專利名稱：昆蟲病原線蟲蟲尸劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用昆蟲病原線蟲-昆蟲宿主形成的昆蟲病原線蟲蟲尸劑，對土壤有害昆蟲進(jìn)行有效控制的方法。
背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國環(huán)境署報告，全世界每年有100多萬人農(nóng)藥中毒，其中2萬人死亡。美國每年發(fā)生6. 7萬起農(nóng)藥中毒事故，在發(fā)展中國家情況更為嚴(yán)重。我國蔬菜農(nóng)藥污染已經(jīng)成為一個居民強(qiáng)烈關(guān)注的民生問題，尤其是我國韭菜上農(nóng)藥檢出率和超標(biāo)率都在50%以上，屢有農(nóng)藥中毒事故發(fā)生，食品安全令人擔(dān)憂?？偹苤L期高頻次使用化學(xué)農(nóng)藥的大量使用會加速使昆蟲產(chǎn)生抗藥性，反而造成農(nóng)戶只能過量使用或使用高毒性，從而陷入防治害蟲的惡性循環(huán)。韭菜蛆是遲眼蕈蚊(Bradysia Odoriphaga)的幼蟲,常群集于韭菜根部,姓食其假莖和鱗莖，導(dǎo)致菜葉發(fā)黃甚至植株死亡。由于韭蛆棲息部位和危害場所隱蔽，抗藥性強(qiáng)，力口之害蟲發(fā)生世代嚴(yán)重重疊，一般的化學(xué)農(nóng)藥很難達(dá)到理想的防治效果。為了防治韭蛆，菜農(nóng)于每年清明前后和秋末初冬一次甚至多次噴灑辛硫磷和毒死蜱等農(nóng)藥，有的菜農(nóng)甚至錯誤使用國家違禁的高毒農(nóng)藥。例如，2010年我國青島檢出1930公斤"毒韭菜"9名市民中毒(2010-04-0923:42:43來源中國廣播網(wǎng))。原因是農(nóng)民錯誤使用高毒有機(jī)磷農(nóng)藥，引起食物中毒。2011年河南南陽發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥超標(biāo)韭菜10人中毒來源不清楚(來源大河網(wǎng)，2011年03月29日11:10)。檢測結(jié)果為三唑磷農(nóng)藥殘留超標(biāo)引起中毒。該農(nóng)藥具有強(qiáng)烈的觸殺和胃毒作用。2011年,青島連現(xiàn)三起韭菜中毒事件,確為農(nóng)藥中毒(http://www. tech-food.com 2011-4-27 8:01:01中國食品科技網(wǎng))。經(jīng)查明為有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類(呋喃丹)農(nóng)藥中毒，氨基甲酸酯類 (呋喃丹)屬于國家禁止在蔬菜上使用的高毒農(nóng)藥。因此，為了保護(hù)環(huán)境和我國居民蔬菜食用安全，尋找高效的生物防治措施來代替化學(xué)農(nóng)藥防治地下害蟲韭菜蛆等，生產(chǎn)質(zhì)量合格達(dá)標(biāo)的韭菜等，是當(dāng)前韭菜等蔬菜生產(chǎn)中亟待解決的問題。昆蟲病原線蟲(Entomopathogenic Nematodes EPNs)作為一種理想的生物殺蟲齊Li，具有以下優(yōu)點對昆蟲專性寄生；寄主范圍廣；對寄主昆蟲具有主動搜尋能力；能夠從寄主昆蟲的自然開口(如口器、氣門和肛門)、傷口或節(jié)間膜進(jìn)入寄主昆蟲體內(nèi)，并且能夠迅速殺死寄主昆蟲；能夠以人工培養(yǎng)基低成本大量培養(yǎng)；田間施用時可和許多化學(xué)農(nóng)藥混合使用，對人畜、植物及有益生物及環(huán)境安全。由于昆蟲病原線蟲屬于環(huán)境友好的生物天敵，歐美一些國家已經(jīng)豁免注冊生產(chǎn)和生產(chǎn)銷售，并已經(jīng)廣泛應(yīng)用于地下害蟲甚至地下害蟲的防治之中。目前昆蟲病原線蟲的施用方法主要為將通過固體液體培養(yǎng)出來的線蟲懸液噴灑到農(nóng)作物或果樹上。固體介質(zhì)和液體介質(zhì)培養(yǎng)的線蟲經(jīng)過生產(chǎn)、淋洗、貯藏、運輸、田間噴灑多個步驟，嚴(yán)重影響昆蟲病原線蟲的活性和毒力。同時昆蟲病原線蟲通常被噴灑到土壤表面，而昆蟲病原線蟲又不耐干燥，紫外照射，進(jìn)一步影響昆蟲病原線蟲的活性和毒力，而昆蟲病原線蟲田間作用效果和持續(xù)時間與投放線蟲存活時間相關(guān)，由于在田間直接施用昆蟲病原線蟲溶液進(jìn)行地下害蟲防治存在以上所述局限性，因而田間防治效果不穩(wěn)定，大大限制了昆蟲病原線蟲的田間應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是接種昆蟲病原線蟲形成昆蟲病原線蟲昆蟲尸體的復(fù)合體，即昆蟲病原線蟲蟲尸劑，并在田間應(yīng)用昆蟲病原線蟲蟲尸劑防治有害昆蟲。