專利名稱：用于滅活病毒的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于滅活病毒和醫(yī)療裝置或設(shè)備消毒或滅菌的方法。
背景技術(shù)：
大多數(shù)真菌、病毒和病原細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在70攝氏度時(shí)可在數(shù)分鐘內(nèi)殺死或滅活；然而，有些病原病毒(如脊髓灰質(zhì)炎病毒)滅活困難得多。此外，因?yàn)槊舾械尼t(yī)療裝置在接觸所述高溫時(shí)經(jīng)常會(huì)縮短使用壽命，所以需要使用較低溫度和溫和條件同時(shí)保持病毒滅活能力的用于醫(yī)療裝置消毒的方法。特別值得注意的是小無(wú)包膜病毒，如脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)、細(xì)小病毒 (parvovirus)和甲肝病毒(hepatitis A virus)。這些是小(直徑23-27納米)的無(wú)包膜人類病原，已經(jīng)證明其可耐受去除和滅活過(guò)程，所述過(guò)程針對(duì)脂質(zhì)包膜病毒如HIV、乙肝和丙肝病毒顯示效用。小無(wú)包膜病毒的高度穩(wěn)定亞類是腸病毒(Enteroviruse)(例如脊髓灰質(zhì)炎病毒和甲肝病毒)，其耐受低于三的PH水平、洗滌劑、70%乙醇和其它脂質(zhì)溶劑，如氯仿和醚。由于它們也耐受消毒劑如5% Lysol和季銨化合物，所以腸病毒特別難于滅活。本發(fā)明提供用于滅活病毒的改進(jìn)的酶促方法，其對(duì)于敏感性材料(如醫(yī)療裝置) 比傳統(tǒng)方法更溫和。發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明提供用于滅活病毒的方法，包括使所述病毒接觸鹵過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫源、氯離子和/或溴離子，和銨離子。在一個(gè)實(shí)施方案中，鹵過(guò)氧化物酶是氯過(guò)氧化物酶或溴過(guò)氧化物酶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鹵過(guò)氧化物酶是含有釩的鹵過(guò)氧化物酶。發(fā)明詳述新寸氧北_禾口臓新寸氧北勁勿適合于并入本發(fā)明方法的鹵過(guò)氧化物酶是氯過(guò)氧化物酶、溴過(guò)氧化物酶和展現(xiàn)氯過(guò)氧化物酶或溴過(guò)氧化物酶活性的化合物。商過(guò)氧化物酶形成一類酶，其能夠在過(guò)氧化氫或過(guò)氧化氫生成系統(tǒng)存在下將鹵化物(Cl-、Br-、I_)氧化為相應(yīng)的次鹵酸。鹵過(guò)氧化物酶依據(jù)它們對(duì)鹵離子的特異性來(lái)分類。氯過(guò)氧化物酶 (E. C. 1. 11. 1. 10)催化自氯離子形成次氯酸鹽，自溴離子形成次溴酸鹽和自碘離子形成次碘酸鹽；而溴過(guò)氧化物酶催化自溴離子形成次溴酸鹽和自碘離子形成次碘酸鹽。然而，次碘酸鹽經(jīng)歷自發(fā)歧化(spontaneous disproportionation)成碘，因此觀察到的產(chǎn)物是碘。這些次鹵酸鹽化合物可隨后與其它化合物起反應(yīng)，形成鹵代化合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的鹵過(guò)氧化物酶是氯過(guò)氧化物酶。已經(jīng)自多種生物體分離了鹵過(guò)氧化物酶哺乳動(dòng)物、海洋動(dòng)物、植物、藻類、地衣、 真菌和細(xì)菌。普遍接受的是鹵過(guò)氧化物酶是自然界中負(fù)責(zé)鹵代化合物形成的酶，盡管可涉及其它酶。已經(jīng)自多種不同真菌分離了鹵過(guò)氧化物酶，特別是真菌組暗色絲孢菌類
3(dematiaceous hyphomycetes)，如卡爾黑霄屬(Caldariomyces)(例如，煙色卡爾黑霉(C. fumago))，鏈格孢屬(Alternaria)，彎孢屬(Curvularia)(例如疣狀彎孢 (C. verruculosa)和不等彎孢(C. inaequalis))，內(nèi)臍蠕孢屬(Drechslera)，細(xì)基格孢屬 (Ulocladium)和葡萄孢屬(Botrytis)。