專利名稱：月桂酸防治南方根結(jié)線蟲的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及月桂酸的一種新用途，特別涉及月桂酸在防治南方根結(jié)線蟲中的用途。
背景技術(shù)：
根結(jié)線蟲是世界范圍內(nèi)的重要病原生物之一，它給世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了嚴重的損失，每年全世界因此而造成的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟損失高達1570億。目前世界上已經(jīng)報道的根結(jié)線蟲有90余種，而南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)、爪哇根結(jié)線蟲(M. javanica)、花生根結(jié)線蟲(Marenaria)和北方根結(jié)線蟲(M. hap la)占整個根結(jié)線蟲的95%。南方根結(jié)線蟲可造成設(shè)施生產(chǎn)的一系列問題，并使大量經(jīng)濟作物減產(chǎn)。在我國北方，以南方根結(jié)線蟲為主，根結(jié)線蟲的寄主植物范圍廣泛，超過3000種植物，包括單子葉植物、雙子葉植物、草本植物和木本植物，特別是蔬菜中的茄科、葫蘆科等經(jīng)濟價值高的作物，其中的番茄和黃瓜受害后一般可減產(chǎn)30% 40%，甚至絕收。當前，根結(jié)線蟲的防治主要以化學藥品防治為主， 其對環(huán)境、人畜安全的存在嚴重危害，正逐漸被立法部門取消。因此，安全、有效、低毒的藥品及防治方法迫在眉睫。根結(jié)線蟲主要包括六個生育期，而在它的二齡期，可利用發(fā)達的受神經(jīng)支配的頭感器，通過頭部的嗅覺神經(jīng)元(AWA，AffC)來感知根系散發(fā)出的信號物質(zhì)，向寄主植物進行趨向性遷移，侵染植物，從而完成其生命周期。因此，在根結(jié)線蟲的二齡期，可以通過干擾根結(jié)線蟲的趨向性遷移，起到線蟲防治的目的。隨著模式動物秀麗線蟲(Caenorhabditis elegans)基因組測序工作的完成，目前已分離和鑒定了 19800個能夠編碼6627個蛋白家族的基因，并對有關(guān)基因的功能進行了詳細而深入的研究。而且，我們前期工作發(fā)現(xiàn)， Ε-value ^ 1時，秀麗線蟲與南方根結(jié)線蟲同源基因接近6000個，其中mpk-1基因是Ras途徑中的主要功能基因之一，與線蟲的趨向性遷移相關(guān)，并且mpk-Ι基因在秀麗線蟲和南方根結(jié)線蟲中同源性較高，所以mpk-Ι基因的表達情況可以支持并反映南方根結(jié)線蟲的趨向性遷移。月桂酸作為一種天然脂肪酸，無毒，在食品添加劑、香料工業(yè)、制藥等方面均有諸多應用，目前尚未見有用于防治南方根結(jié)線蟲的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供月桂酸的一種新用途。該新用途為月桂酸用于制備南方根結(jié)線蟲殺蟲劑；在該殺蟲劑中，月桂酸可單獨作為活性成分，也可與其它具有防治南方根結(jié)線蟲活性的成分進行配伍共同作為活性成分。所述殺蟲劑具體可為月桂酸的甲醇溶液。所述殺蟲劑為驅(qū)避劑或引誘劑；所述月桂酸在所述驅(qū)避劑中的濃度為4. OOmM ；所述月桂酸在所述引誘劑中的濃度為0. 5mM-2. OOmM。本發(fā)明還提供兩種防治南方根結(jié)線蟲的方法
一種方法包括如下步驟將所述驅(qū)避劑用于防治南方根結(jié)線蟲；所述防治南方根結(jié)線蟲為驅(qū)避并殺死南方根結(jié)線蟲；另一種方法包括如下步驟將所述引誘劑用于防治南方根結(jié)線蟲；所述防治南方根結(jié)線蟲為吸引并殺死南方根結(jié)線蟲。使用月桂酸的甲醇溶液防治南方根結(jié)線蟲，安全、無毒、有效，當月桂酸溶液的濃度為4. OOmM時可驅(qū)避并殺死南方根結(jié)線蟲，致死率高達67%，當月桂酸溶液的濃度為
0.50mM-2. OOmM時可吸引并殺死南方根結(jié)線蟲，致死率高達39%。


圖1為不同濃度月桂酸的甲醇溶液檢測南方根結(jié)線蟲趨向性的示意圖。其中，A表示添加甲醇的圈，B表示添加月桂酸溶液的圈，C表示放線蟲位置。圖2為不同濃度月桂酸的甲醇溶液對南方根結(jié)線蟲趨向性的影響。圖3為不同濃度月桂酸的甲醇溶液對南方根結(jié)線蟲死亡率的影響。圖4為不同濃度月桂酸的甲醇溶液對南方根結(jié)線蟲Mi-mpk-Ι表達的影響。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、不同濃度月桂酸的甲醇溶液對南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita) 的影響1、材料將月桂酸(CAS :143-07-7，Sigma)用色譜純甲醇配成濃度為0. 50mM、
1.OOmM,2. OOmM和4. OOmM的溶液，分別得到0. 50mM月桂酸的甲醇溶液(殺蟲劑1)、1. OOmM 月桂酸的甲醇溶液(殺蟲劑2)、2. OOmM月桂酸的甲醇溶液(殺蟲劑3)和4. OOmM月桂酸的甲醇溶液(殺蟲劑4)。于-20°C冰箱保存?zhèn)溆?。南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)(武揚，鄭經(jīng)武，商晗武.根結(jié)線蟲分類和鑒定途徑及進展.浙江農(nóng)業(yè)學報.2005，17:106-110，公眾可從中國農(nóng)業(yè)大學獲得)的二齡幼蟲。2、方法使用殺蟲劑1-4及色譜純甲醇(對照)分別處理南方根結(jié)線蟲 (Meloidogyne incognita)的二齡幼蟲，利用趨向性指數(shù)、線蟲死亡率、Mi-mpk-l基因表達的結(jié)果，從生理水平和分子水平說明月桂酸作為南方根結(jié)線蟲殺蟲劑的效果。