鑒于直接在田間施用昆蟲病原線蟲存在活力低下、線蟲不耐干燥紫外照射等局限性，本發(fā)明通過以昆蟲(大蠟螟、黃粉蟲等)為載體,用昆蟲病原線蟲水懸液侵染宿主昆蟲(如大蠟螟和黃粉蟲)，36h大蠟螟全部死亡后，再在室溫下擴(kuò)繁4天以上，4-6°C低溫儲藏。直接在田間施用昆蟲病原線蟲蟲尸劑以防治地下害蟲如韭蛆、蠐螬，從而部分代替?zhèn)鹘y(tǒng)農(nóng)藥，最終減少防治有害昆蟲的化學(xué)農(nóng)藥的用量。本發(fā)明有效解決了直接施用昆蟲病原線蟲的不足，且制作簡單，施用方便，效果穩(wěn)定，有利于推廣。本發(fā)明包括蟲尸劑的制作方法以及蟲尸劑用于防治田間地下有害昆蟲。本發(fā)明所述的線蟲為昆蟲病原線蟲。本發(fā)明所述的大蠟螟為實驗室培養(yǎng)。本發(fā)明昆蟲病原線蟲蟲尸劑的探索具體包括以下步驟A、尼龍網(wǎng)避免昆蟲結(jié)繭，提高線蟲殺死率，降低人工除繭的成本投入。在培養(yǎng)皿中鋪入一層尼龍網(wǎng)，加入昆蟲病原線蟲線蟲懸液，使尼龍網(wǎng)全部潤濕，但培養(yǎng)皿中沒有明水，能夠保證昆蟲病原線蟲能順利侵染大蠟螟，結(jié)繭率降低了 90%以上？減少人力成本投入。每個 培養(yǎng)皿中放入20-30條昆蟲，每只昆蟲的接種量為I條以上昆蟲病原線蟲，將以上裝置放于室溫下培養(yǎng)，36h后大蠟螟全部死亡。上述昆蟲病原線蟲和死亡的昆蟲構(gòu)成的復(fù)合體，稱為蟲尸劑。
處理il結(jié)繭大蠟螟個數(shù)M結(jié)繭率(％)
尼龍膜 iO20O-
222010
3I205
4I205 平均值5
對照I132065.5
2122060
3142070
4132065.5平均值65.3B、蟲尸劑在室溫培養(yǎng)2天以上，保障昆蟲病原線蟲在昆蟲體內(nèi)繁殖一代。昆蟲病原線蟲剛侵染的昆蟲，線蟲基數(shù)很少，外界條件容易干擾甚至阻斷線蟲在昆蟲體內(nèi)的繁殖，本發(fā)明中使昆蟲病原線蟲侵染的昆蟲在室溫下培養(yǎng)5天以上，保障線蟲在昆蟲體內(nèi)發(fā)育產(chǎn)生一代侵染期線蟲，能夠保障線蟲在田間應(yīng)用效果，甚至線蟲繼續(xù)利用昆蟲尸體在昆蟲體內(nèi)發(fā)育,產(chǎn)生更過侵染期線蟲。如表一,培養(yǎng)5天后，昆蟲體內(nèi)含有4萬多條線蟲/只。表1、不同培養(yǎng)天數(shù)昆蟲體內(nèi)的侵染期線蟲數(shù)
權(quán)利要求
1.一種昆蟲病原線蟲蟲尸劑制作及其田間應(yīng)用的方法，其特征在于將感染昆蟲病原線蟲的昆蟲尸體用于植物有害昆蟲的防治。
2.按照權(quán)利要求1所述的昆蟲病原線蟲蟲尸劑制作及其田間應(yīng)用，其特征在于用昆蟲病原線蟲侵染昆蟲導(dǎo)致昆蟲死亡，形成昆蟲病原線蟲和昆蟲尸體的復(fù)合體。
3.按照權(quán)利要求1和2所述的昆蟲病原線蟲蟲尸劑制作方法，其特征在于在侵染裝置內(nèi)鋪有一層尼龍網(wǎng)，加入昆蟲病原線蟲懸液。
4.按照權(quán)利要求3所述侵染裝置，其特征在于使昆蟲病原線蟲侵染的昆蟲在室溫下培養(yǎng)5天以上。
5.按照權(quán)利要求1所述的昆蟲病原線蟲蟲尸劑的田間應(yīng)用，其特征在于感染昆蟲病原線蟲的昆蟲尸體直接施入到土壤中，用于防治地下害蟲防治。
6.按照權(quán)利要求1所述的昆蟲病原線蟲蟲尸劑的田間應(yīng)用，其特征在于施用感染昆蟲病原線蟲的昆蟲尸體到土壤中，需要在兩天內(nèi)對土壤進(jìn)行灌溉。
7.按照權(quán)利要求1所述的昆蟲病原線蟲蟲尸劑的田間應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用昆蟲病原線蟲蟲尸劑對韭蛆、蠐螬等地下害蟲進(jìn)行防治。
全文摘要
本發(fā)明的目的是建立昆蟲病原線蟲蟲尸劑制作方法，提供一種新的田間應(yīng)用昆蟲病原線蟲的方法。鑒于直接在田間施用昆蟲病原線蟲存在活力低下、線蟲不耐干燥紫外照射等局限性，本發(fā)明通過以昆蟲(大蠟螟等)為載體，在實驗室用昆蟲病原線蟲水懸液侵染宿主昆蟲大蠟螟等，36h后大蠟螟全部死亡制成蟲尸劑，再在室溫下至少擴(kuò)繁4天后，直接在田間施用以防治植物地下害蟲(韭菜韭蛆，遲眼蕈蚊)以代替?zhèn)鹘y(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥對地下害蟲防治，減少農(nóng)藥投入。本發(fā)明有效解決了直接施用昆蟲病原線蟲的不足，且制作簡單，施用方便，效果明顯，利于推廣。
文檔編號A01P7/04GK103053620SQ20111031985
公開日2013年4月24日 申請日期2011年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月20日
發(fā)明者阮維斌, 宋東民, 王欣, 趙東辰 申請人:南開大學(xué)