已經(jīng)自細(xì)菌分離了鹵過(guò)氧化物酶，如假單胞菌屬(Pseudomonas)，例如吡咯菌素假單胞菌(P. pyrrocinia)和鏈霉菌屬(Str印tomyces)，例如，金黃色鏈霉菌 (S. aureofaciens)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述鹵過(guò)氧化物酶是自彎孢屬菌種，特別是疣狀彎孢或不等彎孢，如WO 95/27046中所述的不等彎孢CBS 102. 42可得到的釩鹵過(guò)氧化物酶(即含有釩或釩酸鹽的鹵過(guò)氧化物酶)，例如由WO 95/27046圖2 (通過(guò)提述全部并入)的DNA 序列編碼的釩商過(guò)氧化物酶；或如WO 97/04102中所述的疣狀彎孢CBS 147. 63或疣狀彎孢 CBS 444. 70可得到的釩商過(guò)氧化物酶。優(yōu)選地，所述商過(guò)氧化物酶的氨基酸序列與自疣狀彎孢(參見(jiàn)例如WO 97/04102中SEQ ID NO 2)或不等彎孢(例如由WO 95/27046圖2中的DNA序列編碼的成熟氨基酸序列)可得到的鹵過(guò)氧化物酶的氨基酸序列具有至少90%同一性，優(yōu)選95%同一性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述鹵過(guò)氧化物酶是含有釩的鹵過(guò)氧化物酶；特別是釩氯過(guò)氧化物酶。所述釩氯過(guò)氧化物酶可以是自如WO 01/79459中所述的 Drechslera hartlebii,如 WO 01/79458 中記載的 Dendryphiella salina,如 WO 01/79461 中所述的 Phaeotrichoconis crotalarie,或如 WO 01/79460 中所述的棉絲菌菌種(Geniculosporium)可得到的。所述釩鹵過(guò)氧化物酶更優(yōu)選是自Drechslera hartlebii(DSM 13444) > Dendryphiella salina (DSM 13443) > Phaeotrichoconis crotalarie (DSM 13441)或棉絲菌菌種(DSM 13442)可得到的。鹵過(guò)氧化物酶的濃度通常在0. Ol-IOOppm酶蛋白質(zhì)，優(yōu)選0. 05-50ppm酶蛋白質(zhì)， 更優(yōu)選l_40ppm酶蛋白質(zhì)，更優(yōu)選0. l-20ppm酶蛋白質(zhì)，和最優(yōu)選0. 5-10ppm酶蛋白質(zhì)的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，鹵過(guò)氧化物酶的濃度通常在5_50ppm酶蛋白質(zhì)，優(yōu)選5_40ppm 酶蛋白質(zhì)，更優(yōu)選8-32ppm酶蛋白質(zhì)的范圍內(nèi)。鹵過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定可通過(guò)如下進(jìn)行測(cè)定鹵過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定法混合100 μ 1鹵過(guò)氧化物酶樣品(約0. 2 μ g/mL)和100 μ 1 0. 3Μ磷酸鈉ρΗ 7緩沖液-0. 5Μ溴化鉀-0. 008%酚紅，將該溶液添加至10 μ 1 0.3% H2O2，并測(cè)量595nm處的吸收作為時(shí)間的函數(shù)?？赏ㄟ^(guò)測(cè)量290nm處吸收的降低(作為時(shí)間的函數(shù))來(lái)進(jìn)行使用單氯雙甲酮 (Sigma M4632，ε = ΖΟΟΟΟΜ^πΓ1于290nm)作為底物的另一種測(cè)定法。該測(cè)定法是在0. IM 磷酸鈉或0. IM乙酸鈉、50 μ M單氯雙甲酮、IOmMKBr/KCl、lmM H2O2和約1μ μ g/mL鹵過(guò)氧化物酶的水溶液中進(jìn)行的。一個(gè)鹵過(guò)氧化物酶單位(HU)定義為于ρΗ 5和30°C每分鐘氯化或溴化1微摩爾單氯雙甲酮。過(guò)氧化氫鹵過(guò)氧化物酶所需要的過(guò)氧化氫可以作為用于原位生產(chǎn)過(guò)氧化氫的過(guò)氧化氫的水溶液或過(guò)氧化氫前體來(lái)提供。在溶解后釋放商過(guò)氧化物酶可利用的過(guò)氧化物的任何固體實(shí)體能充當(dāng)過(guò)氧化氫的來(lái)源。在水或適當(dāng)?shù)乃橘|(zhì)中溶解后產(chǎn)生過(guò)氧化氫的化合物包括但不限于金屬過(guò)氧化物、過(guò)碳酸鹽、過(guò)硫酸鹽、過(guò)磷酸鹽、過(guò)氧酸、烴基過(guò)氧化物、酰基過(guò)氧化物、過(guò)氧化酯、脲過(guò)氧化物、過(guò)硼酸鹽和過(guò)氧羧酸或其鹽。過(guò)氧化氫的另一種來(lái)源是過(guò)氧化氫生成酶系統(tǒng)，如氧化酶以及該氧化酶的底物。 