實驗室條件下，按照 Ward(Ward Samuel. Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans :Identification of attractants and analysi sof the response by use of mutants. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1973,70,817-821)禾口 Bargmann 等(Bargmann C. I. , Hartweig Ε. , Horvitz H. R. Odorant selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Cell，1993，74，515-527)所提供的方法，采用直徑為 6cm的培養(yǎng)皿，分別在一個直徑的距離培養(yǎng)皿邊緣Icm處標記直徑為Icm的圓。每個培養(yǎng)皿中加入IOml 0.8%的瓊脂。在標記雙圈的培養(yǎng)皿中，一側(cè)圈內(nèi)加入IOml的色譜純甲醇，另一側(cè)加入IOml不同濃度的月桂酸溶液。在兩側(cè)圓中，均加入10 μ L色譜純甲醇作為陰性對照。加入化合物后的培養(yǎng)皿，先放入25°C培養(yǎng)箱中避光孵化2小時，取出后在每個培養(yǎng)皿的中間部位，與兩側(cè)的圓等距的位置(圖1)加入50條剛孵化出的南方根結(jié)線蟲的二齡幼蟲，再25°C培養(yǎng)箱避光孵化3小時，按照Bargmann和Horvitz (Bargmann C. I.， Horvitz H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans. Neuron, 1991,7,729-742)的方法統(tǒng)計趨向性指數(shù) (Chemotaxis Index)，其計算方法為添加月桂酸溶液圓中線蟲的數(shù)量與添加甲醇溶劑圓中線蟲數(shù)量的差，與加入線蟲總數(shù)的比值，即趨向性指數(shù)=(月桂酸溶液圓中線蟲數(shù)量-甲醇圓中線蟲數(shù)量)/加入線蟲的總量；趨向性指數(shù)> 0. 2時，為吸引；O彡趨向性指數(shù)< 0. 2 時，為微弱吸引，趨向性指數(shù)<-0.02時，為排斥。同時統(tǒng)計二齡幼蟲的死亡率，死亡率的計算方法為運動到添加不同濃度月桂酸溶液圓中線蟲死亡數(shù)與圓中線蟲總數(shù)的比值。每個濃度的月桂酸溶液處理做3皿重復，分別統(tǒng)計每皿中添加月桂酸溶液(B)圓中線蟲的數(shù)量及圓中線蟲死亡數(shù)，和添加甲醇溶劑(A)圓中的線蟲數(shù)量，計算趨向性指數(shù)、 死亡率及各重復的平均值，結(jié)果見表1和圖2。表1.不同濃度的月桂酸的甲醇溶液處理南方根結(jié)線蟲的統(tǒng)計結(jié)果
權(quán)利要求
1.月桂酸在制備南方根結(jié)線蟲殺蟲劑中的應用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述南方根結(jié)線蟲殺蟲劑的活性成分為月桂酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應用，其特征在于所述南方根結(jié)線蟲殺蟲劑為月桂酸的甲醇溶液。
4.一種防治南方根結(jié)線蟲的殺蟲劑，其特征在于所述殺蟲劑為月桂酸的甲醇溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的應用或權(quán)利要求4所述的殺蟲劑，其特征在于所述殺蟲劑為驅(qū)避劑或引誘劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應用或權(quán)利要求4或5所述的殺蟲劑，其特征在于在所述驅(qū)避劑中，所述月桂酸在所述驅(qū)避劑中的濃度為4. OOmM;在所述引誘劑中，所述月桂酸在所述引誘劑中的濃度為0. 5mM-2. OOmM。
7.一種防治南方根結(jié)線蟲的方法，包括如下步驟將權(quán)利要求5或6中所述驅(qū)避劑用于防治南方根結(jié)線蟲；所述防治南方根結(jié)線蟲為驅(qū)避并殺死南方根結(jié)線蟲。
8.一種防治南方根結(jié)線蟲的方法，包括如下步驟將權(quán)利要求5或6中所述引誘劑用于防治南方根結(jié)線蟲；所述防治南方根結(jié)線蟲為吸引并殺死南方根結(jié)線蟲。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種月桂酸防治南方根結(jié)線蟲的新用途。該新用途為月桂酸用于制備南方根結(jié)線蟲殺蟲劑；在該殺蟲劑中，月桂酸可單獨作為活性成分，也可與其它具有防治南方根結(jié)線蟲活性的成分進行配伍共同作為活性成分。所述殺蟲劑為月桂酸的甲醇溶液，所述殺蟲劑為驅(qū)避劑或引誘劑，所述月桂酸在所述驅(qū)避劑中的濃度為4.00mM；所述月桂酸在所述引誘劑中的濃度為0.5mM-2.00mM。使用月桂酸的甲醇溶液防治南方根結(jié)線蟲，安全、無毒、有效，當月桂酸溶液的濃度為4.00mM時可驅(qū)避南方根結(jié)線蟲，并使其致死率高達67％，當月桂酸溶液的濃度為0.50mM-2.00mM時可吸引南方根結(jié)線蟲，并使其致死率高達39％。
文檔編號A01P5/00GK102326541SQ201110325360
公開日2012年1月25日 申請日期2011年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月24日
發(fā)明者左元梅, 李曉林, 董林林, 鐘麗娜 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學