專利名稱：水稻稻瘟病抗性鑒定方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明專利涉及一種通過離體水稻莖稈對稻瘟病抗性鑒定的方法，主要應用于水稻品種和新品種選育過程中的抗病篩選。
背景技術(shù)：
稻瘟病(Magnaporthe oryzae)是水稻生產(chǎn)上潛在威脅最嚴重的病害，現(xiàn)全球 85個水稻種植的國家和地區(qū)均有發(fā)生。每年水稻由于稻瘟病導致的損失，約占總產(chǎn)量的10% 15%，損失達數(shù)十億美元。我國南北稻區(qū)均有發(fā)生，病害流行地區(qū)，重的可達 40%-50%，特別重的田塊甚至顆粒無收。在病害防治方面，提出了以抗性品種的合理使用與藥劑防治為關(guān)鍵技術(shù)的綜合防治措施，這些措施對有效地防治稻瘟病、確保我國糧食生產(chǎn)安全發(fā)揮了巨大的作用?，F(xiàn)有的稻瘟病的抗性鑒定方法，特別是穗瘟的抗性鑒定，與葉瘟的抗性鑒定方法相比，穗瘟鑒定上的困難是由于不同品種抽穗期的明顯差異以及從播種到抽穗期的生育期長等，至今，國內(nèi)外尚未有統(tǒng)一的人工接種鑒定方法。由于各自的某些缺陷，沒有得到普遍采用，目前用的較多的方法是在孕穗期進行活體注射接種，菌液濃度約為1X105個孢子/ mL，注射量為1. 0 mL，每個品種接種20 30個穗苞，至水稻黃熟期調(diào)查發(fā)病情況。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決上述現(xiàn)有方法中存在的不足之處，提供一種簡便、有效、準確的水稻稻瘟病抗性鑒定方法。為了達到以上目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
從水稻種植田間剪取處于大苞期的水稻莖桿，帶回實驗室，剪取莖桿節(jié)上部2cm，下部 5 6cm，總長約7 8cm長的莖桿，將3根莖桿放入雙層過濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿加ImL的無菌水，將培養(yǎng)好的稻瘟病菌孢子用無菌水洗后，調(diào)至濃度為IO6個/ml，用移液槍在每根莖桿的莖桿節(jié)位點滴人的孢子懸浮液。將培養(yǎng)皿放入^TC的光照培養(yǎng)箱中，并用透明的薄膜包被，以保持培養(yǎng)皿內(nèi)的濕度，光暗交替培養(yǎng)10天調(diào)查病情。分級標準如下 1級病斑長度小于0. 5cm 2級病斑長度為0. 6cm 1. 5cm 3級病斑長度大于1. 5cm
調(diào)查病級1級的為抗病品種，2級的為感病品種，3級的為高感品種。本發(fā)明方法比現(xiàn)有的的方法創(chuàng)新之處為
從水稻種植田間剪取處于大苞期的水稻莖桿，比現(xiàn)有的方法中穗長露出4 8cm早3-4 天，剪取水稻莖桿的生育期不同，比現(xiàn)有的方法早3-4天的大苞期莖桿更易發(fā)病，實驗結(jié)果更真實可信。優(yōu)化了接種的稻瘟病孢子濃度和接種量。創(chuàng)立了更簡便，準確的分級標準。
具體實施方式
從水稻種植田間剪取處于大苞期的水稻莖桿，剪取長約7cm長的莖桿，莖桿節(jié)上部2cm，下部5cm，將3根莖桿放入雙層過濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)(每皿加ImL的無菌水);將培養(yǎng)好的稻瘟病菌孢子用無菌水洗下，調(diào)至濃度為106個/ml，用移液槍在每根莖桿的莖桿節(jié)位點滴人的孢子懸浮液。將培養(yǎng)皿放入^TC的光照培養(yǎng)箱中，并用透明的薄膜包被，以保持培養(yǎng)皿內(nèi)的濕度，光暗交替培養(yǎng)10天調(diào)查病情。分級標準如下1級病斑長度小于0. 5cm ； 2級病斑長度為0. 6cm 1. 5cm ；3級病斑長度大于1. 5cm ；調(diào)查病級1級的為抗病品種， 2級的為感病品種，3級的為高感品種。對比實驗如下
以近幾年江西省種植面積較大、且抗性差異明顯的9個早稻品種和麗江新團黑谷(對照)為材料，采用了以下地二種方法對水稻品種的穗瘟抗性進行了鑒定。第一種生態(tài)多點分批播種法，即在全省范圍內(nèi)選擇生態(tài)條件不同的5個試驗縣(點)，每一品種分三批播種 (直播)，間隔期為5天，在自然條件下于水稻黃熟期調(diào)查病穗率；第二種活體穗苞注射接種法，即在水稻大苞期，注射濃度為1X105個/ mL的稻瘟病菌孢子液ImL于穗苞內(nèi)，在黃熟期按0 9級標準調(diào)查； 1、生態(tài)多點分批播種法
在全省選擇生態(tài)環(huán)境不同的5個縣信豐、宜豐、泰和、婺源和永修縣進行試驗。各縣均選擇稻瘟病常發(fā)區(qū)進行試驗。同一個品種分3批播種，間隔期為5天，各地根據(jù)氣候于4月初到上旬末播種。播種采用直播。每品種播種面積為5m2，播種量為15g，小區(qū)之間間隔33. 3 cm，各品種按序號排列。試驗田除不防治稻瘟病外，其余按正常農(nóng)事操作，并適當多施氮肥， 誘發(fā)稻瘟病。在水稻黃熟期，調(diào)查各品種的穗瘟發(fā)病率，方法及抗性劃分按照孫漱沅等方法。2、活體穗苞注射接種法