氧化酶和底物的組合的例子包括但不限于氨基酸氧化酶(參見(jiàn)例如US 6，248，575)和合適的氨基酸，葡萄糖氧化酶(參見(jiàn)例如WO 95/29996)和葡萄糖，乳酸氧化酶和乳酸鹽，半乳糖氧化酶(參見(jiàn)例如WO 00/50606)和半乳糖，以及醛糖氧化酶(參見(jiàn)例如WO 99/31990)和合適的醛糖。通過(guò)研究EC 1. 1. 3. _、EC 1. 2. 3. _、EC 1. 4. 3. _ 和 EC 1. 5. 3. _ 或相似的類(根根據(jù)國(guó)際生物化學(xué)聯(lián)合會(huì))，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地識(shí)別這樣的氧化酶和底物組合的其它例子?？梢栽诠に囬_(kāi)始或過(guò)程中添加過(guò)氧化氫或過(guò)氧化氫源，例如通常以對(duì)應(yīng)于 0. OOlmM至25mM的水平，優(yōu)選對(duì)應(yīng)于0. 005mM至5mM的水平，和特別是對(duì)應(yīng)于0. Ol-ImM過(guò)氧化氫的水平的量添加。也可以以對(duì)應(yīng)于0. ImM至25mM的水平，優(yōu)選對(duì)應(yīng)于0. 5mM至15mM 的水平，更優(yōu)選對(duì)應(yīng)于ImM至IOmM的水平，和最優(yōu)選對(duì)應(yīng)于2mM至8mM過(guò)氧化氫的水平的量使用過(guò)氧化氫。氯和溴離子根據(jù)本發(fā)明，與鹵過(guò)氧化物酶反應(yīng)所需要的氯和/或溴離子(Cl-和/或Br-)可以以許多不同方式，如通過(guò)添加氯化物和/或溴化物的鹽來(lái)提供。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中， 所述氯化物和溴化物的鹽是氯化鈉(NaCl)、溴化鈉(NaBr)、氯化鉀(KCl)、溴化鉀(KBr)、氯化銨(NH4Cl)或溴化銨(NH4Br)；或其混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述氯和/或溴離子只限于氯離子(Cl—)或溴離子(Br—)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氯和/或溴離子只限于氯離子(Cr)和溴離子(Br—)。所述氯離子可以通過(guò)將氯化物的鹽添加至水溶液中來(lái)提供。所述氯化物的鹽可以是氯化鈉、氯化鉀或氯化銨；或其混合物。所述溴離子可以通過(guò)將溴化物的鹽添加至水溶液中來(lái)提供。所述溴化物的鹽可以是溴化鈉、溴化鉀或溴化銨；或其混合物。每種氯化物和溴化物離子的濃度通常在0. OlmM至IOOOmM的范圍內(nèi)，優(yōu)選在0. 05 至500mM的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在0. ImM至IOOmM的范圍內(nèi)，最優(yōu)選在0. ImM至50mM的范圍內(nèi)， 和特別是在ImM至25mM的范圍內(nèi)。氯化物離子的濃度獨(dú)立于溴化物離子的濃度；反之亦然。在一個(gè)實(shí)施方案中，每種氯化物和溴化物離子的摩爾濃度是銨離子濃度的至少兩倍，優(yōu)選至少四倍，更優(yōu)選至少六倍，最優(yōu)選至少八倍，和特別是至少十倍。銨離子根據(jù)本發(fā)明方法滅活病毒所需要的銨離子(NH4+)可以以許多不同方式，如通過(guò)添加銨鹽來(lái)提供。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述銨鹽是硫酸銨((NH4)2SO4)、碳酸銨 ((NH4)2C03)、氯化銨(NH4Cl)、溴化銨(NH4Br),或碘化銨(NH4I)；或其混合物。銨離子的濃度通常在0. OlmM至IOOOmM的范圍內(nèi)，優(yōu)選在0. 05mM至500mM的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在0. ImM至IOOmM的范圍內(nèi)，最優(yōu)選在0. ImM至50mM的范圍內(nèi)，和特別是在ImM 至25mM的范圍內(nèi)。
