專利名稱：芭蕉芋莖尖組培的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的培養(yǎng)方法，尤其是一種芭蕉芋莖尖組培的方法。
背景技術(shù)：
芭蕉芋(fe/wa edulis Ker)又名蕉藕、旱藕、藕芋等，屬美人蕉科美人蕉屬的一年生草本植物，原產(chǎn)南美州的熱帶亞熱帶地區(qū)，具有適應(yīng)性廣、產(chǎn)量高、易栽培等特點(diǎn)，性喜溫暖向陽環(huán)境，既耐寒又抗旱，適宜生長溫度為15 30°C，適宜雨量800 1500mm，特別適宜貴州喀斯特山區(qū)發(fā)展種植。芭蕉芋在貴州省九個(gè)地(州)市都有大面積或零星栽培，全省常年種植面積50萬畝左右，年產(chǎn)芭蕉芋塊莖750萬噸以上，尤以黔西南州栽培面積較大，全州115個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)都有芭蕉芋栽培。為了解決芭蕉芋深加工和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展問題，省科技廳于2006年立項(xiàng)資助了 5000 噸芭蕉芋燃料乙醇生產(chǎn)加工技術(shù)示范項(xiàng)目，由貴州大學(xué)和興義貴州醇酒廠聯(lián)合實(shí)施，計(jì)劃投資1200萬元(其中立項(xiàng)資助經(jīng)費(fèi)300萬元)，主要是通過深加工生產(chǎn)芭蕉芋燃料乙醇。芭蕉芋栽培一般都以地下塊莖作種，用種量過大，(一般超過300公斤/畝)，研究芭蕉芋種苗快繁技術(shù)，培育優(yōu)質(zhì)種苗，降低生產(chǎn)用種量，提高單產(chǎn)和品質(zhì)是芭蕉芋生產(chǎn)急待解決的重要課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種芭蕉芋莖尖組培的方法，通過該方法培養(yǎng)的芭蕉芋組培苗具有優(yōu)良的農(nóng)業(yè)性狀，可降低生產(chǎn)用種量，提高單產(chǎn)和品質(zhì)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的芭蕉芋莖尖組培的方法，將選好的芭蕉芋塊莖砍成單芽，在溫度為52 55°C的溫水中浸泡25 35分鐘后取出，再用質(zhì)量百分比為50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液浸泡M小時(shí)，然后將單芽置于經(jīng)過消毒的室內(nèi)沙床上培養(yǎng)20 25天，芭蕉芋發(fā)芽；從幼嫩的芭蕉芋塊莖上切取長為5 8cm的芭蕉芋莖尖組織，切除其基部木質(zhì)化組織和展開的葉片，用水沖洗25 35分鐘，再將沖洗好的芭蕉芋莖尖組織切成0. 3 0. 5cm的小芽段，將小芽段用質(zhì)量百分比為75%的乙醇滅菌25 35秒后，用無菌水沖洗 2 3次，再用0. 升汞水將小芽段滅菌13 17秒后，然后用無菌水沖洗4 5次，得到完成滅菌的外植體；將外植體表面的水份吸干，剝除與藥液接觸而受傷的外層苞葉，并接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；將接種后的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到25 30°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行暗室培養(yǎng)5 7天后，再對其進(jìn)行分化培養(yǎng)；待培養(yǎng)材料分離、膨大轉(zhuǎn)綠時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)過3 4轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)20 30天有不定芽萌動(dòng)長出2 4片小芽時(shí)，再轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，形成組培苗，待組培苗生長到 5 7 cm，根長2 3 cm時(shí)即可。分化培養(yǎng)的條件光照10 12h、光強(qiáng)為1500 2000Lx、溫度為25 以及相對濕度為85 90%。增殖培養(yǎng)的條件為光照12 16h、光強(qiáng)為2000-2500LX、溫度為25_28°C、相對濕度為 85-90%。生根培養(yǎng)的條件為光照10 12h、光強(qiáng)為1000-1500LX、溫度為25_28°C、相對濕度為85 90%。誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成包括MS1L、6-BA 2. 5 mg、NAA 0. 5啤、瓊脂8g、蔗糖30g、GA30. 5 mg、ZT2. Omg及 PVPO. 5g，其 PH 值為 5.8。增殖培養(yǎng)基的組成包括MS1L、6-BA2. 0 2. 5 mg、NAAO. 5啤、瓊脂8g、蔗糖30g、 GA30. 5 mg、ZT2. 0 mg及 PVPO. 5g,其 PH 值為 5. 8。生根培養(yǎng)基的組成包括MSO.5L、6-BA2. 0mg、NAA 0. 5mg、瓊脂8g、蔗糖 30g、GA30. 5 mg、ZT2. Omg及 PVPO. 5g，其 PH 值為 5.8。多菌靈又名棉萎靈、苯井咪唑44號(hào)。多菌靈是一種廣譜性殺菌劑，對多種作物由真菌(如半知菌、多子囊菌)引起的病害有防治效果。可用于葉面噴霧、種子處理和土壤處理寸。