于6月22日在各小區(qū)內(nèi)選擇剛剛破胸(稻穗仍未露出)的稻苞，用注射器注入ImL的各菌株孢子液，同一菌株在每個品種上注射3根稻苞。于黃熟期調(diào)查病情，方法及標準按按照孫漱沅等方法。試驗結(jié)果
現(xiàn)將上述三種方法的鑒定結(jié)果列入表1。作兩點說明，第一、宜豐和永修縣9個主栽品種三批播種試驗中均未穗瘟發(fā)生，因此，表1中生態(tài)多點分批播種法的病穗率是信豐、泰和和婺源三地試驗的平均值。第二、離體穗段點滴接種法和活體穗苞注射接種法中病級均為8 個菌株接種發(fā)病的平均值。從表2可知，在供試的10個品種中，采用生態(tài)多點分批播種法， 鑒定的抗病品種(包括中抗)有6個，采用離體莖稈點滴接種法定，鑒定的抗病品種有5個， 采用活體穗苞注射接種法，鑒定的抗病品種有1個，這表明，在這三種方法中活體穗苞注射接種法發(fā)病最重，而生態(tài)多點分批播種法和離體穗段點滴接種法鑒定的結(jié)果相近。從具體的鑒定結(jié)果來看，在生態(tài)多點分批播種法鑒定的6個抗病品種中，其中的5個品種采用離體穗段點滴接種法鑒定的結(jié)果也表現(xiàn)為抗病(包括中抗)，僅陸兩優(yōu)996除外，鑒定為中感，這表明，這兩種方法的鑒定結(jié)果是相當吻合的。由于生態(tài)多點分批播種法是大田自然的抗性鑒定結(jié)果，是客觀的，據(jù)此，我們認為本發(fā)明離體穗段點滴接種法的結(jié)果有較高的可信度。 相比，活體穗苞注射接種法不能有效地區(qū)分品種的中抗、中感和感病性。表1三種鑒定方法的結(jié)果比較生赫點am播靴去寓體點滴法活碰苞·;■ 謝接_品種病糖率抗性抗性病11(0 S1抗性抗性病纖0-9抗性抗性？aiiely(ΥΛ評價排序S )評價排序S標準 評價排序PercentEm.Order.ScAEVA.QnderScaleEVA.Order金憂4585,30中感？6.0感病97.75商感8株兩憂 0.41抗病11.25中抗23.00中感2陸兩憂996 1,16中抗33.S8中感β5.75慼病5先農(nóng)37號 3.45中感85.25感病87.75商感8麗江黑谷1522感病108.50高感108.75高感10株兩細2Ι. 中抗30.13抗病11.50抗病1IODO感病94.75中感？7.50高感7淦鑫 203 0.89抗病23.00中抗55.75感病5金優(yōu)4633.37中抗62.18中抗45.30感病4T 優(yōu) 8982.29中抗51.63中抗34.50感病3
權(quán)利要求
1.水稻稻瘟病抗性鑒定方法，其特征在于從水稻種植田間剪取處于大苞期的水稻莖桿，帶回實驗室，剪取莖桿節(jié)上部2cm，下部5 6cm，總長約7 8cm長的莖桿，將3根莖桿放入雙層過濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿加ImL的無菌水，將培養(yǎng)好的稻瘟病菌孢子用無菌水洗后，調(diào)至濃度為IO6個/ml，用移液槍在每根莖桿的莖桿節(jié)位點滴人的孢子懸浮液，將培養(yǎng)皿放入^TC的光照培養(yǎng)箱中，并用透明的薄膜包被，以保持培養(yǎng)皿內(nèi)的濕度，光暗交替培養(yǎng)10天調(diào)查病情，調(diào)查病級分級標準如下 1級病斑長度小于0. 5cm 2級病斑長度為0. 6cm 1. 5cm 3級病斑長度大于1. 5cm1級的為抗病品種，2級的為感病品種，3級的為高感品種。
全文摘要
水稻稻瘟病抗性鑒定方法，從水稻種植田間剪取處于大苞期的水稻莖桿，帶回實驗室，剪取莖桿節(jié)上部2cm，下部5～6cm，總長約7～8cm長的莖桿，將3根莖桿放入雙層過濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿加1mL的無菌水，將培養(yǎng)好的稻瘟病菌孢子用無菌水洗后，調(diào)至濃度為106個/ml,用移液槍在每根莖桿的莖桿節(jié)位點滴人8μL的孢子懸浮液，將培養(yǎng)皿放入26℃的光照培養(yǎng)箱中，并用透明的薄膜包被，以保持培養(yǎng)皿內(nèi)的濕度，光暗交替培養(yǎng)10天調(diào)查病情，調(diào)查病級分3，1級的為抗病品種，2級的為感病品種，3級的為高感品種。本發(fā)明優(yōu)化了接種的稻瘟病孢子濃度和接種量，創(chuàng)立了更簡便，準確的分級標準。
文檔編號A01G7/00GK102487742SQ20111039667
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月5日
發(fā)明者何烈干, 蘭波, 孟干, 李湘民, 楊迎青 申請人:江西省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所