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病毒根據(jù)本發(fā)明用鹵過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫、氯離子和/或溴離子，和銨離子滅活的病毒包含所有種類的病毒。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述病毒選自下組腺病毒(Adenoviruses)、沙粒病毒 (Arenaviruses)、布尼亞病毒(Bunyaviruses)、杯狀病毒(Caliciviruses)、冠狀病毒 (Coronaviruses)、Deltaviruse、絲狀病毒(Filoviruses)、黃病毒(Flaviviruses)、月干 DNA 病毒(Hepadnaviruses)、皰疫病毒(Herpesviruses)、正粘病毒(Orthomyxoviruses)、乳多空病毒(Papovaviruses)、苜Ij粘病毒(Paramyxoviruses)、細(xì)小病毒(Parvoviruses)
RNA 病毒(Picornaviruses)、痕病毒(Poxiviruses)、弓單狀病毒(Rhabdoviruses)、呼腸孤病毒(Reoviruses)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retroviruses)禾口夕卜衣病毒(Togaviruses)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，病毒選自下組諾瓦克病毒(Norwalk virus)、脊髓灰質(zhì)炎病毒(Poliovirus)、輪狀病毒(Rotavirus)、呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytial Virus)、鼻病毒(Rhinovirus)、副流感病毒(Parainfluenza Virus)、冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒(Influenza A and B viruses)、人體免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝病毒Ofepatitis A virus)、乙肝病毒(Hepatitis B virus)、丙肝病毒(Hepatitis Cvirus)、1 型單純皰疹病毒(Herpes simplex virus)禾口 2型單純抱疫病毒。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述病毒是小無(wú)包膜病毒。小無(wú)包膜病毒的例子包括但不限于,微小RNA病毒，如人鼻病毒A、人鼻病毒B、口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus)、甲肝病毒和腸病毒(如脊髓灰質(zhì)炎病毒)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述病毒是腸病毒。表面活性劑本發(fā)明的方法可包括施用表面活性劑(作為洗滌劑配制物的一部分或作為濕潤(rùn)劑)。適合于施用的表面活性劑可以是非離子的(包括半極性的)、陰離子的、陽(yáng)離子和/或兩性離子的；優(yōu)選所述表面活性劑是陰離子的(如線性烷基苯磺酸酯(linear alkylbenzenesulfonate)、α -烯烴磺酸酯(alpha-olef insulfonate)、烷基硫酸酯(脂肪醇硫酸酯)、醇乙氧基硫酸酯、仲烷磺酸酯、α -磺基脂肪酸甲酯、烷基或烯基琥珀酸或皂) 或非離子的(如醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多聚糖苷、烴基二甲胺氧化物、乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺、脂肪酸單乙醇酰胺、多羥基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-?；?N-烴基衍生物(“葡糖酰胺”))，或其混合物。當(dāng)包括在本發(fā)明方法中時(shí)，表面活性劑的濃度通常為按重量計(jì)約0.01%至約 10%，優(yōu)選約0. 05%至約5%，和更優(yōu)選約0. 至約1%。方法和用途在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種用于滅活病毒的酶促方法，包括使所述病毒接觸包含鹵過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫源、氯離子和/或溴離子，和銨離子的組合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于醫(yī)療裝置或設(shè)備消毒或滅菌的方法，其包括使所述醫(yī)療裝置或設(shè)備接觸所述組合物。