專利名稱：一種脫落細胞保存液及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種脫落細胞保存液及其制備方法，尤其涉及一種適合ACP酶顯示的 脫落細胞保存液及其制備方法。
背景技術：
目前對婦女宮頸細胞的篩查，大多采用液基薄層細胞檢測技術。具體方法使用專 門的取樣器，在婦女宮頸移行區(qū)刷取脫落細胞，再將細胞洗入液基細胞保存液中，經保存液 消化后，將脫落細胞轉移到載玻片上制成均勻的細胞涂片，涂片上有5000-50000個宮頸脫 落細胞，經過巴氏或者HF染色后，病理醫(yī)生在顯微鏡下觀察這些細胞的形態(tài)，尋找異常的 細胞，并根據TBS報告要求作出診斷報告，供婦科臨床醫(yī)生參考。液基薄層細胞檢測技術采用的是巴氏或HE染色，雖然一張優(yōu)良的細胞涂片能夠 做到細胞薄層、均勻，便于醫(yī)師閱片，但相對于需要從數萬個細胞中找出陽性細胞，對鏡檢 醫(yī)師仍然存在工作量大和要求經驗水平高的問題，因人為因素造成漏檢的現象非常常見， 因此，尋找一種能夠提示陽性細胞的染色方法將具有十分重大的社會意義。經最新研究發(fā) 現，當細胞遭受HPV病毒感染或鱗狀細胞表現CIN變化時，一種叫ACP的酶可以出現顯著的 活性，而正常的細胞不出現這種酶的表達。利用這一研究發(fā)現，通過特殊的方法將陽性細胞 ACP酶顯示出來，可以大大減少誤診率。在液基薄層細胞檢測技術中加入ACP酶的顯示技術，符合目前用戶的使用習慣， 但這一技術對脫落細胞保存液要求更高，除了保存細胞、消化雜質外，還必須對ACP酶具有 良好的保存效果。脫落細胞的液基保存，并不適合用完全固定細胞的方法，否則可能影響去 除沒有診斷價值的紅細胞、粘液和細胞碎片等雜質。

發(fā)明內容
本發(fā)明的第一個目的是提供一種適合ACP酶顯示的脫落細胞保存液，用于解決目 前的液基細胞保存液不能有效的保存ACP酶的問題。為了實現本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗研究，終于獲得了如下技術方案—種脫落細胞保存液，含有氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨 酸、粘液溶解劑、細胞保護劑、肝素鈉，各成分的重量百分比分別為氯化鈉0. 6%
氯化鉀0. 06%
葡萄糖2%
乙醇20%
1-3丙二醇3%
甘油2%
甘氨酸0. 15%
粘液溶解劑0. 1%
細胞保護劑 0.2%肝素鈉0.1%所述脫落細胞保存液的PH為5. 8。上述的脫落細胞保存液，它還含有0.05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液。上述的脫落細胞保存液，優(yōu)選用1 %的氫氧化鈉或鹽酸溶液調整PH至5. 8。上述的脫落細胞保存液，所述氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘 氨酸、粘液溶解劑、細胞保護劑、肝素鈉為離子狀。上述任一一種的脫落細胞保存液，其中所述粘液溶解劑優(yōu)選為二硫蘇糖醇(DTT)。上述任一一種的脫落細胞保存液，其中所述細胞保護劑優(yōu)選為多聚甲醛。本發(fā)明的另一個目的是提供上述脫落細胞保存液的制備方法，該方法包括如下步 驟(1)用去離子水分別溶解氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細胞保護 劑、肝素鈉，備用；(2)將乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去離子水稀釋一倍；(3)配制0. 05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液；(4)在步驟C3)的苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液中，依次加入氯化鈉、氯化鉀、葡 萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細胞保護劑、肝素鈉溶液，混勻后加入步驟O)的混合溶液，混 勻后用去離子水稀釋至終濃度，邊稀釋邊攪拌，并用1 %的氫氧化鈉或鹽酸溶液調整PH值 至 5. 8。本發(fā)明提供的脫落細胞保存液，以科學合理的比例增加了多種化學成分，細胞保 存率高，細胞核清晰、細胞質舒展，能有效去除紅細胞和粘液，使細胞分散平鋪的同時，更能 很好地保存ACP酶，適合做ACP酶染色。


圖1經過本發(fā)明的細胞保存液保存后制成細胞涂片的顯微照片1、異常細胞 2、正常細胞
