專利名稱：一種北蟲草菌種的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食用菌菌種分離方法，尤其涉及一種北蟲草菌種的組織分離方法，屬于食用菌生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
北蟲草也叫蛹蟲草，是一種蟲菌復(fù)合的藥用真菌，屬于真菌門，子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草屬。成熟的北蟲草子座長5 15公分，金黃或者桔黃色，是一種名貴的藥用真菌，與冬蟲夏草有相似的藥用和滋補(bǔ)功效。北蟲草不僅含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸及30 多種人體所需的微量元素，而且含有特有的蟲草素、蟲草酸，是上等的滋補(bǔ)保健佳品。國內(nèi)外研究認(rèn)為，北蟲草食用和藥用價值可與傳統(tǒng)的冬蟲夏草媲美，人工培養(yǎng)的北蟲草蟲草素含量高于傳統(tǒng)冬蟲夏草幾十倍?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究證明，蟲草中含有蟲草素、蟲草酸以及各種氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)，具有滋肺補(bǔ)腎、止血化痰、擴(kuò)張氣管、鎮(zhèn)靜、抗各類細(xì)菌、降血壓等功效。 衛(wèi)生部已經(jīng)批準(zhǔn)北蟲草為新資源食品，人工栽培的北蟲草將彌補(bǔ)野生冬蟲夏草數(shù)量嚴(yán)重短缺的狀況，已經(jīng)成為國內(nèi)外蟲草市場的新品種，栽培北蟲草也逐漸成為農(nóng)民增收致富的高效農(nóng)業(yè)項目。隨著北蟲草產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，栽培數(shù)量會逐漸增加，北蟲草菌種的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)問題不得不引起農(nóng)業(yè)部門的重視，因為北蟲草不同于其他食(藥)用菌，其菌種的遺傳性狀非常不穩(wěn)定，極易退化，不能象其他食(藥)用菌菌種一樣低溫保存后轉(zhuǎn)管繼代培養(yǎng)，需要重新分離后，才能實現(xiàn)高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)。如果使用轉(zhuǎn)管的菌種有可能導(dǎo)致只長菌絲不出草的狀況發(fā)生， 給生產(chǎn)者造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，所以，北蟲草菌種分離工作尤為重要?，F(xiàn)有技術(shù)中，食(藥) 用菌菌種一般采用組織分離或孢子分離的方法獲得，組織分離的部位一般選擇子實體菌柄與菌蓋交界部位不裸露的組織，而北蟲草沒有菌蓋，其子座又很細(xì)，挑取不裸露的組織很困難。目前，公開的專利文獻(xiàn)中尚未檢索到北蟲草組織分離的方法。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明公開一種北蟲草菌種組織分離方法，包括培養(yǎng)基制作，選草，子座處理，選擇最佳取種部位、切段，斜面定植與培養(yǎng)，其特征在于所述最佳取種部位區(qū)間是離北蟲草子座生長點(diǎn)頂端5-30mm，該區(qū)間菌絲組織最密集，菌絲活力也最強(qiáng)。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的
1、制作培養(yǎng)基培養(yǎng)基制作方法是先將去皮土豆200g、麩皮5g、大米IOg與 SOO-IOOOml水共煮半小時后，再用4-6層紗布過濾取其汁，加水補(bǔ)足IOOOml后繼續(xù)加熱， 然后放入瓊脂18-20g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2-3g、硫酸鎂l_2g、蛋白胨6_8g、維生素 B1IOjOmg,調(diào)整pH至5. 5-6. 5 ；采用常規(guī)方法裝試管、封口、滅菌、擺斜面，形成斜面培養(yǎng)基。2、挑選種草選取色澤鮮亮、長度整齊、粗細(xì)均勻，粗3-5mm，長60-80mm，生長健壯、無破損、無病蟲感染、八成熟的北蟲草子座作為種草。3、處理子座子座處理方法是在無菌環(huán)境中，用鑷子夾住子座根部，先放入無菌水中清洗10-30秒，然后放入75%的酒精溶液中浸泡處理30-60秒，再放入未使用過的無菌水中清洗10-30秒，并用無菌刀刮去子座上部的孢子，逐根處理所選的子座。4、選擇最佳取種部位取種最佳部位區(qū)間是離北蟲草子座生長點(diǎn)頂端5_30mm，該區(qū)間菌絲組織最密集，菌絲活力也最強(qiáng)。5、種草切段將經(jīng)過處理的北蟲草子座，先用無菌刀切除頂端5mm的頭部部位，再將其依次切成3-10mm長的小段種草，擺放在無菌的培養(yǎng)皿中，逐根切斷所選的全部子座。6、定植將所切的北蟲草子座小段種草逐一貼附定植在無菌的試管斜面上，每支試管貼附定植1段種草小段，定植部位在試管斜面的中央。7、培養(yǎng)定植好的試管斜面，用棉花或者硅膠塞封口后，放入23-26°C的培養(yǎng)室內(nèi)，避光培養(yǎng)7-10天，就可以長成供生產(chǎn)使用的首代北蟲草母種。本發(fā)明的有益效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn) 1、分離方法簡便易操作，實用性強(qiáng)。2、選取離北蟲草子座生長點(diǎn)頂端5_30mm的部位區(qū)間作為種草組織，該區(qū)間菌絲組織最密集，菌絲活力也最強(qiáng)。3、每次使用首代母種，可以克服北蟲草菌種遺傳性狀不穩(wěn)定的缺陷，有效避免只長菌絲不出草的狀況發(fā)生，確保栽培成功率，避免經(jīng)濟(jì)損失。
