專利名稱：一種通過葉片誘導(dǎo)叢生芽快速繁殖蝴蝶蘭方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，本發(fā)明屬于無性繁殖的組培方法。
背景技術(shù)：
蝴蝶蘭是統(tǒng)名花，以其形態(tài)優(yōu)美別致、花朵碩大、花色艷麗、色澤豐富、花期長，被稱為“蘭花之后”，而為單軸莖附生花卉，植株極少萌發(fā)側(cè)芽枝，常規(guī)的繁殖方法難以滿足市場需求，而組織培養(yǎng)是快速繁殖蝴蝶蘭的最有效途徑。1960年，Morel提出了離體無性繁殖蘭花的方法。隨著蝴蝶蘭的推廣，對蝴蝶蘭快繁體系的研究也逐漸深入。利用成熟果莢進(jìn)行無菌播種，獲得播種苗；利用無菌播種苗進(jìn)行誘導(dǎo)擬原球莖或叢生芽；外植體進(jìn)行消毒， 獲得叢生芽或擬原球莖；也有通過無菌葉片脫分化培養(yǎng)獲得原球莖，原球莖進(jìn)一步增殖分化成叢生芽，進(jìn)行繁殖。目前通過葉片直接誘導(dǎo)叢生芽的培養(yǎng)方面尚未見到詳細(xì)的報(bào)道。盡管蝴蝶蘭快繁技術(shù)取得一定進(jìn)展，但蝴蝶蘭叢生芽繁殖系數(shù)低、擬原球莖需分化專用培養(yǎng)基、且擬原球莖分化變異率高，這些都是制約蝴蝶蘭工廠化生產(chǎn)的因素。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述問題，本發(fā)明提供了一種通過葉片誘導(dǎo)叢生芽的快速繁殖蝴蝶蘭的新方法，本方法具有繁殖速度快、生長周期短、降低生產(chǎn)成本的優(yōu)點(diǎn)，對于蝴蝶蘭產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義。本發(fā)明的方法是先用蝴蝶蘭花梗芽進(jìn)行消毒、培養(yǎng)得到無菌材料，無菌材料去葉， 用無菌花梗芽萌發(fā)獲得叢生芽，叢生芽進(jìn)行繁殖的同時(shí)，利用常規(guī)繁殖中廢棄的葉片如無菌葉片及叢生芽葉片進(jìn)行誘導(dǎo)叢生芽，葉片與叢生芽繁殖繼代進(jìn)行，即每代叢生芽的葉片都能再利用，誘導(dǎo)新的叢生芽，最后以叢生芽培養(yǎng)為組培苗。用蝴蝶蘭花梗芽獲得無菌材料的步驟中，蝴蝶蘭花梗芽經(jīng)過75%乙醇棉球進(jìn)行擦拭，剝離花梗芽苞片，將裸露出花梗芽的芽段經(jīng)0. 升汞浸泡10-15分鐘，用無菌水反復(fù)沖洗后接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基l/3MS+BA2-;3mg/L+NAA0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養(yǎng)條件包括溫度25士2°C、光照時(shí)間10-12小時(shí)/天、光照強(qiáng)度1200_1500Lx。 經(jīng)過45天-60天的培養(yǎng)，獲得無菌小苗。無菌小苗進(jìn)行快繁的過程中，對無菌葉片進(jìn)行分切，直徑約Icm的方塊，邊緣用刀片劃傷，將葉片平鋪在誘導(dǎo)叢生芽的專用培養(yǎng)基花寶1號2g/L+BA2-5mg/ L+NAA0. 1-0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。同時(shí)，利用去除葉片的小芽，進(jìn)行常規(guī)的叢生芽誘導(dǎo)l/3MS+BA2-;3mg/L+NAA0. 2mg/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+ 蔗糖20g/L。培養(yǎng)條件包括溫度25士2°C、光照時(shí)間10-12小時(shí)/天、光照強(qiáng)度1200-1500Lx。 經(jīng)過45天-60天的培養(yǎng)，獲得叢生芽。在誘導(dǎo)過程中，葉片四周萌發(fā)出叢生芽，最多一塊葉片分化出13個(gè)叢生芽。用葉片誘導(dǎo)的叢生芽，及用小芽誘導(dǎo)的叢生芽完成增殖、壯苗、生根的步驟中，在增殖的多次繼代過程中，葉片和小芽不斷誘導(dǎo)分化出新的叢生芽。通常在完成10次繼代增殖后，將叢生芽進(jìn)行壯苗，隨后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。本方法中，所用的培養(yǎng)基介紹如下MS為基本培養(yǎng)基配方，1/3MS表示大量元素的用量為正常用量的1/3，其它微量等成份不變；BA，NAA為常用的植物激素；蛋白胨是牛肉蛋白胨；椰子水為椰子內(nèi)的液體；花寶1號是進(jìn)口肥料，購于香港。葉片誘導(dǎo)叢生芽的現(xiàn)象，具體見圖片。關(guān)于誘導(dǎo)率，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，所處理的3個(gè)品種，均可以通過葉片誘導(dǎo)出叢生芽。不同品種的葉片誘導(dǎo)叢生芽的比率30-70%。一塊直徑約Icm的葉片誘導(dǎo)叢生芽的數(shù)量高達(dá)13個(gè)芽，平均3個(gè)芽。本發(fā)明通過葉片誘導(dǎo)叢生芽，達(dá)到快速繁殖蝴蝶蘭的目的，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本方法具有以下優(yōu)點(diǎn)。(1)傳統(tǒng)的方法是通過葉片等其它器官誘導(dǎo)擬原球莖，該途徑需要經(jīng)過擬原球莖再分化階段，步驟增多，耗費(fèi)成本，且原球莖分化過程中變異率較高。該發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于利用蝴蝶蘭常規(guī)快繁中廢棄的葉片，在同一培養(yǎng)基中直接誘導(dǎo)出叢生芽，通過此途徑可獲得大量叢生芽，降低了成本，大大地縮短了新品種的培育周期，對于新品種快速推向市場具有突破性的技術(shù)革新。