專利名稱：病毒滅活劑的制作方法
病毒滅活劑
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及病毒滅活劑，特別是涉及對諾羅病毒及A型流感病毒有滅活效果的病毒滅活劑。
背景技術(shù)：
一直以來，以醇作為主劑的組合物作為除菌劑廣泛使用，再者，作為對諾羅病毒有滅活效果的組合物，公開有例如，向釀造用醇配合葡萄水果種子提取液和植酸的組合物(專利文獻(xiàn)I)、向乙醇配合堿性物質(zhì)和表面活性劑的組合物(專利文獻(xiàn)2)、及向乙醇配合有機(jī)酸鹽和桉樹提取物的組合物(專利文獻(xiàn)3)等。另一方面，近年公開、在貝殼煅燒鈣、氧化鈣及作為其水和物的氫氧化鈣中有抗菌性(專利文獻(xiàn)4)、公開了向此貝殼煅燒鈣配合有機(jī)酸鹽的食品的制菌劑(專利文獻(xiàn)5)、向煅燒鈣配合多元醇脂肪酸酯及乙醇的食品用除菌劑(專利文獻(xiàn)6)等。但是，貝殼煅燒鈣等的對諾羅病毒的滅活效果尚不明。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I:特開2007-320924號公報專利文獻(xiàn)2:特開2008-189645號公報專利文獻(xiàn)3:特開2009-179577號公報專利文獻(xiàn)4:特開平11-222796號公報專利文獻(xiàn)5:特開平11-290044特號公報專利文獻(xiàn)6:特開2002-272434號公報

發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的技術(shù)課題本發(fā)明鑒于上述事實，以提供煅燒鈣等的明顯有病毒滅活效果，特別是有諾羅病毒滅活效果的新穎的病毒滅活劑作為課題。解決課題的技術(shù)方案本發(fā)明人為了解決上述課題而重復(fù)銳意研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)配合氫氧化鈣的水溶液或水分散體不僅有諾羅病毒滅活效果，再者也有A型流感病毒滅活效果，從而完成本發(fā)明。S卩，本發(fā)明的要旨如下?！睮〕諾羅病毒滅活劑，其特征在于，其是配合氫氧化鈣而成的水溶液或水分散體；〔2〕A型流感病毒滅活劑，其特征在于，其是配合氫氧化I丐而成的水溶液或水分散體；〔3〕上述〔I〕或〔2〕所述的病毒滅活劑，其為代替氫氧化鈣，或者與該氫氧化鈣一同，配合氧化鈣和/或煅燒鈣而成；〔4〕上述〔I〕 〔3〕之任一項所述的病毒滅活劑，其是再配合乙醇及乳酸鈉而成；〔5〕上述〔4〕所述的病毒滅活劑，其中氫氧化鈣、氧化鈣及煅燒鈣之中，配合的成分的合計的配合比例是O. 01 30重量％、乙醇的配合比例是5 30重量％、乳酸鈉的配合比例是I 30重量％ ；〔6〕上述〔I〕 〔5〕之任一項所述的病毒滅活劑，其中所述氫氧化鈣、氧化鈣及煅燒鈣的平均粒徑均為O. I 10 μ m ;〔7〕食品，其用上述〔I〕 〔6〕之任一項所述的病毒滅活劑進(jìn)行病毒滅活處理而得到；〔8〕上述〔7〕所述的食品，其中所述食品是鮮魚貝類。發(fā)明效果通過本發(fā)明，提供有諾羅病毒滅活效果和A型流感病毒滅活效果的病毒滅活劑。
圖I是PCR產(chǎn)物的電泳圖。圖2是PCR產(chǎn)物的電泳圖。圖3是示對被金黃色葡萄球菌污染的生牡蠣進(jìn)行除菌處理之時的，生牡蠣的活菌數(shù)的經(jīng)時變化的圖。圖4是示對被沙門氏菌污染的生牡蠣進(jìn)行除菌處理之時的，生牡蠣的活菌數(shù)的經(jīng)時變化的圖。圖5是示對被0-157污染的生牡蠣進(jìn)行除菌處理之時的，生牡蠣的活菌數(shù)的經(jīng)時變化的圖。圖6是示對被副溶血性弧菌污染的生牡蠣進(jìn)行除菌處理之時的，生牡蠣的活菌數(shù)的經(jīng)時變化的圖。圖7是示對被大腸桿菌污染的生牡蠣進(jìn)行除菌處理之時的，生牡蠣的活菌數(shù)的經(jīng)時變化的圖。圖8是示對浸潰到人工海水的生牡蠣進(jìn)行除菌處理之時的，生牡蠣的活菌數(shù)的經(jīng)時變化的圖。實施方式本發(fā)明的病毒滅活劑是將氫氧化鈣配合到水而得到的水溶液或水分散體，有諾羅病毒滅活效果、A型流感病毒滅活效果及貓杯狀病毒滅活效果，再者對一般食中毒菌有除菌效果。作為本發(fā)明的配合成分，也可代替氫氧化鈣，或者與氫氧化鈣一同，使用例如，使氧化鈣或煅燒鈣等的與水反應(yīng)而生成氫氧化鈣的成分的I種以上。以下，在本說明書，氫氧化鈣、及氧化鈣、煅燒鈣等的與水反應(yīng)而生成氫氧化鈣的成分總稱為“病毒滅活成分”。