具體實施例方式
1、制作培養(yǎng)基培養(yǎng)基制作方法是先將去皮土豆200g、麩皮5g、大米IOg與IOOOml水共煮半小時后，再用6層紗布過濾取其汁，加水補(bǔ)足IOOOml后繼續(xù)加熱，然后放入瓊脂20g、 葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1. 5g、蛋白胨6g、維生素BfOmg，調(diào)整pH至6. O ；采用常規(guī)方法裝試管、封口、滅菌、擺斜面，形成斜面培養(yǎng)基。2、挑選種草選取色澤鮮亮、長度整齊、粗細(xì)均勻，粗3-5mm，長60-80mm，生長健壯、無破損、無病蟲感染、八成熟的北蟲草子座作為種草。3、處理子座子座處理方法是在無菌環(huán)境中，用鑷子夾住子座根部，先放入無菌水中清洗20秒，然后放入75%的酒精溶液中浸泡處理60秒，操作要輕，不能造成表皮破損，防止酒精進(jìn)入子座內(nèi)部殺傷菌絲，為提高處理效果，可以將子座在無菌水和酒精之間來回操作2-3遍；最后再放入未使用過的無菌水中清洗20-30秒，并用無菌刀刮去子座上部的孢子，逐根處理所選的子座。4、選擇最佳取種部位北蟲草子座最佳取種部位區(qū)間是離生長點(diǎn)頂端5_30mm，該區(qū)間菌絲組織最密集，菌絲活力也最強(qiáng)。5、種草切段將經(jīng)過處理的北蟲草子座，先用無菌刀切除頂端5mm的頭部部位，再將其依次切成5mm長的小段種草，擺放在無菌的培養(yǎng)皿中，逐根切斷所選的全部子座。6、定植將所切的北蟲草子座小段種草逐一貼附定植在無菌的試管斜面上，每支試管貼附定植1段種草小段，定植部位在試管斜面的中央。7、培養(yǎng)定植好是試管斜面，用棉花或者硅膠塞封口后，放入25°C的培養(yǎng)室內(nèi)，避光培養(yǎng)7-10天，就可以長成供生產(chǎn)使用的首代北蟲草母種。
權(quán)利要求
1.一種北蟲草菌種的分離方法，包括培養(yǎng)基制作，選草，子座處理，選擇最佳取種部位、 切段，斜面定植與培養(yǎng)，其特征在于所述最佳取種部位區(qū)間是離北蟲草子座生長點(diǎn)頂端 5-30mm，該區(qū)間菌絲組織最密集，菌絲活力也最強(qiáng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北蟲草菌種的分離方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基制作方法是將去皮土豆200g、麩皮5g、大米IOg與SOO-IOOOml水共煮半小時后，用4_6層紗布過濾取其汁，加水補(bǔ)足IOOOml后繼續(xù)加熱，放入瓊脂18-20g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2_3g、 硫酸鎂l_2g、蛋白胨6-8g、維生素B1IOjOmg,調(diào)整pH至5. 5-6. 5 ；采用常規(guī)方法裝入試管， 滅菌擺斜面，形成斜面培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北蟲草菌種的分離方法，其特征在于所述的選草就是挑選種草，選取色澤鮮亮、長度整齊、粗細(xì)均勻，粗3-5mm，長60-80mm，生長健壯、無破損、無病蟲感染、八成熟的北蟲草子座作為種草。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北蟲草菌種的分離方法，其特征在于所述的子座處理方法是在無菌環(huán)境中，用鑷子夾住子座根部，先放入無菌水中清洗10-30秒，然后放入75% 的酒精溶液中浸泡處理30-60秒，再放入未使用過的無菌水中清洗10-30秒，并用無菌刀刮去子座上部的孢子，逐根處理所選的子座。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北蟲草菌種的分離方法，其特征在于所述的切段是將經(jīng)過處理的北蟲草子座，先用無菌刀切除頂端5mm的頭部，再將其依次切成3-10 mm長的小段，擺放在無菌的培養(yǎng)皿中，逐根切斷所選的子座。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北蟲草菌種的分離方法，其特征在于所述的斜面定植與培養(yǎng)是將所切的北蟲草子座小段逐一貼附定植在無菌的試管斜面上，每支試管貼附1 段，貼附部位在試管斜面的中央；封口后放入23-26°C的培養(yǎng)室避光培養(yǎng)7-10天。
全文摘要
本發(fā)明屬于食用菌生產(chǎn)領(lǐng)域，公開一種北蟲草菌種的組織分離方法，包括培養(yǎng)基制作，選草，子座處理，選擇最佳取種部位、切段，斜面定植與培養(yǎng)，其特征在于所述最佳取種部位區(qū)間是離北蟲草子座生長點(diǎn)頂端5-30ml，該區(qū)間菌絲組織最密集，菌絲活力也最強(qiáng)。本發(fā)明分離方法簡便易行，實用性強(qiáng)，每次使用首代母種應(yīng)用生產(chǎn)，可以克服北蟲草菌種遺傳性狀不穩(wěn)定的缺陷，有效避免只長菌絲不出草的狀況發(fā)生，避免經(jīng)濟(jì)損失，確保栽培成功率。
文檔編號A01G1/04GK102440141SQ201010299589
公開日2012年5月9日 申請日期2010年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月8日
發(fā)明者朱忠貴, 董亞萍 申請人:鎮(zhèn)江市食用菌研究所