專利名稱：亞油酸在防治南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。涉及一種脂肪酸化合物-亞油酸在防治南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
根結(jié)線蟲是世界范圍內(nèi)的重要病原生物之一，它給世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了嚴重損失，每年全世界因此而造成的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟損失高達1570億(Abad，P，Gouzy, J, Aury，J. Μ.，et al. Genome sequence of the metazoan plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita. Nat. Biotechnol. 2008,26,909-915)。目前世界上已經(jīng)報道的根結(jié)線蟲有90余種，而南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)、爪哇根結(jié)線蟲(M. javanica)，花生根結(jié)線蟲(M. arenaria) 和北方根結(jié)線蟲(M.hapla)占整個根結(jié)線蟲的95% (武揚，鄭經(jīng)武，商晗武.根結(jié)線蟲分類和鑒定途徑及進展.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報.2005，17:106-110)。南方根結(jié)線蟲造成設(shè)施生產(chǎn)的一系列問題并使其大量經(jīng)濟作物減產(chǎn)。而在我國北方，以南方根結(jié)線蟲為主，根結(jié)線蟲的寄主植物范圍廣泛，超過3000中植物，包括單子葉植物、雙子葉植物、草本植物、木本植物，特別是蔬菜中的茄科、葫蘆科等經(jīng)濟價值高的作物，尤其是番茄和黃瓜，受害后，一般可造成減產(chǎn)30% 40%，甚至絕收(彭德良.蔬菜線蟲病害的發(fā)生和防治.中國蔬菜.1998，4:57-58)。當(dāng)前， 根結(jié)線蟲的防治主要以化學(xué)藥品防治為主，但是，由于其對環(huán)境、人畜安全的危害，逐漸被立法部門取消。所以，安全有效、低毒的藥品及防治方法迫在眉睫。根結(jié)線蟲主要包括六個生育期，而在線蟲的二齡期，利用發(fā)達的受神經(jīng)支配的頭感器，通過頭部的嗅覺神經(jīng)元(AWA，AffC)來感知根系散發(fā)出的信號物質(zhì)，向寄主植物進行趨向性遷移，侵染植物，從而完成其生命周期(Cortese M R. The expression of the homologue of the Caenorhabditis elegans lin-45 raf is regulated in the motile stages of the plant parasitic nematode Meloidogyne artiellia. Molecular and Biochemical Parasitology，2006，149 :38 47)。因此，在根結(jié)線蟲的二齡期，可以通過干擾根結(jié)線蟲的趨向性遷移，起到線蟲防治的目的。而且，我們前期工作發(fā)現(xiàn)，Ε-value ^ 1 時，秀麗線蟲與南方根結(jié)線蟲同源基因接近6000個，其中mpk-1基因是Ras途徑中的主要功能基因之一，與線蟲的趨向性遷移相關(guān)，并且mpk-1，在秀麗線蟲的南方根結(jié)線蟲中同源性較高(黃利，王宇，董林林，等.南方根結(jié)線蟲與秀麗線蟲同源基因的鑒定及其分析.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2010，15:45-50)，所以mpk-1基因的表達情況可以支持并反映南方根結(jié)線蟲的趨向性遷移?！吨参锉Ｗo》2011年第37卷第2期99-102頁公開了名為“有機酸類化合物對南方根結(jié)線蟲的生物活性”的文章。該文章中采用室內(nèi)離體測定方法，測試了 15種有機酸對南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita) 2齡幼蟲致死率和卵孵化抑制率。結(jié)果表明，甲酸和丙酸對2齡幼蟲和卵的生物活性最高，明顯優(yōu)于其他供試有機酸，但是活性低于對照藥劑阿維菌素。對生物活性結(jié)果及有機酸化學(xué)結(jié)構(gòu)進行比對發(fā)現(xiàn)，小分子量化合物對南方根結(jié)線蟲具有較高生物活性。然而，小分子的化合物雖然對南方根結(jié)線蟲具有較高的生物活性，但是小分子的化合物及其不穩(wěn)定，易揮發(fā)，對作物的生長造成極大的危害，而且加速土壤環(huán)境的酸化。而大分子的脂肪酸，例如，亞油酸相對穩(wěn)定，存在多種植物體，而且對人畜、環(huán)境相對安全，在南方根結(jié)線蟲防治方面表現(xiàn)出更多的潛力。亞油酸是人體必需脂肪酸，花生油、核桃油含有大量的亞油酸，并且對高血壓、心絞痛、動脈粥樣硬化、老年性肥胖癥等的防治極為有利，因此，亞油酸作為防治線蟲的材料，對環(huán)境、人畜安全友好。

發(fā)明內(nèi)容
