專利名稱：武夷菌素孢子粉及其生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種武夷菌素，具體地說是ー種武夷菌素孢子粉及其生產(chǎn)エ藝，利用武夷菌素孢子作為生物農(nóng)藥應(yīng)用于植物的病蟲害防治，屬于生物農(nóng)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的殺菌劑大部分是化學(xué)農(nóng)藥，其中有些生物農(nóng)藥是利用深層發(fā)酵，使有益微生物產(chǎn)生的代謝物質(zhì)具有殺菌抑菌的作用(也稱為生物化學(xué)產(chǎn)品)。傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥殺菌劑，其殺菌的主要有效成分在自然界中很難分解，殘留期長，對生物有害，雖不提倡，但仍是植物保護技術(shù)中的主要產(chǎn)品。生化農(nóng)藥大部分毒性較低，環(huán)境相容性較大，是現(xiàn)在提倡的技術(shù)和產(chǎn)品。而生物農(nóng)藥在推廣使用中也發(fā)現(xiàn)ー些問題的弱點一是生產(chǎn)成本高，帶來的使用成本高；二是生化代謝物較價提高的技術(shù)難有突破性的發(fā)展；三是生化產(chǎn)品代謝物在防治作物病害的過程中也會促使病蟲產(chǎn)生抗藥性，而必須加大使用濃度，影響了實際推廣；四是水劑型生化農(nóng)藥主要市場在保護地大棚蔬菜等上噴施，灌根，加大了溫度降低了效果，防治病害也受影響。各種不同的環(huán)境的差異也帶來使用效果的差異。武夷菌素是中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研制的具有防病增產(chǎn)效果的生物農(nóng)藥產(chǎn)品，其來源于
iStreptomyces anhygroscopicus var. wuyiensis ) /i^i^——禾中in 生素(微生物學(xué)報，24:401-402, 1984 農(nóng)用抗生素B0-10產(chǎn)生菌的鑒定)，主要用于防治農(nóng)作物真菌病害，對植物的白粉病、番茄灰霉病、番茄葉霉病、黃瓜黒星病等多種真菌病害有良好的防治效果，其主要成分為具有胞苷骨架的核苷類抗生素，對人畜安全，因此，在生態(tài)農(nóng)業(yè)和緑色食品生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述生物農(nóng)藥的局限性，本發(fā)明提供了一種武夷菌素孢子粉及其生產(chǎn)エ 藝，利用深層液體發(fā)酵和連接固體發(fā)酵兩個階段的エ藝方法達到培養(yǎng)出50億個/克武夷菌孢子的高含量的武夷菌孢子粉生物農(nóng)藥，采用エ業(yè)化生產(chǎn)，利于生物農(nóng)藥擴大規(guī)模。本發(fā)明的技術(shù)方案為
一種武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，包括以下步驟
(1)液體培養(yǎng)將武夷菌種按液體培養(yǎng)基質(zhì)量的5-10%接種，在觀で恒溫下利用搖床振動發(fā)酵2-3天，得到含有武夷菌絲體的液體；
(2)固體培養(yǎng)將上述步驟(1)液體發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵得到的武夷菌絲體與固體發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為1 3-4混合，在溫度觀-30で、濕度60-80%的條件下固體發(fā)酵培養(yǎng)3_5 天；
(3)干燥將上述步驟(2)固體發(fā)酵后的含有充分孢子的培養(yǎng)物料進行干燥，干燥溫度 450C，時間10-30分鐘，使物料水分至低于8% ；
(4)粉碎分離將上述步驟(3)干燥后的含有大量武夷菌孢子的干燥物進行粉碎，然后利用80-100目的篩網(wǎng)，分離原培養(yǎng)物料和武夷菌絲體后，得到武夷菌孢子粉。在上述步驟(1)接種前，對武夷菌菌進行活化，將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的活化培養(yǎng)基中，逐級擴大培養(yǎng)是為了得到純而壯的武夷菌種，一般需要有2-3代的復(fù)壯過程，讓菌種逐漸適應(yīng)作生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)環(huán)境。其中，所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為馬鈴薯150-200克，葡萄糖15-20克，磷酸ニ氫鉀1-2克，硫酸鎂0. 5-1克、酵母膏0. 5克、蛋白胨0. 5克、氯化鈉0. 5克、水1000毫升，pH 值 6. 5。所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量分?jǐn)?shù)組成為豆餅粉20-30%，玉米粉5-20%，麩皮 5-10%，磷酸ニ氫鉀0. 08-0. 2%，磷酸鎂0. 2%，碳酸鈣0. 3%，水補余。