專利名稱：一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海水魚類養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種提高大菱鲆免疫力，促進大 菱鲆快速生長、改善水質(zhì)、節(jié)水節(jié)能、節(jié)省人力物力、綠色低碳的大菱鲆養(yǎng)殖方法。
背景技術(shù)：
大菱鲆(Scophthalmus maximus)是原產(chǎn)于歐洲的一種名貴鲆鰈類。它性情溫
馴、體形優(yōu)美、肌肉豐厚白嫩，鰭條間含有豐富的膠質(zhì)，近似甲魚的裙邊和海參的風(fēng) 味，營養(yǎng)價值高，是理想的保健和美容食品，深受消費者的喜愛。大菱鲆作為世界馳名 養(yǎng)殖良種受到國際養(yǎng)殖界的高度重視，正在不斷擴大養(yǎng)殖范圍。我國自1998年突破大菱鲆大批量生產(chǎn)性育苗技術(shù)以來，大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)量成倍增 加。目前國內(nèi)每年的商品魚產(chǎn)量已超過3000t，成為我國北方海水魚類的主要養(yǎng)殖種類之 一。雖然大菱鲆工廠化養(yǎng)殖發(fā)展迅速，但是近年來，由于養(yǎng)殖環(huán)境不斷惡化，大菱鲆抵 抗力逐漸下降，病害日趨嚴重，生長緩慢，這些已成為制約我國大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā) 展的瓶頸。“溫室大棚+深井水養(yǎng)殖”是目前水產(chǎn)養(yǎng)殖最普遍的生產(chǎn)模式。這種養(yǎng)殖模式需 要大量的水循環(huán)，配合飼料和化學(xué)藥物，高投入低產(chǎn)出。地下井水的過度開采使用，不 僅浪費資源和能源，導(dǎo)致水資源枯竭，還會嚴重影響地質(zhì)概況，為地質(zhì)災(zāi)害埋下隱患。 大量的養(yǎng)殖廢水排放，也造成海洋水體的嚴重污染。傳統(tǒng)的抗生素和化學(xué)藥物的使用， 具有吸收快，療效好的優(yōu)點，但會對大菱鲆產(chǎn)生刺激性，會引發(fā)新的炎癥。同時長期使 用抗生素會使致病菌耐藥菌株增加，一些常見的流行病難以徹底根治，反復(fù)發(fā)作，且大 大降低了大菱鲆的抵抗力。此外，抗生素殘留會影響魚的品質(zhì)，危害人的身體健康、危 害生態(tài)環(huán)境、降低其商業(yè)價值，同時也造成養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟損失。全封閉循環(huán)系統(tǒng)，則投 資大，難為普通養(yǎng)殖戶所接受。因此，促進大菱鲆快速生長、節(jié)水節(jié)能、節(jié)省人力物 力、綠色低碳的新型無公害養(yǎng)殖方式成為近年來國家的重大需求，引起水產(chǎn)界的廣泛關(guān) 注。蛭弧菌是寄生于其他細菌，并能導(dǎo)致宿主細菌裂解的一類細菌。比一般細菌 小，能通過細菌濾器，有類似噬菌體的作用。單細胞，呈弧形或逗點狀，有時呈螺旋 狀，大小一般(0.2 0.6) X (0.8 1.2)微米，端生鞭毛，多為一根。革蘭氏染色呈陰 性，可裂解致病或潛在致病菌。蛭弧菌游泳體是指蛭弧菌侵入宿主細菌前的生長形式。 蛭弧菌在游泳體階段，識別并與宿主發(fā)生不可逆結(jié)合，然后侵入宿主，蛭弧菌游泳體侵 入宿主細菌的過程非?？?，一般幾秒鐘內(nèi)即可完成。蛭弧菌蛭質(zhì)體是蛭弧菌在特定宿主 細菌的周質(zhì)空間內(nèi)進行生長繁殖的形式。蛭弧菌進入宿主菌細胞周質(zhì)空間后，主要通過 降解宿主細胞的大分子成為單體，然后攝入用于其生物大分子的合成。蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合物兼具游泳體起效快，活力強和蛭質(zhì)體制備、保 存容易，殺菌作用時間更久和環(huán)境耐受力更強的優(yōu)點。目前，用蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體 的混合菌液來提高大菱鲆的免疫力，促進大菱鲆快速生長和改善水質(zhì)的養(yǎng)殖方式在國內(nèi)外均未報道。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell(1978) 研究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對動物及人的細胞不具侵染性[Lenz R.W., Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology, 1978, 119(3) 245-248]。在國內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對魚類細胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對 魚類細菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強。蛭弧菌BDH2102對魚 類細胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報，2006，33(1) 7-11]。

發(fā)明內(nèi)容