上述病毒滅活成分之中，煅燒鈣是將牡蠣殼、扇貝殼、北極貝殼、卵殼或珊瑚殼等、 煅燒前的成分是碳酸鈣的動物性來源的鈣在600°C以上、優(yōu)選在900 1200°C的溫度煅燒或通電加熱15 60分鐘左右而得到，主成分是氧化鈣。得到的煅燒鈣的飽和水溶液的pH 優(yōu)選在11 13的范圍。煅燒鈣通常使用適合于食品添加物規(guī)格的。病毒滅活成分的平均粒徑不特別限定，通常是O. I ΙΟμπι。另外，病毒滅活劑中的病毒滅活成分的配合比例不特別限定，通常是O. 01 30重量％。在本發(fā)明中，為了提高病毒滅活效果或?qū)κ持卸揪某Ч鳛椴《緶缁畛煞忠酝獾钠渌浜铣煞郑膳浜侠?，乙醇或有機(jī)酸鹽。乙醇優(yōu)選適合于常規(guī)食品添加物規(guī)格。病毒滅活劑中的乙醇的配合比例不特別限定，通常以5 30重量％的范圍配合。
有機(jī)酸鹽而言，可舉出例如，檸檬酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽、醋酸鹽、蟻酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽等，這些可單獨或適宜組合2種以上而使用。 鹽而言，可舉出堿金屬鹽等。在這些之中，也優(yōu)選乳酸鹽，更優(yōu)選乳酸鈉。病毒滅活劑中的有機(jī)酸鹽的配合比例不特別限定，通常以I 30重量％的范圍配合。在本發(fā)明的病毒滅活劑中，除了上述的成分之外，在不妨礙本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)，可適量含有可配合到除菌劑的公知的成分。這樣的成分而言，可舉出防腐劑、氧化防止劑、表面活性劑、染料、香料、染料等。本發(fā)明的病毒滅活劑的pH從病毒滅活效果或?qū)κ持卸揪某Ч挠^點來看，優(yōu)選11 14,更優(yōu)選11 13。本發(fā)明的病毒滅活劑，特別是諾羅病毒滅活效果和A型流感病毒滅活效果顯著， 再者對一般食中毒菌除菌效果也優(yōu)良。在本發(fā)明中，根據(jù)上述的配合成分的濃度，可作為各成分基本上溶解于水的水溶液型，或者作為各成分之中一部分溶解于水，一部分分散于水中的水分散型而使用。本發(fā)明的病毒滅活劑在使用時不用水稀釋而直接使用也可，但在使用水分散型時，優(yōu)選用水稀釋而使用。在直接使用水溶液型或水分散型時，或者將這些用水稀釋而使用時等、采用任何的使用方法時，病毒滅活劑中的病毒滅活成分的配合比例在實際的使用濃度均優(yōu)選O. 01 5重量％。使用水溶液型時填充到噴霧容器等中，可在例如，食品工場、飲食店的廚房或家庭的廚房等，向作業(yè)者的手、腕等的皮膚、菜刀、鍋等的烹調(diào)器具、皿、容器等的餐具、鮮魚貝類、蔬菜、肉類等的生鮮食品、加工食品等、有上述病毒的附著的擔(dān)憂的部分噴霧而使用。另外，使用水分散型時，使用時可用水稀釋，在上述例示的適用對象物之中，將可攜帶病毒的浸潰而使用。
實施例以下，根據(jù)試驗例等更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不以任何方式受這些的限定。I.對貓杯狀病毒的滅活效果的驗證A.試驗概要配合氫氧化鈣、乙醇、乳酸鈉，將余部作為水將下述配方的水分散體(本發(fā)明品)作為待測樣品，在(財)日本食品分析中心，對于對貓杯狀病毒的本發(fā)明品的滅活效果實施驗證試驗。即，由于諾羅病毒自體不被穩(wěn)定的培養(yǎng)，在本試驗中，從形態(tài)的特征或基因組的結(jié)構(gòu)，將作為諾羅病毒的近親的貓杯狀病毒作為代替病毒使用。試驗的詳細(xì)如下。B.試驗方法〔I〕待測樣品水分散體(本發(fā)明品)
氫氧化鈣12. 8重量％乙醇19. 7重量％乳酸鈉9. 9重量％水57. 6重量％
〔2〕試驗病毒
貓杯狀病毒F-9ATCC VR-782 (貓杯狀病毒)
〔3〕使用細(xì)胞
CRFK細(xì)胞(大日本制藥公司)
〔4〕使用培養(yǎng)基
細(xì)胞增殖培養(yǎng)基
(I)向Eagle MEM培養(yǎng)基“二 ^ 4 ”(I)(日水制藥公司)加10%胎牛血清。
(2)細(xì)胞維持培養(yǎng)基
向Eagle MEM培養(yǎng)基“二 ^ (I)(日水制藥公司)加2%胎牛血清。
〔5〕病毒懸浮液的制備
(I)細(xì)胞的培養(yǎng)
使用細(xì)胞增殖培養(yǎng)基，將使用細(xì)胞在組織培養(yǎng)用瓶內(nèi)單層培養(yǎng)。