為克服上述缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種亞油酸在防治南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用。所述應(yīng)用為將亞油酸溶于甲醇中，亞油酸濃度范圍為0. 5mM至4. OOmM。所述亞油酸濃度在1. OOmM至4. OOmM時，作為驅(qū)避劑。亞油酸是人體必需脂肪酸，對高血壓、心絞痛、動脈粥樣硬化、老年性肥胖癥等的防治極為有利，因此，亞油酸作為防治線蟲的材料，對環(huán)境、人畜安全友好。除此之外，亞油酸資源豐富，廣泛分布在植物的油脂中，為哺乳動物所必需。而且亞油酸的合成方法方便， 簡單，材料豐富。亞油酸作為南方根結(jié)線蟲的驅(qū)避劑。本發(fā)明，在實驗室的條件下，驗證亞油酸通過調(diào)控南方根結(jié)線蟲的趨向性遷移來防治線蟲，并為南方根結(jié)線蟲防治效果提供強有力的數(shù)據(jù)支持和新材料。


圖1示出了亞油酸對南方根結(jié)線蟲趨向性的影響。 圖2示出了亞油酸對mpk-1基因的相對表達量的影響。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步詳細描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例中使用的亞油酸(CAS =60-33-3)購買自sigma公司，采用的甲醇為色譜純甲醇。下列實施例采用不同濃度的亞油酸溶液處理南方根結(jié)線蟲的二齡幼蟲，利用趨向性指數(shù)，從生理數(shù)據(jù)來說明亞油酸作為南方根結(jié)線蟲驅(qū)避劑的效果。實施例1將色譜純甲醇配成濃度為4. OOmM的儲存液，并用色譜純甲醇稀釋為亞油酸濃度為0. 50mM的溶液，并保存于-20°C冰箱。實驗室的模擬試驗，按照Ward (Ward Samuel. Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans !identification of attractants and analysis of the response by use of mutants. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1973,70,817-821)禾口 Bargmann 等(Bargmann C. I. , Hartweig Ε. , Horvitz H. R. Odorant selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Cell，1993，74，515-527)所提供的方法，采用直徑為 6cm的培養(yǎng)皿，于對角線位置，分別在距離邊緣Icm標(biāo)記直徑為Icm的圓。每個培養(yǎng)皿中加入IOml 0.8%的瓊脂。在標(biāo)記雙圈的培養(yǎng)皿中，一側(cè)圈內(nèi)加入IOml的色譜純甲醇，另一側(cè)加入IOml的配好的0. 5mM的亞油酸溶液。加入化合物后的培養(yǎng)皿，放入25°C培養(yǎng)箱中避光孵化池，在每個培養(yǎng)皿的中間部位，與兩側(cè)的圓等距的位置，加入50條剛孵化出的南方根結(jié)線蟲的二齡幼蟲，25°C培養(yǎng)箱避光孵化3h，按照Bargmann和Horvitz (Bargmann C. I.， Horvitz H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans. Neuron, 1991,7,729-742)的方法統(tǒng)計趨向性指數(shù) (Chemotaxis Index)，其計算方法為添加亞油酸溶液圓中線蟲的數(shù)量與添加甲醇溶劑圓中線蟲數(shù)量的比值；趨向性指數(shù)> 0. 2時，為吸引；O彡趨向性指數(shù)< 0. 2時，為微弱吸引， 趨向性指數(shù)<-0. 02時，為排斥。并且，統(tǒng)計二齡幼蟲的死亡率，死亡率的計算方法為運動到添加不同濃度亞油酸溶液圓中線蟲死亡數(shù)與圓中線蟲總數(shù)的比值。實施例2除了配制的亞油酸溶液的濃度為ImM外，其余同實施例1。實施例3除了配制的亞油酸溶液的濃度為2mM外，其余同實施例1。實施例4除了使用的亞油酸溶液的濃度為4. OOmM外，其余同實施例1。實施例5同時按照Ward和Bargmarm等的方法，收集2. 000條不同處理的二齡幼蟲，用于 Mi-mpk-1基因表達的分析?；蛐畔⒓盁晒舛縋CR采用的引物，如表1所示。表1. Actin、mpk-1基因及引物信息
權(quán)利要求
1.亞油酸在防治南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞油酸在防治南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用，其特征在于，亞油酸溶于甲醇中，亞油酸濃度范圍為0. 5mM至4. OOmM。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞油酸在防治南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用，其特征在于，亞油酸濃度在1. OOmM至4. OOmM時，作為趨避劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種亞油酸在防治南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用，其是將亞油酸溶于甲醇中，亞油酸濃度范圍為0.50mM至4.00mM，亞油酸濃度在1.00mM至4.00mM時對南方根結(jié)線蟲具有驅(qū)避效應(yīng)。本發(fā)明中使用的亞油酸來源豐富，低毒，對人畜、環(huán)境安全，并且，防治效果顯著提高。
文檔編號A01P17/00GK102524255SQ201110444910
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月27日
發(fā)明者左元梅, 李曉林, 董林林, 陳清 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)