為克服上述現(xiàn)有養(yǎng)殖技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種節(jié)能減排 的大菱鲆養(yǎng)殖方法；該方法通過在飼料和水體中添加蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌 液實現(xiàn)，具體包括養(yǎng)殖水源選擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，其特征 按照養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)原理，海洋生物的生長環(huán)境要求，生物之間的相互關(guān)系及無公害養(yǎng)殖標 準，人工創(chuàng)造養(yǎng)殖環(huán)境，減少投入成本，改善水質(zhì)，提高大菱鲆免疫力，促進大菱鲆快 速生長，提高經(jīng)濟效益。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案來實現(xiàn)一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，包 括以下操作步驟(1)取海域無污染的海水作為養(yǎng)殖用水；養(yǎng)殖用水經(jīng)砂濾、沉淀后，注入養(yǎng)殖 池；在養(yǎng)殖池上方蓋遮光布，控制光照強度為150 2001UX ；(2)在養(yǎng)殖池中加入蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體菌液，并加大曝氣量，攪拌 均勻，使池水中的蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體的濃度達10 107pfu/mL ；(3)向養(yǎng)殖池中投放魚苗；(4)養(yǎng)殖期間正常曝氣，控制水溫在15 30°C，日投餌量為魚體重的質(zhì)量百分 數(shù)3 5%，餌料在投入前，用濃度為10 107pfu/mL的蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合 體菌液浸泡15 30min ；每隔5 40天換掉池水(全池)一次，每次換水后，加入蛭弧 菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體菌液，使池水中的蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體濃度達到 10 107pfu/mL。所述的蛭弧菌蛭質(zhì)體為蛭弧菌存在于宿主菌內(nèi)的狀態(tài)；所述的蛭弧菌游泳體為蛭弧菌游離在宿主菌外部的狀態(tài)；步驟(1)所述養(yǎng)殖池的池底為凹型或平底，養(yǎng)殖池在注入養(yǎng)殖用水之前清洗消 毒干凈；所述遮光布的遮光率為95%。步驟(2)和(4)所述加入蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體菌液的方法為用養(yǎng)殖 池中的池水稀釋菌液，均勻潑灑全池。步驟(2)所述加大曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的 曝氣量為70 80L/h/m3。步驟(3)所述投放魚苗在水溫15 30°C時按照以下標準魚苗重量為25 50g 時，投放密度為300 400尾/m2 ；魚苗重量為70 100g時，投放密度為200 300尾 /m2 ；魚苗重量為100 200g時，投放密度為100 150尾/m2。溫度升高時則減少養(yǎng)殖密度。步驟(4)所述餌料為顆粒餌料；所述餌料在早上、中午和晚上各投放一次，每 次投餌間隔5 6小時，投餌方式為灑遍全池。步驟⑵和⑷所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05,所述蛭弧菌于 2009年8月7日保藏于湖北省武漢市珞珈山武漢大學(xué)內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保 藏編號為 CCTCCNO: M 209172。所述蛭弧菌BDFM05進行負染后于電子顯微鏡下進行形態(tài)觀察BDFM05呈 單細胞，橢圓形，大小為1.43X0.53um，端生鞭毛，鞭毛長度至少2um ；所述蛭弧菌 BDFM05以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑；所述蛭弧菌BDFM05是由野生型蛭弧菌BDS02經(jīng)紫外誘變得到；所述紫外誘變依據(jù)申請?zhí)枴?008100220488.3”，名稱為“紫外誘導(dǎo)突變在增強 蛭弧菌裂解性能中的應(yīng)用”的國家發(fā)明專利申請中的方法進行；步驟(2)和(4)所述混合體菌液為蛭弧菌游泳體菌液和蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按細菌 個數(shù)1 1混合而成。所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按照以下方法制備得到接種嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila,購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號GIM1.172)于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng) 基中，26 30°C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經(jīng)5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加入至 DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于1000mL 蒸餾水中，pH值為7.2 7.6)中，接入蛭弧菌BDFM05，28°C培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng) 6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清液，沉淀用DNB液體 培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2mOl/LpH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到蛭弧菌 蛭質(zhì)體菌液；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到將蛭弧菌蛭質(zhì)體制備方法中的 含蛭弧菌游泳體的上清經(jīng)16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng) 基、水、生理鹽水或0.2mOl/LpH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到蛭弧菌游泳 體菌液。