所述組合物可配制為液體(例如含水的)或干產(chǎn)物配制物。所述干產(chǎn)物配制物可隨后再水合以形成在本發(fā)明方法中有用的有活性的液體或半液體配制物。當(dāng)所述組合物配制成干配制物時(shí)，組分可以是混合的、安排在離散的層中的或分開(kāi)包裝的。在第二個(gè)方面，本發(fā)明還涵蓋一種組合物，其源自應(yīng)用本發(fā)明的方法。在這種情況下，所述組合物包含鹵過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫、氯離子和/或溴離子、銨離子、活性或非活性病毒，和醫(yī)療裝置或設(shè)備。本發(fā)明的方法對(duì)于已經(jīng)暴露于病毒(如生物戰(zhàn)爭(zhēng)劑)的場(chǎng)所的去污是有用的。在本發(fā)明的語(yǔ)境中，術(shù)語(yǔ)“滅活病毒”意圖指至少99%的病毒不能感染合適的細(xì)胞。優(yōu)選99. 9 %，更優(yōu)選99. 99 %，最優(yōu)選99. 999 %，和特別是99. 9999 %的病毒不能感染合適的細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“消毒”指根據(jù)美國(guó)食品藥品管理局2000年1 月 “Content and Format of Premarket Notification[510(k)]Submissions for LiquidChemical Sterilants/High Level Disinfectants"的高水平消毒。根據(jù)本發(fā)明的方法可以在0-70攝氏度，優(yōu)選5-60攝氏度，更優(yōu)選10_60攝氏度， 甚至更優(yōu)選15-60攝氏度，甚至更優(yōu)選20-60攝氏度，最優(yōu)選20-50攝氏度，和特別是20-40 攝氏度的溫度進(jìn)行。本發(fā)明的方法可以采用10分鐘至(至少)4小時(shí)，優(yōu)選15分鐘至(至少)3小時(shí)， 更優(yōu)選20分鐘至(至少)2小時(shí)，最優(yōu)選20分鐘至(至少)1小時(shí)，和特別是30分鐘至(至少)1小時(shí)的處理時(shí)間。本發(fā)明的方法適合于滅活多種環(huán)境中的病毒。本發(fā)明的方法可理想地用于任何環(huán)境中以減少病毒感染，如醫(yī)療保健產(chǎn)業(yè)(例如動(dòng)物醫(yī)院、人類醫(yī)院、動(dòng)物診所、人類診所、療養(yǎng)院、兒童或老年人的日間護(hù)理設(shè)施等)、食品工業(yè)(例如餐館、食品加工廠、食品貯存場(chǎng)、 雜貨店等)、招待產(chǎn)業(yè)(例如旅館、汽車旅館、景點(diǎn)、游船等)、教育產(chǎn)業(yè)(例如學(xué)校和大學(xué))寸。由于本發(fā)明方法利用相對(duì)較低的溫度，它們對(duì)于醫(yī)療保健產(chǎn)業(yè)中所使用的設(shè)備如醫(yī)療裝置(例如干的手術(shù)設(shè)備、麻醉設(shè)備、器皿等)的消毒或滅菌是非常有用的。消毒或滅菌后的設(shè)備會(huì)展現(xiàn)降低的變形和磨損，而且該設(shè)備便于在消毒或滅菌后基本上立即使用。 當(dāng)對(duì)復(fù)雜的或熱敏感的醫(yī)療裝置如包含不同材料的超聲換能器(transducer)和內(nèi)窺鏡進(jìn)行消毒或滅菌時(shí)，這是尤其有利的，因?yàn)檫@些裝置的磨損顯著降低，這導(dǎo)致這些常常是非常昂貴的裝置有更長(zhǎng)的使用壽命，這有效地降低了它們的操作成本。實(shí)際上，通過(guò)使用本發(fā)明，可以有效地對(duì)甚至其它非醫(yī)療類型的設(shè)備如重復(fù)使用的衛(wèi)生用品消毒或滅菌。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，醫(yī)療裝置和/或非醫(yī)療類型的設(shè)備的消毒或滅菌在根據(jù)EN ISO 15883-1(或如美國(guó)食品藥品管理局2002年2月〃 Class IISpecial Controls Guidance Document :Medical Washers and Medicalffasher-Disinfectors ；Guidance for the Medical Device Industry and FDA ReviewStaff"中所述的)(醫(yī)療)清洗機(jī)-消毒機(jī)中使用本發(fā)明的方法而進(jìn)行。