MS化學(xué)名稱是指MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，它的配方包含了(NH4)2S04、Na2-EDTA、NH4N03、 Fe-EDTA、KN03、Feso4 · 7H20、CaCl2 · 2H20、Mnso4 · 4H20、KH2P04、Mgso4 · 7H20、 Znso4 · 7H20 ,H3B03、草酸鐵、NaH2P04 · H20、甘氨酸、鹽酸吡哆素、鹽酸硫胺素、煙酸、肌醇寸。6-BA化學(xué)名稱6-芐氨基腺嘌呤。NAA化學(xué)名稱a-萘乙酸。瓊脂是用石花菜提取的混合多糖，用作細(xì)菌培養(yǎng)基、食品凝膠劑和紡織業(yè)的漿料。GA又稱赤霉素。ZT是ziatin的縮寫，又稱玉米素。PVP的化學(xué)名稱是聚乙烯吡咯烷酮，是防止植物組織褐化的一種高分子化合物。升汞的化學(xué)名稱是氯化汞(HgCl2) 多菌靈的常規(guī)濃度為1000 1500倍。采用改良熱處理脫毒方法進(jìn)行脫毒，將選好的材料砍成單芽，用燒蒸餾水的廢水 (溫度控制在52°C 55°C左右)中處理30min后取出，并用質(zhì)量百分比為50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液浸泡1天，然后置于消毒后的室內(nèi)沙床上培養(yǎng)20 25天左右培養(yǎng)，可見材料發(fā)芽及正常生長，并根據(jù)具體情況進(jìn)行澆水或用甲基托布津按規(guī)定用量進(jìn)行滅菌或控制病害發(fā)生，保證材料的正常生長，芭蕉芋出苗率在85%以上。由于采用了上述的技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過對選取的芭蕉芋材料進(jìn)行種苗脫毒和組織培養(yǎng)，篩選出適合芭蕉芋莖尖組培苗的培養(yǎng)基，達(dá)到芭蕉芋莖尖組培的出苗率40 %，成苗率、移栽成活率均在90 %以上，使其芽片能實(shí)現(xiàn)快速繁殖，從而達(dá)到保持優(yōu)良種性、加速良種的應(yīng)用推廣、降低用種量、節(jié)約生產(chǎn)成本的目的，對推進(jìn)芭蕉芋生產(chǎn)的節(jié)本增效、提高種植效益及芭蕉芋產(chǎn)業(yè)的規(guī)模和水平、增強(qiáng)發(fā)展后勁等都具有較高的科學(xué)價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。本發(fā)明適用范圍廣，容易實(shí)施，使用效果好。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施例方式芭蕉芋莖尖組培的方法，將選好的芭蕉芋塊莖砍成單芽，在溫度為53°C的溫水中將單芽浸泡30分鐘后取出，質(zhì)量百分比為50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液浸泡M小時(shí)，然后將單芽置于經(jīng)過消毒的室內(nèi)沙床上培養(yǎng)20 25天，芭蕉芋發(fā)芽；從幼嫩的芭蕉芋塊莖母株上切取長為5 8cm的芭蕉芋莖尖組織，切除其基部木質(zhì)化組織和展開的葉片，用水沖洗30分鐘，再將沖洗好的芭蕉芋莖尖組織切成0. 3 0. 5cm的小芽段， 將小芽段用質(zhì)量百分比為75%的乙醇滅菌30秒后，用無菌水沖洗3次，再用0. 升汞水將小芽段滅菌15秒鐘，然后用無菌水沖洗4次，得到完成滅菌的外植體；將外植體表面的水份吸干，剝除與藥液接觸而受傷的外層苞葉，并接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；將接種后的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到的培養(yǎng)室中進(jìn)行暗室培養(yǎng)6天后(誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成包括MS1L、6-BA 2. 5 mg、NAA 0. 5 啤、瓊脂 8g、蔗糖 30g、GA30. 5 mg、ZT2. 0 mg及 PVPO. 5g，其 PH 值為 5. 8)，再對其進(jìn)行分化培養(yǎng)(分化培養(yǎng)的條件光照llh、光強(qiáng)為1800Lx、溫度為^TC以及相對濕度為 88%);待培養(yǎng)材料分離、膨大轉(zhuǎn)綠時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)(增殖培養(yǎng)的條件為光照14h、光強(qiáng)為2200Lx、溫度為27°C、相對濕度為88%;增殖培養(yǎng)基的組成包括MS1L、 6-BA2. 0 2. 5 mg、NAA0. 5 mg、瓊脂 8g、蔗糖 30g、GA30. 5 mg、ZT2. 0 mg及 PVPO. 5g，其 PH 值為 5. 8)，經(jīng)過3次轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)25天有不定芽萌動(dòng)長出2 4片小芽時(shí)，再轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培育(生根培養(yǎng)的條件為光照10 12h、光強(qiáng)為1000 1500Lx、溫度為25 ^°C、相對濕度為85 90% ；生根培養(yǎng)基的組成包括MSO. 5L、6_BA2. 0 mg、NAA 0. 5 mg、瓊脂 8g、蔗糖 30g、GA30. 5 mg、ZT2. 0 mg及 PVPO. 5g，其 PH 值為 5. 8)，形成組培苗，待組培苗生長到5 7 cm，根長2 3 cm時(shí)即可。
權(quán)利要求