所述DNB液體培養(yǎng)基是將營養(yǎng)肉湯0.8g、酪蛋白酸水解物0.5g和酵母精提物 O.lg溶于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至7.2 7.6。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果(1)蛭弧菌的生活史可分為脫離宿主細菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳體狀態(tài)和 在宿主細菌內(nèi)生長發(fā)育的蛭質(zhì)體狀態(tài)。蛭弧菌游泳體侵入宿主的周質(zhì)空間的同時失去鞭 毛。蛭弧菌游泳體侵入宿主時，在宿主細胞壁上產(chǎn)生一個孔隙，當蛭弧菌侵入到宿主的 周質(zhì)空間后孔隙重新封閉。游泳體失去鞭毛，和宿主細胞一起被稱為"蛭質(zhì)體"。與游 泳體相比，蛭質(zhì)體不僅具有制備、保存更為方便，環(huán)境耐受力強，作用時間雖略慢但更 久的特點，同時還具有潛在的滅活疫苗功能。當蛭弧菌游泳體入侵宿主細胞后，宿主細 胞的呼吸作用(respiration)很快被停止。蛭弧菌也進入蛭質(zhì)體狀態(tài)，開始分泌多種酶，消 解宿主細胞的大分子為小分子物質(zhì)，進而整合為自身的營養(yǎng)物質(zhì)，使自身生長，變長。 最終，長條狀的蛭質(zhì)體分成很多短的節(jié)段，長出鞭毛，重新成為游泳體。之后，它們分 泌必需的酶類，破壁而出，再次成為脫離宿主細菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳體。在此蛭質(zhì)體發(fā)育期間，蛭弧菌并不改變宿主細胞的表面結(jié)構(gòu)，使原宿主仍具有抗原作用， 可刺激生物體，產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)?？捎行ьA(yù)防魚類細菌病的產(chǎn)生，提高養(yǎng)殖成活率寸。本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液兼具有游泳體和蛭質(zhì)體的共同優(yōu) 點，效果更佳。(2)本發(fā)明采用營養(yǎng)配制、蛭弧菌混合菌液預(yù)防和調(diào)節(jié)、環(huán)境調(diào)控相結(jié)合的方 案，達到了提高大菱鲆的免疫力，促進大菱鲆攝食和快速生長，降低生產(chǎn)成本，提高經(jīng) 濟效益的效果。(3)本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液對大多數(shù)的水產(chǎn)致病或潛在致 病菌有裂解效果，對水質(zhì)也有一定的凈化作用，用蛭弧菌混合菌液浸泡飼料，并在池水 中潑灑一定濃度的蛭弧菌混合菌液，既能促進大菱鲆的生長，提高免疫力，又能凈化水 質(zhì)，最長可達到40天不換水。從而克服了抗生素濫用帶來的副作用和對養(yǎng)殖廢水進行處 理的高成本，為人類提供安全、綠色、無公害的水產(chǎn)品，提高養(yǎng)殖戶的收入。(4)本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體混合菌液在大菱鲆的應(yīng)用中安全性好。 蛭弧菌游泳體通過裂解而消除致病或潛在致病菌的方法是生物方法，綠色、安全、無污 染。蛭弧菌可侵染、裂解宿主細菌的特性使之適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中致 病菌的生物凈化因子，且其在裂解完宿主菌后，會因饑餓而自動消亡，現(xiàn)有的研究表明 蛭弧菌對魚類無毒性作用，對人類無致病性。(5)本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體混合菌液在大菱鲆的應(yīng)用中作用效果好， 且應(yīng)用廣泛，可推廣，用蛭弧菌來促進大菱鲆生長是一種有發(fā)展前景的養(yǎng)殖新方法。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于 此。具體實施地點為山東省某育苗場，實施時間為8個月。試驗地海域的水質(zhì)條件 符合中華人民共和國國家標準漁業(yè)水質(zhì)標準(GB11607-89)和農(nóng)業(yè)部《無公害食品海水養(yǎng) 殖用水水質(zhì)》(NY5052-2001)要求。大菱鲆的養(yǎng)殖池建在養(yǎng)殖大棚內(nèi)，每個水池面積為 40m2，水深1.2米，池底呈凹型，有利于排水吸污等操作，也可用平底的。水池上方蓋 上遮光度為95%的遮光布，避免光照過強。光照強度一般控制在150 2001ux。挑選體質(zhì)健康、個體大小均勻的大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚，平均體 重為28士2.5g，平均體長為11 士0.55cm，采用隨機區(qū)組試驗設(shè)計，按照300尾/m2的養(yǎng)殖 密度投入池中。平均分為A-D 4個試驗組，B、C、D每個試驗組有8個小組，分別為 Bl、CI、D1 ； B2、C2、D2 ； 、B3、C3、D3 ； B4、C4、D4 ； B5、C5、D5 ； B6、 C6、 D6 ； B7、 C7、 D7 ； B8、 C8、 B8 ； B1—D8 每小組再分為 4 組，艮P B1—1 B1—4... D8-1 D8-4，每組2個重復(fù)。試驗的處理如下A組正常流水，投喂顆粒飼料(工廠生產(chǎn)的養(yǎng)殖方式)；B組在水中潑灑蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液，使水體中蛭弧菌混合菌 液濃度分別達到10、103、105、107pfu/mL,投放顆粒飼料；C組投喂?jié)舛葹?0、103、105、107pfo/mL的蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液浸泡后的顆粒飼料； D組在水中加入蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液，使菌體濃度分別達到 10、103、105、107pfti/mL,同時分別投喂?jié)舛葹?0、103、105、107pfti/mL的蛭弧菌游泳