本發(fā)明的方法可理想地用于任何環(huán)境中以減少病毒感染，如一般房屋表面(例如地面、墻、天花板、家具外部等)、特殊設(shè)備表面(例如硬表面、制造設(shè)備、加工設(shè)備等)、紡織品(例如棉、毛、絲、合成纖維如聚酯、聚烯烴和丙烯酸酯類，纖維混紡物如棉聚酯等)、木材和基于纖維素的系統(tǒng)(例如紙)、土壤、動(dòng)物軀體(例如皮、肉、毛發(fā)、羽等)、食物(例如果實(shí)、蔬菜、堅(jiān)果、肉等)和水。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法針對(duì)紡織品的殺病毒處理。能用本發(fā)明組合物處理的紡織品的例子包括但不限于個(gè)人用品(例如襯衣、褲子、襪子、內(nèi)衣等)、公共用品 (例如毛巾、實(shí)驗(yàn)服、制服、圍裙等)、招待用品(例如毛巾、餐巾、桌布等)。用本發(fā)明組合物對(duì)紡織品的殺病毒處理可包括使紡織品接觸本發(fā)明的組合物。此接觸可以在洗滌紡織品之前發(fā)生?；蛘撸私佑|可以在洗滌紡織品期間發(fā)生以提供殺病毒活性和任選地提供清潔活性以自紡織品去除或減少塵土、污漬等。本發(fā)明組合物所接觸的病毒可以位于任何表面上，包括但不限于，例如乳制品、化學(xué)品或藥品加工廠、醫(yī)療裝置如內(nèi)窺鏡或其它醫(yī)療器具，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，洗滌機(jī)或水衛(wèi)生系統(tǒng)中所使用的工藝設(shè)備的表面。本發(fā)明的組合物應(yīng)當(dāng)以有效滅活所述表面上的病毒的量使用。通過(guò)將病毒浸沒(méi)在組合物的含水配制物(例如洗滌過(guò)程)中，通過(guò)將組合物噴灑到病毒上，通過(guò)借助布將組合物施用至病毒，或通過(guò)技術(shù)人員認(rèn)可的任何其它方法，可以使病毒接觸本發(fā)明方法中所使用的組合物。任何將本發(fā)明的組合物施用于病毒，導(dǎo)致滅活所述病毒的方法是可接受的施用方法。本發(fā)明的方法對(duì)于已經(jīng)暴露于病毒(例如病原病毒)(如生物戰(zhàn)爭(zhēng)劑)的場(chǎng)所的去污也是有用的。此類場(chǎng)所包括但不限于衣物(如軍服)、車輛(vehicle)內(nèi)部和外部部分、建筑物內(nèi)部和外部部分、任何種類的軍事設(shè)施，和任何種類的上文所述環(huán)境。通過(guò)下述實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，它們不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例作為緩沖液和底物使用的化學(xué)品是至少試劑級(jí)的商業(yè)產(chǎn)品。實(shí)施例1脊髓灰質(zhì)炎病毒的滅活病毒和細(xì)胞在VERO 細(xì)胞中于 34. 5 °C，5 % CO2,使用 Eagles MEM 2 % FCSU00IU/mL 青霉素、100mg/mL鏈霉素和20 μ g/mL慶大霉素繁殖從WHO獲得的脊髓灰質(zhì)炎病毒株 Sabin (2H. 010704型)。過(guò)濾培養(yǎng)物上清(0. 45nm)，分裝并在_80°C保存至使用。儲(chǔ)液制備下述儲(chǔ)液。溶液1 :22. 8mM NaCl 和 7. 2mM NH4Cl,在 20mM DMG (Sigma D4379)緩沖液 pH 7. 0 中；溶液2 :10% H2O2，在 MilliQ 水中；溶液3 :8000ppm來(lái)自疣狀彎孢的鹵過(guò)氧化物酶(參見(jiàn)WO 97/04102中的SEQ ID NO :2)，在 20mM DMG 緩沖液 pH 7. 0 中；磷酸鹽緩沖鹽水消毒溶液為了產(chǎn)生約50mL的活性消毒溶液，混合下述物質(zhì)50mL 溶液 1 ;62 μ L 溶液 2 ；和 100 μ L 溶液 3。進(jìn)一步用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)稀釋未經(jīng)稀釋的消毒溶液，得到1 10和1 100的溶液。細(xì)胞培養(yǎng)基補(bǔ)充4 %胎牛血清、100IU/mL青霉素、100mg/mL鏈霉素和20 μ g/mL慶大霉素的 Eagles MEM 培養(yǎng)基。病毒的處理在微孔板中將50 μ L測(cè)試溶液與50 μ L在PBS中稀釋的脊髓灰質(zhì)炎病毒儲(chǔ)液混合并在34. 5°C溫育1小時(shí)。為了比較酶消毒溶液和已知的消毒劑，使用次氯酸鈉作為對(duì)照，濃度為0.5%、 0. 05%和 0. 