 5mg/L、0. I 5mg/L、O.I 5mg/L,并添加精氨酸50 300mg/L、天冬氨酸50 300mg/L、谷氨酸50 300mg/L ； ·3 )、胚性愈傷組織的培養(yǎng) 將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得到胚性愈傷組織，培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26 30°C，每3個月繼代一次；所述胚性愈傷組織培養(yǎng)基是以改良MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加激素和活性炭I 5g/L，pH值為5. O 6. 0，所述激素是NAA或2，4-D中的一種或兩種，其添加量分別為NAA 140mg/L以下、2，4_D 20mg/L以下。
全文摘要
本發(fā)明屬植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種油棕胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，是切取油棕母株莖干生長點上的油棕莖段，然后取油棕嫩葉修剪成片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得到愈傷組織；將愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚性愈傷組織培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得到胚性愈傷組織。本發(fā)明步驟簡單，以油棕幼嫩葉片為外植體誘導(dǎo)形成胚性愈傷組織，建立高效的油棕胚性愈傷組織培養(yǎng)體系，提高油棕胚性愈傷組織的產(chǎn)量，有效地解決了油棕胚性愈傷組織誘導(dǎo)困難、誘導(dǎo)率低的問題，為建立油棕組織培養(yǎng)體系、快速繁育油棕組培苗奠定基礎(chǔ)，是一條提高油棕組培苗產(chǎn)量的有效途徑。
文檔編號A01H4/00GK102893862SQ20121024323
公開日2013年1月30日 申請日期2012年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月16日
發(fā)明者鄒積鑫, 潘登浪, 林位夫, 曾憲海, 安鋒, 張希財, 周立軍, 姚行成, 曹建華 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所