專利名稱：一種大蔥組織培養(yǎng)中的種子消毒方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種大蔥組織培養(yǎng)中的種子消毒方法。
背景技術(shù)：
大MXAlIium fistulosum L.)為百合科蔥屬二年生草本植物，富含|丐、磷、維生素，不僅味道鮮美，而且具有醫(yī)療保健功效。據(jù)FAO統(tǒng)計，2009年我國栽培大蔥面積達26560公頃，居世界第一位。近年來，隨著分子生物技術(shù)的迅速發(fā)展和基因工程的日趨普及，利用轉(zhuǎn)基因植株生產(chǎn)藥物、疫苗和生物制劑愈加展示出廣闊的應(yīng)用前景和潛在的經(jīng)濟效益。在轉(zhuǎn)基因植株的研究中，無菌苗的篩選和培育是試驗成功的關(guān)鍵，而無菌苗一般由種子獲得，因此，種子有效消毒顯得尤為重要。迄今，各種滅菌方法報道頗多(楊嵐等，2008 John H et al.，1985;R.L.M.Pierik, 1987; Trevor A , 1981;吳良?xì)g等，1997，1999)，但是有關(guān)大蔥種子消毒的
方法鮮有報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種大蔥組織培養(yǎng)中種子消毒的有效方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
一種大蔥組織培養(yǎng)中的種子消毒方法，其特征在于:消毒液采用2%的次氯酸鈉溶液，在消毒過程中添加吐溫-20。本方法包括如下步驟:
1)將大蔥種子用自來水沖洗，用自來水沖洗時在三角瓶中加入吐溫-20；
2)置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗；
3)用2%的次氯酸鈉消毒；
4)用加入吐溫-20的無菌水沖洗3-5遍,最后用無菌水沖洗I遍完成消毒步驟。步驟(I)中自來水沖洗時間為20 40min，優(yōu)選為30 min。步驟(I)中吐溫-20的加入量為1-2滴。步驟(2)中酒精漂洗時間為0.5 lmin。步驟(3)中用2%的次氯酸鈉消毒的時間為30min 50 min，優(yōu)選為40 min。

步驟(4)中無菌水中按10000:1的比例添加吐溫-20，所述比例為質(zhì)量比。本發(fā)明所述方法與現(xiàn)有的大蔥組織培養(yǎng)中的種子消毒方法相比，具有發(fā)芽率高、污染率小的優(yōu)點，并保證了較高的成苗率。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進一步的說明，但本發(fā)明并不局限于此。本實施例均以山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所提供的章丘大蔥品種種子為試驗材料。應(yīng)用實施例一
本實施例采用六種常用消毒方法對大蔥種子進行消毒處理，并進行了添加吐溫-20對大蔥種子消毒效果的影響研究，通過調(diào)查大蔥種子始發(fā)期、發(fā)芽率、發(fā)芽勢、污染率等項目。種子消毒處理方法:每個處理200粒種子，先將大蔥種子用自來水沖洗30min，然后置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗0.5 lmin，轉(zhuǎn)入消毒液中進行消毒處理，最后用無菌水沖洗3-5遍，消毒處理后接種于MS培養(yǎng)基。種子消毒處理設(shè)計:①2%的次氯酸鈉中消毒20min 2%的次氯酸鈉中消毒40min 2%的次氯酸鈉中消毒60min。④0.1%的升汞中消毒5min ’⑤0.1%的升汞中消毒IOmin ； 0.1%的升萊中消毒15min。大蔥種子消毒處理添加吐溫-20試驗
處理方法:每個處理100粒種子，先將大蔥種子用自來水沖洗30min，然后置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗0.5 lmin，轉(zhuǎn)入2%次氯酸鈉消毒40min，消毒后接種于MS培養(yǎng)基。處理設(shè)計:①大蔥種子消毒前，用自來水沖洗時在三角瓶中加入1-2滴吐溫-20 ；②大蔥種子消毒后，用加入吐溫-20的無菌水(無菌水中按10000:1的比例添加吐溫-20)，沖洗3-5遍，最后用無菌 水沖洗I遍；③處理I與處理2同時進行；④對照(CK):正常消毒，不加吐溫-20。大蔥無菌苗培養(yǎng)
將消毒處理后的種子，接種于MS培養(yǎng)基(經(jīng)高壓滅菌)培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加蔗糖3%，瓊脂0.9%，ρΗ5.8-6.0。培養(yǎng)溫度25±1°C，光照強度3000Lx，光照時間每天16h。培養(yǎng)10天時調(diào)查統(tǒng)計發(fā)芽勢；培養(yǎng)30天時調(diào)查統(tǒng)計發(fā)芽率、污染率；第一粒種子發(fā)芽的時間為種子發(fā)芽始期。數(shù)據(jù)處理采用SPSS軟件。結(jié)果與分析如下:
O消毒方法對大蔥種子發(fā)芽及消毒效果的影響 表I不同消毒方法的效果比較
權(quán)利要求
1.一種大蔥組織培養(yǎng)中的種子消毒方法，其特征在于:消毒液采用2%的次氯酸鈉溶液，在消毒過程中添加吐溫-20。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步驟: 1)將大蔥種子用自來水沖洗，用自來水沖洗時在三角瓶中加入吐溫-20； 2)置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗； 3)用2%的次氯酸鈉消毒； 4)用加入吐溫-20的無菌水沖洗3-5遍,最后用無菌水沖洗I遍為最佳的消毒方法。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(I)中自來水沖洗時間為20 40min ;吐溫-20的加入量為0.1ml 0.2ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(2)中酒精漂洗時間為0.5 lmin。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(3)中用2%的次氯酸鈉消毒的時間為40mino
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(4)中無菌水中按10000:1的比例添加吐溫- 20。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大蔥組織培養(yǎng)中的種子消毒方法，包括以下步驟1)將大蔥種子用自來水沖洗，用自來水沖洗時在三角瓶中加入吐溫-20；2)置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗；3)用2%的次氯酸鈉消毒；4)用加入吐溫-20的無菌水沖洗3-5遍，最后用無菌水沖洗1遍為最佳的消毒方法。采用本發(fā)明所述方法消毒所得的大蔥種子，發(fā)芽率高、污染率小，保證較高的成苗率。
文檔編號A01H4/00GK103155863SQ20111041771
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月14日
發(fā)明者步懷宇 申請人:西安瑞捷生物科技有限公司