(2)病毒的接種
單層培養(yǎng)后，從瓶內(nèi)除去細(xì)胞增殖培養(yǎng)基，接種試驗病毒。接下來，加細(xì)胞維持培養(yǎng)基而在37°C的碳酸氣體溫育器(CO2濃度5%)內(nèi)培養(yǎng)I 5天。
(3)病毒懸浮液的制備
培養(yǎng)后，使用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)，確認(rèn)細(xì)胞發(fā)生形態(tài)變化(細(xì)胞變性效果)。接下來，將培養(yǎng)液離心分離(3，000r/min，10分鐘)，將得到的上清液作為病毒懸浮液。
〔6〕試驗操作
使用純化水而制備待測樣品的2%懸浮液而作為試驗液。向試驗液Iml添加病毒懸浮液O. 1ml、混合之后，以80 90r/min振蕩著室溫保存,6及24小時后,將試驗液使用細(xì)胞維持培養(yǎng)基稀釋100倍。
再有，以純化水作為對照的試驗液同樣地進(jìn)行試驗。但是，在開始時就進(jìn)行測定。
〔7〕病毒感染價的測定
使用細(xì)胞增殖培養(yǎng)基，將使用的細(xì)胞在組織培養(yǎng)用微板(96孔)內(nèi)進(jìn)行單層培養(yǎng)之
后，除去細(xì)胞增殖培養(yǎng)基而加各O. Iml細(xì)胞維持培養(yǎng)基。接下來，將試驗液的稀釋液O. Iml 接種到各4孔，在37°C的碳酸氣體溫育器(CO2濃度5%)內(nèi)培養(yǎng)4 7天。培養(yǎng)后，使用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)變化(細(xì)胞變性效果)的有無，根據(jù)Reed-Muench法算出50% 組織培養(yǎng)感染量(TCID5tl)而換算成每試驗液Iml的病毒感染價。結(jié)果顯示于表I。表I
試驗病毒對象Ioh TCIDsc/ml**開始時6小時后24小時后貓杯狀病毒#_#品8.5<2.5<2.5I8,58.27.8
TCID50 :半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量，50%組織培養(yǎng)感染量* I :每試驗液Iml的TCID5tl的對數(shù)值開始時測定作用開始后立即的對照的TCID5tl，作為開始時。對照純化水作用條件室溫、振動保存〈2. 5:檢測不到從表I知，本發(fā)明品在6小時以內(nèi)完全地滅活3. I X IO8TCID5cZml的貓杯狀病毒。2.對諾羅病毒的滅活效果的驗證(I)配合氫氧化鈣、乙醇、乳酸鈉，將余部作為水將下述配方的水溶液(本發(fā)明品) 作為待測樣品，在1^ ^ 3*株式會社食品檢查中心，對于本發(fā)明品的對諾羅病毒的滅活效果實施驗證試驗?！创郎y樣品水溶液(本發(fā)明品)>
權(quán)利要求
1.諾羅病毒滅活劑，其特征在于，其是配合氫氧化鈣而成的水溶液或水分散體。
2.A型流感病毒滅活劑，其特征在于，其是配合氫氧化鈣而成的水溶液或水分散體。
3.權(quán)利要求I或2所述的病毒滅活劑，其為代替氫氧化鈣，或者與該氫氧化鈣一同，配合氧化鈣和/或煅燒鈣而成。
4.權(quán)利要求I 3之任一項所述的病毒滅活劑，其是再配合乙醇及乳酸鈉而成。
5.權(quán)利要求4所述的病毒滅活劑，其中在氫氧化鈣、氧化鈣及煅燒鈣之中，配合的成分的合計的配合比例是O. 01 30重量％、 乙醇的配合比例是5 30重量％、乳酸鈉的配合比例是I 30重量％。
6.權(quán)利要求I 5之任一項所述的病毒滅活劑，其中氫氧化鈣、氧化鈣及煅燒鈣的平均粒徑均為O. I 10 μ m。
7.食品，其用權(quán)利要求I 6之任一項所述的病毒滅活劑進(jìn)行病毒滅活處理而得到。
8.權(quán)利要求7所述的食品，其中所述食品是鮮魚貝類。
全文摘要
本發(fā)明提供煅燒鈣等的明顯有病毒滅活效果，特別是有諾羅病毒滅活效果的新穎的病毒滅活劑。包括將氫氧化鈣、氧化鈣及煅燒鈣之中1種以上配合到水中而得到的水溶液或水分散體。上述成分之外、可配合乙醇和有機(jī)酸鹽。
文檔編號A01N31/02GK102612320SQ20108005078
公開日2012年7月25日 申請日期2010年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月10日
發(fā)明者小谷博秀, 山下泰治, 川上大雄 申請人:株式會社川上