體和蛭質(zhì)體的混合菌液浸泡后的顆粒飼料；B1、CUD1組每5天換(全池)水一-次，換水后重新加菌；
B2、C2、D2組每10天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B3、C3、D3組每15天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B4、C4、D4組每20天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B5、C5、D5組每25天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B6、C6、D6組每30天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B7、C7、D7組每35天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B8、C8、D8組每40天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
Bl-1、C1-1、D1-1-D8-1投放的菌液濃度為10pfo/mL ；Bl-2、C1-2、D1-2…D8-2 投放的菌液濃度為 103pfu/mL ；Bl-3、C1-3、D1-3…D8-3 投放的菌液濃度為 105pfu/mL ；Bl-4、C1-4、D1-4...D8-4 投放的菌液濃度為 107pfu/mL ；所用顆粒符合中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《無公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規(guī)定。試驗期間，日投餌量與魚體重的質(zhì)量分數(shù)為3_5%，每日投 喂三次(7:00，12:00, 17:00),每次投喂過程持續(xù)30min。試驗結(jié)束測量魚的生長指標、 免疫指標及水質(zhì)情況。(1)、魚體生長指標的測定方法如下每組隨機抽取40尾魚檢測生長情況，魚體長度測定采用精度為1mm的游標卡尺 度量，體長為魚的吻端到脊椎骨最下端之間的距離。體重采用電子天平稱量。試驗生長 指標按如下公式計算成活率(％) = Nt/NoX100% ；增重率(％) = (WrWo)WoX100% ；體長增長率(%) = (Lt-Lo)/LoX100% ；
肥滿度=W/L,或 Wt/Le ；式中N。為試驗開始時魚體總尾數(shù)；Nt為試驗結(jié)束時魚體總尾數(shù)；W。為試驗開 始時魚體重；Wt為試驗結(jié)束時魚體重；L。為試驗開始時魚體長；Lt為試驗結(jié)束時魚體 長；試驗測得的大菱鲆各項生長指標見表一 表四從表中可以看出，A組成活 率、增重率、體長增長率、肥滿度分別為81.22%、1800%, 55.68%, 22.27，與A組相 比，B、C、D組的成活率、增重率、體長增長率、肥滿度都有明顯的提高。說明在常 規(guī)的養(yǎng)殖方式下，不換水會影響大菱鲆的成活率、增重率、體長增長率、肥滿度。在相 同的換水周期下，隨著蛭弧菌濃度的升高，成活率、增重率、體長增長率、肥滿度都在 逐漸升高，且都明顯高于A組。B1-1 B8-1…D1-4 D8-4之間的成活率、增重率、 體長增長率、肥滿度無明顯差異。說明在水中或者是在飼料中添加濃度為10 107pfu/ mL蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液，5-40天不換水，均對成活率、增重率、體長增長率、肥滿度影響不大，均可促進生長。因此，無論在水中還是飼料中添加濃度為10 107pfo/mL蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì) 體的混合菌液，5-40天換水一次，均可促進大菱鲆的快速生長，且D組效果最好。表一大菱鲆生長指標的檢測
組別檢測項成活率(%)增重率(％) 肥滿度體長增長率(%)A81.22180022.2755.68B1-196.00230029.9278.68B2-196.90229529.9178.67B3-196.90228529.9178.61B4-196.90228029.8978.58B5-196.80228329.8778.55B6-196.60228129.9078.53B7-196.90227829.9278.51B8-196.80227529.9078.04C1-197.00238030.7380.43C2-197.80237130.7280.41C3-197.70237030.7080.39C4-197.70236530.6880.37C5-197.50236030.6980.35C6-197.60235730.6780.32C7-197.90235530.7180.33C8-197.80235330.6780.30D1-1100249832.8985.67D2-1100249632.8685.58D3-1100249232.8885.34D4-1100249032.8785.2權(quán)利要求
1.一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)取海域無污染的海水作為養(yǎng)殖用水；養(yǎng)殖用水經(jīng)砂濾、沉淀后，注入養(yǎng)殖池； 在養(yǎng)殖池上方蓋遮光布，控制光照強度為150 2001UX ；(2)在養(yǎng)殖池中加入蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體菌液，并加大曝氣量，攪拌均 勻，使池水中的蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體的濃度達10 107pfu/mL ；(3)向養(yǎng)殖池中投放魚苗；(4)養(yǎng)殖期間正常曝氣，控制水溫在15 30°C，日投餌量為魚體重的質(zhì)量百分數(shù) 3 5%，餌料在投入前，用用濃度為10 