所述步驟(2)的固體發(fā)酵培養(yǎng)基的厚度為6-8厘米，培養(yǎng)過程中在培養(yǎng)基表面布滿菌絲吋，全部翻一遍使培養(yǎng)物上下均勻接受空氣和水分，以便武夷菌孢子在培養(yǎng)基表面擴大生長量。所述步驟(3)的干燥設(shè)備為帶式真空低溫連續(xù)干燥機。采用本發(fā)明方法得到的孢子制品的孢子數(shù)量達50億個/克以上，雙相發(fā)酵培養(yǎng)武夷孢子粉，首先在液相培養(yǎng)保證了武夷菌種的純度，避免了其它雜菌的干擾和武夷菌孢子 “幾何級倍數(shù)的增長”；再轉(zhuǎn)入固態(tài)培養(yǎng)后，在好氣狀態(tài)下，促成武夷菌絲和孢子更迅速的成長，更有利恢復(fù)原始的特性和長勢。由于孢子的抗逆性強，因此利于保存、運輸和多種方法使用，特別是林木、果樹的病害防治。采用本發(fā)明方法得到的孢子制品的孢子數(shù)量> 50.0X 108，含水量彡8%，pH值 =4. 0-7. 0，有效成分分解率< 5%，熱貯穩(wěn)定性合格。武夷菌孢子粉呈長螺旋形，一般5-12圈螺旋，抱子為圓形或橢圓形，大小均勻，孢子表面帶刺，在PDA培養(yǎng)基上氣生菌粉呈灰白色或灰色，基內(nèi)菌粉體黃色。經(jīng)研究和試驗發(fā)現(xiàn)，利用武夷菌素產(chǎn)生菌作為生防菌，可以直接防治作物土傳病害，例如防治茄子的黃萎病、棉花的枯萎病等都有明顯的效果，優(yōu)于其他農(nóng)藥更具有高效、 廣譜、低毒、環(huán)境安全的特點，
武夷菌素孢子粉的防病原理是活體在病株葉面、根部生長后分泌抗生素，生態(tài)位競爭和寄生于作物表面維持作物生長的生態(tài)平衡。不產(chǎn)生化學(xué)農(nóng)藥使用后的抗藥性和殘留毒性。通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方之后孢子繁育能力得到提高，特別是采取優(yōu)化的液相培養(yǎng)加故鄉(xiāng)擴培的方法是武夷菌固相體發(fā)酵效率5億/g活孢子，提高到50億/g以上。利用此產(chǎn)品制成的武夷孢子粉生物農(nóng)藥，其防病原理為生態(tài)位競爭、寄生和分泌抗生素。由于本發(fā)明所用培養(yǎng)基配方與傳統(tǒng)技術(shù)配方不同，特別是固態(tài)培養(yǎng)的供養(yǎng)方式改善，武夷孢產(chǎn)孢能 カ極強，產(chǎn)品エ業(yè)化成本低。田間試驗證明，武夷菌孢子粉可采用噴施、拌種、追肥、穴施等。 其活菌在作物體表或根部土壌寄生后其活菌代謝物中有效抗菌物質(zhì)成分含量高，與病菌搶占位點積極。同時形成刺激作物產(chǎn)生自發(fā)抗逆病蟲害的機制，與國際學(xué)術(shù)界近幾年倡導(dǎo)的 “植物健康倡導(dǎo)理論”相符合。本發(fā)明的優(yōu)點在于利用先液相再固相擴大培養(yǎng)得到的武夷菌孢子粉含量達50 億/克以上，因孢子的抗逆性強，因此，更利于保存、運輸，且使用方法靈活多祥，即可采用粉劑直接噴灑，也可制成液體制劑噴施，使用方便；同時不僅原料環(huán)保，且制造前、制造中和使用時也綠色環(huán)保，達到低碳和綠色的要求，具有很高的社會效益和環(huán)保效益，能夠廣泛應(yīng)用于蔬菜、果樹、林業(yè)等作物的多種病害防治，防治效果顯著。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用干限定本發(fā)明。實施例1
一種武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，包括以下步驟
1、將活化后的武夷菌斜面種子，按質(zhì)量百分比為8%接入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，保持觀で溫度，搖床震蕩培養(yǎng)，發(fā)酵3天。其中，所用液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為馬鈴薯180克，葡萄糖16克，磷酸ニ氫鉀 1. 5克，硫酸鎂1克、酵母膏0. 5克、蛋白胨0. 5克、氯化鈉0. 5克、水1000毫升、pH值6. 5。2、將液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)好的武夷菌菌絲體與固體發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為 1 3混合，攪拌均勻(以手握成團后能散開為標(biāo)準(zhǔn))，在觀で、濕度60%條件下進行固相發(fā)酵，固態(tài)發(fā)酵條件下培養(yǎng)基的厚度為6厘米，及時灑水保持濕度在物料表面布滿菌粉時全部翻轉(zhuǎn)使固態(tài)培養(yǎng)料均勻接受溫度和水分、空氣，擴大培養(yǎng)效果。培養(yǎng)4天產(chǎn)生接近自然形態(tài)的氣生武夷菌孢子。其中，固體發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量分?jǐn)?shù)組成為豆餅粉20%，玉米粉20%，麩皮5%，磷酸 ニ氫鉀0. 08%,磷酸鎂0. 2%，碳酸鈣0. 3%，水補余。3、將上述固體發(fā)酵后的含有充分孢子的培養(yǎng)物料利用PLG系列連續(xù)真空干燥機 (江蘇常州市振興干燥設(shè)備有限公司，規(guī)格typel500/12型功率llkw)進行干燥，調(diào)整真空干燥機在45°C烘干全部發(fā)酵物料。4粉碎上述烘干后的固態(tài)發(fā)酵物料。5利用機械振動分離得到武夷菌孢子粉。采用ZD6*5振動篩分機使孢子與菌絲體和培養(yǎng)物料分離，經(jīng)鏡檢和生物測定得到含量50億個/克以上的武夷孢子粉。本發(fā)明武夷菌孢子粉控制指標(biāo)如下對比試驗保護地番茄葉霉病控制試驗