具體實施例方式以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術方案做進一步作描述，但是本發(fā)明 的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構思的改變或等同替代均包括在本發(fā) 明的保護范圍之內。宮頸脫落細胞保存液的制備1、根據最終溶液的容量，計算出各組分的用量，氯化鈉0. 6%，氯化鉀0. 06%，葡 萄糖2 %，乙醇20 %，1-3丙二醇3 %，甘油2 %，甘氨酸0.15%，粘液溶解劑0.1%，細胞保護 劑0. 2 %，肝素鈉0.1%，保持終濃度達到所需要求；2、用去離子水分別溶解氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細胞保護 劑、肝素鈉備用；3、將乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去離子水稀釋一倍；4、配制0. 05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液；
5、在苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液中，依次加入氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨 酸、二硫蘇糖醇、多聚甲醛、肝素鈉溶液混勻；6、將步驟3的混合溶液加入步驟5的溶液中混勻；7、用去離子水將6稀釋到終濃度，邊稀釋邊攪拌；8、測定PH值，用的氫氧化鈉或鹽酸溶液調整PH值到5. 8。9、各組分溶解，都呈現無色。經過上述制備方法制備的細胞保存液保存的宮頸脫落細胞，在轉移到載玻片上 制成均勻的細胞涂片時，經過酶染色后，異常細胞的細胞質中含有的大量ACP酶顆粒被染 成紅色，而正常細胞因不含ACP酶顆粒，故細胞質不著色，從而使異常細胞被清晰的標示出 來，具體效果參見圖1。
權利要求
1.一種脫落細胞保存液，其特征在于含有如下重量百分比的組分氧化鈉 0.6%氯化鉀 0.06%葡萄糖 2%乙醇 20%1-3丙二醇 3%甘油 2%甘氨酸 0.15%粘液溶解劑 0.1%細胞保護劑 0.2%肝素鈉 0.1%所述脫落細胞保存液的PH為5. 8。
2.如權利要求1所述的脫落細胞保存液，其特征在于還含有0.05Ν苯甲酸鈉-苯甲 酸緩沖液。
3.如權利要求2所述的脫落細胞保存液，其特征在于PH為5.8。
4.如權利要求2所述的脫落細胞保存液，其特征在于所述氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、乙 醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨酸、粘液溶解劑、細胞保護劑、肝素鈉為離子狀。
5.如權利要求1-4任一所述的脫落細胞保存液，其特征在于所述粘液溶解劑為二硫 蘇糖醇。
6.如權利要求1-4任一所述的，其特征在于所述細胞保護劑為多聚甲醛。
7.權利要求1-4任一所述的脫落細胞保存液的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)用去離子水分別溶解氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細胞保護劑、肝 素鈉，備用；(2)將乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去離子水稀釋一倍；(3)配制0.05Ν苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液；(4)在步驟(3)的苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液中，依次加入氯化鈉、氯化鉀、葡萄 糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細胞保護劑、肝素鈉溶液，混勻后加入步驟O)的混合溶液，混勻 后用去離子水稀釋至終濃度，邊稀釋邊攪拌，并用1 %的氫氧化鈉或鹽酸溶液調整PH值至
全文摘要
本發(fā)明涉及一種脫落細胞保存液及其制備方法，該保存液的各組分的重量百分比分別為氯化鈉0.6％，氯化鉀0.06％，葡萄糖2％，乙醇20％，1-3丙二醇3％，甘油2％，甘氨酸0.15％，粘液溶解劑0.1％，細胞保護劑0.2％，肝素鈉0.1％，0.05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液，并用1％的氫氧化鈉或鹽酸溶液調整pH值，以確保保存液的pH＝5.8。本發(fā)明的脫落細胞保存液能較好的保存細胞，保存時間可達10天以上，細胞核清晰、細胞質舒展，有效去除紅細胞和粘液，使細胞分散平鋪的同時，更能很好地保存ACP酶，適合做ACP酶染色。
文檔編號A01N1/02GK102113481SQ20101060895
公開日2011年7月6日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權日2010年12月24日
發(fā)明者黃生明 申請人:廈門邁威生物科技有限公司