107pfu/mL的蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合 體菌液浸泡15 30min ；每隔5 40天換掉池水一次，每次換水后加入蛭弧菌游泳體和 蛭質(zhì)體的混合體菌液，使池水中的蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體濃度達到10 107pfo/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(1)所 述養(yǎng)殖池的池底為凹型或平底，養(yǎng)殖池在注入養(yǎng)殖用水之前清洗消毒干凈；所述遮光布 的遮光率為95%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟⑵和 (4)所述加入蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合體菌液的方法為用養(yǎng)殖池中的池水稀釋菌 液后，均勻潑灑全池。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(2)所 述加大曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的曝氣量為70 80L/ h/m3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(3) 所述投放魚苗在水溫15 30°C時按照以下標準魚苗重量為25 50g時，投放密度為 300 400尾/m2 ；魚苗重量為70 IOOg時，投放密度為200 300尾/m2 ；魚苗重量 為100 200g時，投放密度為100 150尾/m2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(4)所 述餌料為顆粒餌料；所述餌料在早上、中午和晚上各投放一次，每次投餌間隔5 6小 時，投餌方式為灑遍全池。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟⑵和 (4)所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏 于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO M 209172。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(2) 和(4)所述混合體菌液為蛭弧菌游泳體菌液和蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按細菌個數(shù)1 1混合而 成。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于所述蛭弧 菌蛭質(zhì)體菌液按照以下方法制備得到接種嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)于營養(yǎng) 肉湯液體培養(yǎng)基中，^ 30°C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經(jīng)5000 8000rpm離心10 20η ι后， 沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng) 6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清液，沉淀用DNB液體 培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2mol/LpH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到將蛭弧菌蛭質(zhì)體制備方法中的含蛭 弧菌游泳體的上清經(jīng)16000 18000rpm離心15 20η ι后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、 水、生理鹽水或0.2mOl/LpH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到蛭弧菌游泳體菌液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑養(yǎng)殖方法，其特征在于所述DNB 液體培養(yǎng)基是將營養(yǎng)肉湯0.牝、酪蛋白酸水解物0. 和酵母精提物O.lg溶于IOOOmL蒸 餾水中，調(diào)節(jié)pH值至7.2 7.6。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種節(jié)能減排的大菱鲆養(yǎng)殖方法。該方法包括養(yǎng)殖水源選擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，按照養(yǎng)殖水體生態(tài)學(xué)原理，海洋生物的生長環(huán)境要求，生物之間的相互關(guān)系及無公害養(yǎng)殖標準，采用生物生態(tài)學(xué)的方法控制養(yǎng)殖環(huán)境。關(guān)鍵技術(shù)是在水體中添加蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體混合菌液，同時飼料也用蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體混合菌液浸泡，養(yǎng)殖期間可達到40天換掉池水一次。本發(fā)明為生物養(yǎng)殖方法，綠色、安全、無污染，效果顯著，能夠改善水質(zhì)，促進大菱鲆生長，提高免疫力，并提高成活率，有極好的發(fā)展前景。對提高經(jīng)濟效益和食用安全性，保障人類健康具有十分重要的意義。
文檔編號A23K1/18GK102017910SQ20101027102
公開日2011年4月20日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者何偉杰, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學(xué)