番茄葉霉病為半知菌亞門病害，在高溫高濕的保護地栽培為多發(fā)病害，采用武夷菌孢子粉生物制劑(本實施例制得的孢子粉粉與填充輔料硅藻土混合后得到的實際含量在2億 /克的制劑，輔料硅藻土能夠?qū)︽咦臃圻M行稀釋，同時讓孢子粉附著在填充料上，便于農(nóng)業(yè)使用方便。)與800倍液的多菌靈相同條件下，葉面噴施每周一次，共施用3次，效果如下表
權(quán)利要求
1.一種武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，其特征在干，包括以下步驟(1)液體培養(yǎng)將武夷菌種按液體培養(yǎng)基質(zhì)量的5-10%接種，在觀で恒溫下利用搖床振動發(fā)酵2-3天；(2)固體培養(yǎng)將上述步驟(1)液體發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵得到的武夷菌絲體與固體發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為1 3-4混合，在溫度觀-30で、濕度60-80%的條件下固體發(fā)酵培養(yǎng)3_5 天；(3)干燥將上述步驟(2)固體發(fā)酵后的培養(yǎng)物料進行干燥，干燥溫度45°C，時間10-30 分鐘，使物料水分至低于8%;(4)粉碎分離將上述步驟(3)干燥后的含有大量武夷菌孢子的干燥物進行粉碎，然后利用80-100目的篩網(wǎng)，分離原培養(yǎng)物料和武夷菌絲體后，得到武夷菌孢子粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，其特征在于在上述步驟(1)接種前，對武夷菌的菌種進行活化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，其特征在于所述步驟(2)的固體發(fā)酵培養(yǎng)基的厚度為6-8厘米，培養(yǎng)過程中在培養(yǎng)基表面布滿菌絲吋，全部翻一遍使培養(yǎng)物上下均勻接受空氣和水分，以便武夷菌孢子在培養(yǎng)基表面擴大生長量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，其特征在于所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為馬鈴薯150-200克，葡萄糖15-20克，磷酸ニ氫鉀1_2克，硫酸鎂0. 5-1克、 酵母膏0. 5克、蛋白胨0. 5克、氯化鈉0. 5克、水1000毫升，pH值6. 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，其特征在于所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量分?jǐn)?shù)組成為豆餅粉20-30%，玉米粉5-20%，麩皮5-10%，磷酸ニ氫鉀 0. 08-0. 2%，磷酸鎂0. 2%，碳酸鈣0. 3%，水補余。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝，其特征在于所述步驟(3)的干燥設(shè)備為帶式真空低溫連續(xù)干燥機。
7.一種由權(quán)利要求1-6中任意一項所述的武夷菌素孢子粉的生產(chǎn)エ藝制備得到的武夷菌素孢子粉，其特征在于所述的武夷菌素孢子粉的孢子數(shù)量> 50. OX 108，含水量く 8%， PH值=4. 0-7. 0，有效成分分解率彡5%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種武夷菌素孢子粉及其生產(chǎn)工藝，包括液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)、干燥、粉碎分離，得到武夷菌孢子粉，武夷菌素孢子粉的孢子數(shù)量≥50.0×108，含水量≤8%，pH值=4.0-7.0，有效成分分解率≤5%；本發(fā)明的優(yōu)點在于利用先液相再固相擴大培養(yǎng)得到的武夷菌孢子粉含量達50億/克以上，因孢子的抗逆性強，因此，更利于保存、運輸，且使用方法靈活多樣，即可采用粉劑直接噴灑，也可制成液體制劑噴施，使用方便，特別適合林木、果樹的病害防治，防治效果顯著。
文檔編號A01P3/00GK102533630SQ201110352110
公開日2012年7月4日 申請日期2011年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月9日
發(fā)明者孫波, 李樹青, 李鵬, 雷音 申請人:濰坊萬勝生物農(nóng)藥有限公司