005% ο對(duì)于所有處理，制備未加病毒的對(duì)照以鑒定測(cè)試溶液對(duì)于細(xì)胞系的任何細(xì)胞毒性作用。此外，包括病毒感染能力的陽(yáng)性對(duì)照，其中未加入消毒溶液。為了在處理后測(cè)試保持感染性的病毒，向新鮮的微孔板加入100 μ L測(cè)試溶液和包含4% FCS的IOOyL fegles礦物培養(yǎng)基，其中已經(jīng)建立了 RD細(xì)胞系(人橫紋肌肉瘤) 的匯合生長(zhǎng)。將平板在34. 5°C和5% CO2溫育5天，然后由專業(yè)評(píng)價(jià)人員使用顯微鏡為感染能力和細(xì)胞毒力評(píng)分。表1.脊髓灰質(zhì)炎病毒Sabin (2H. 010704類型)抗病毒測(cè)試的結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種用于滅活病毒的酶促方法，其包括使所述病毒接觸商過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫、氯和/或溴離子，和銨離子。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述鹵過(guò)氧化物酶是來(lái)自酶類EC1. 11. 1. 10的氯過(guò)氧化物酶。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述商過(guò)氧化物酶是含有釩的商過(guò)氧化物酶。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述鹵過(guò)氧化物酶的氨基酸序列與自疣狀彎孢 (Curvularia verruculosa)(Curvularia inequalis) nT^tHW的氨基酸序列具有至少90%同一性，優(yōu)選95%同一性。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中氯離子和/或溴離子是自氯化物和/或溴化物的鹽得到的；優(yōu)選所述氯化物和/或溴化物的鹽包括氯化鈉、溴化鈉、氯化鉀、溴化鉀、氯化銨或溴化銨。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中所述銨離子是自銨鹽得到的；優(yōu)選所述銨鹽是硫酸銨、碳酸銨、磷酸銨、氯化銨、溴化銨或碘化銨；或其混合物。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述氯離子濃度是銨離子濃度的至少兩倍；優(yōu)選至少四倍，更優(yōu)選至少六倍，最優(yōu)選至少八倍，和特別是銨離子濃度的至少十倍。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括使所述病毒接觸表面活性劑。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒是無(wú)包膜病毒，如小無(wú)包膜病毒。
10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒是腸病毒。
11.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒是脊髓灰質(zhì)炎病毒。
12.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的方法，其中所述病毒位于表面上，如醫(yī)療裝置或設(shè)備的表面上。
13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法，其為高水平消毒方法。
14.鹵過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫、氯化物鹽和/或溴化物鹽，和銨鹽用于滅活病毒的用途。
15.權(quán)利要求14的用途，用于醫(yī)療裝置或設(shè)備的高水平消毒。
全文摘要
本發(fā)明提供通過(guò)使病毒接觸鹵過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫、氯離子、溴離子和銨離子而滅活所述病毒的方法。
文檔編號(hào)A01P1/00GK102368906SQ201080014489
公開(kāi)日2012年3月7日 申請(qǐng)日期2010年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月3日
發(fā)明者M.格杰曼森, M.阿萊森-霍爾姆, R.費(fèi)斯特森, S.達(dá)尼爾森 申請(qǐng)人:諾維信公司