1.一種芭蕉芋莖尖組培的方法，其特征在于將選好的芭蕉芋塊莖砍成單芽，在溫度為52 55°C的溫水中浸泡25 35分鐘后取出，再用質(zhì)量百分比為50%多菌靈可濕性粉劑 1000倍液浸泡M小時(shí)，然后將單芽置于經(jīng)過消毒的室內(nèi)沙床上培養(yǎng)20 25天，芭蕉芋發(fā)芽；從幼嫩的芭蕉芋塊莖上切取長為5 8cm的芭蕉芋莖尖組織，切除其基部木質(zhì)化組織和展開的葉片，用水沖洗25 35分鐘，再將沖洗好的芭蕉芋莖尖組織切成0. 3 0. 5cm的小芽段，將小芽段用質(zhì)量百分比為75%的乙醇滅菌25 35秒后，用無菌水沖洗2 3次， 再用0. 升汞水將小芽段滅菌13 17秒，然后用無菌水沖洗4 5次，得到完成滅菌的外植體；將外植體表面的水份吸干，剝除與藥液接觸而受傷的外層苞葉，并接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；將接種后的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到25 30°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行暗室培養(yǎng)5 7天后，再對其進(jìn)行分化培養(yǎng)；待培養(yǎng)材料分離、膨大轉(zhuǎn)綠時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)過3 4轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)20 30天有不定芽萌動(dòng)長出2 4片小芽時(shí)，再轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，形成組培苗，待組培苗生長到5 7 cm，根長2 3 cm時(shí)即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芭蕉芋莖尖組培的方法，其特征在于分化培養(yǎng)的條件光照 10 12h、光強(qiáng)為1500 2000Lx、溫度為25 以及相對濕度為85 90%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芭蕉芋莖尖組培的方法，其特征在于增殖培養(yǎng)的條件為光照12 16h、光強(qiáng)為2000-2500Lx、溫度為2548°C、相對濕度為85-90%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芭蕉芋莖尖組培的方法，其特征在于生根培養(yǎng)的條件為光照10 12h、光強(qiáng)為1000 1500Lx、溫度為25 ^°C、相對濕度為85 90%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芭蕉芋莖尖組培的方法，其特征在于誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成包括 MS1L、6-BA 2. 5 mg、NAA 0. 5 啤、瓊脂 8g、蔗糖 30g、GA30. 5 mg、ZT2. 0 mg及 PVPO. 5g，其 PH 值為5.8。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芭蕉芋莖尖組培的方法，其特征在于增殖培養(yǎng)基的組成包括 MS1L、6-BA2. 2. 5 mg、NAA0. 5 mg、瓊脂 8g、蔗糖 30g、GA30. 5 mg、ZT2. 0 mg及 PVPO. 5g, 其PH值為5.8。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芭蕉芋莖尖組培的方法，其特征在于生根培養(yǎng)基的組成包括 MSO. 5L、6-BA2. 0 mg、NAA 0. 5 mg、瓊脂 8g、蔗糖 30g、GA30. 5 mg、ZT2. 0 mg及 PVPO. 5g，其 PH值為5.8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種芭蕉芋莖尖組培的方法，將選好的芭蕉芋塊莖砍成單芽，滅菌后將單芽置于經(jīng)過消毒的室內(nèi)沙床上培養(yǎng)，獲得芭蕉芋塊莖；從得到的芭蕉芋塊莖母株上切取小芽段，將小芽段滅菌后，得到完成滅菌的外植體；接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)；待培養(yǎng)材料分離、膨大轉(zhuǎn)綠時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)過3～4轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽萌動(dòng)長小芽時(shí)，再轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，形成組培苗，待組培苗生長到5～7㎝，根長2～3㎝時(shí)即可。本發(fā)明通過對選取的芭蕉芋材料進(jìn)行種苗脫毒和組織培養(yǎng)，篩選出適合芭蕉芋莖尖組培苗的培養(yǎng)基，使其芽片能實(shí)現(xiàn)快速繁殖。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102405840SQ201110296310
公開日2012年4月11日 申請日期2011年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月28日
發(fā)明者劉凡值, 周明強(qiáng), 周正邦, 歐珍貴, 龔德勇 申請人:貴州省亞熱帶作物研究所