株葉片平均至少可切下4塊葉片，一塊葉片平均誘導(dǎo)出3個(gè)芽，葉片誘導(dǎo)的芽數(shù)為 12個(gè)芽?？紤]到誘導(dǎo)成功率30-70%，按30%核算，可誘導(dǎo)出3.6個(gè)芽。即增值率翻了近3 倍。利用葉片誘導(dǎo)叢生芽應(yīng)用前景可觀，對于珍貴的新品種需短期快繁出大量的克隆苗，應(yīng)用該方法可有效縮短蝴蝶蘭的快繁時(shí)間，在蝴蝶蘭的工廠化生產(chǎn)中有很大的應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實(shí)施例1航蝴1號紅花蝴蝶蘭花梗芽經(jīng)過75%乙醇棉球進(jìn)行擦拭，剝離花梗芽苞片， 將裸露出花梗芽的芽段經(jīng)0. 升汞浸泡12分鐘，用無菌水沖洗后接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基: l/3MS+BA3mg/L+NAA0. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養(yǎng)條件包括溫度25 士 2 °C、光照時(shí)間10-12小時(shí)/天、光照強(qiáng)度1200-1500LX。經(jīng)過48天的培養(yǎng)，獲得無
菌小苗。利用無菌葉片進(jìn)行切段，切為直徑約Icm的方塊，葉片邊緣用刀片劃傷，將14塊葉片平鋪在誘導(dǎo)叢生芽的專用培養(yǎng)基花寶1號+BA5mg/L+NAA0. ang/L++蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養(yǎng)條件包括溫度25士2°C、光照時(shí)間10-12小時(shí)/天、光照強(qiáng)度1200-1500LX。經(jīng)過56天的培養(yǎng)，葉片邊緣叢生芽。在誘導(dǎo)過程中，葉片四周萌發(fā)出叢生芽， 總計(jì)獲得32個(gè)叢生芽。
權(quán)利要求
1.一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，利用葉片誘導(dǎo)叢生芽，最后以叢生芽作為繁殖對象培養(yǎng)無性系組培苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，所述葉片是通過以下步驟得到步驟一，取蝴蝶蘭花梗芽進(jìn)行消毒、培養(yǎng)得到無菌材料；步驟二，無菌材料去葉，用無菌花梗芽萌發(fā)獲得叢生芽；步驟三，叢生芽組織進(jìn)行繁殖，分切擴(kuò)繁；步驟四，切取無菌材料或/和叢生芽葉片作為新的繁殖原材料。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，所述步驟一中，蝴蝶蘭花梗芽經(jīng)過75%乙醇棉球進(jìn)行擦拭，剝離花梗芽苞片，將裸露出花梗芽的芽段經(jīng)0. 升汞浸泡10-15分鐘，用無菌水沖洗后接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基l/3MS+BA2-;3mg/ L+NAAO. ang/L+蛋白胨2g/L+椰子水100ml/L+蔗糖20g/L。培養(yǎng)條件包括溫度25士2°C、光照時(shí)間10-12小時(shí)/天、光照強(qiáng)度1200-1500LX。經(jīng)過45天-60天的培養(yǎng)，獲得無菌小苗。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于， 在所述利用蝴蝶蘭葉片誘導(dǎo)叢生芽過程中，無菌條件下，將葉片分切成直徑約Icm的方塊， 葉片邊緣用刀片劃傷，將葉片平鋪在誘導(dǎo)叢生芽的專用培養(yǎng)基花寶1號2g/L+BA2-5mg/ L+NAAO. 1-0. 2mg/L+ 蛋白胨 2g/L+ 椰子水 100ml/L+ 蔗糖 20g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種通過葉片快速繁殖蝴蝶蘭的方法，其特征在于，在所述利用蝴蝶蘭葉片誘導(dǎo)叢生芽過程中，同時(shí)，利用去除葉片的小芽，進(jìn)行常規(guī)的叢生芽誘導(dǎo) l/3MS+BA2-3mg/L+NAA0. ang/L+ 蛋白胨 2g/L+ 椰子水 100ml/L+ 蔗糖 20g/L，培養(yǎng)條件包括溫度25士2°C、光照時(shí)間10-12小時(shí)/天、光照強(qiáng)度1200-1500LX。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種通過葉片誘導(dǎo)叢生芽快速繁殖蝴蝶蘭的方法，尤其是一種將蝴蝶蘭花梗芽進(jìn)行消毒、培養(yǎng)得到無菌材料，無菌材料去葉，用無菌花梗芽萌發(fā)獲得叢生芽，叢生芽進(jìn)行繁殖的同時(shí)，利用無菌材料或/和叢生芽中的葉片進(jìn)行誘導(dǎo)叢生芽，最后以叢生芽作為繁殖對象培養(yǎng)組培苗來快速繁殖蝴蝶蘭的方法。本方法具有繁殖速度快、生長周期短、降低生產(chǎn)成本的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A01H4/00GK102283110SQ20101029619
公開日2011年12月21日 申請日期2010年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月29日
發(fā)明者侯學(xué)瑛, 姬澎, 張占路, 徐明全, 趙貴林, 鄭平, 陳肖英 申請人:深圳市農(nóng)科植物克隆種苗有限公司, 深圳市農(nóng)科集團(tuán)公司