專利名稱：五味子組織培養(yǎng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于用組織培養(yǎng)方法繁育五味子苗木技術(shù)。
背景技術(shù)：
五味子[Schisandra chinensis (Turcz)Baill]是主產(chǎn)于我國東北的常用名貴中 藥材。由于野生資源逐年減少而社會需求逐年增加，五味子種植業(yè)悄然興起?？煽康姆敝?方法是許多種植物得以推廣的先決條件。植物的繁殖方法可分為兩大類，即有性繁殖和無性繁殖。有性繁殖的后代具有雙 親的遺傳特性，有較強的生命力與變異性；無性繁殖因能穩(wěn)定地保持原品種的特性和特征， 一致性強，對果實類木本藥用植物而言是培育生產(chǎn)用苗的主要方法。國內(nèi)一些科技工作者做了大量工作，如周鑫五味子組織培養(yǎng)，中國林副特產(chǎn)，第 6 7頁，2001年第4期；朱俊義北五味子愈傷的誘導，東北林業(yè)大學學報，第34卷第6期， 2006年11月；陳雅君藥用植物北五味子的組織培養(yǎng)，植物研究，第318 322頁，第19卷 第3期，1999年7月，均對五味子組織培養(yǎng)誘導增生培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基進行了研究并取得 了成果。但仍然適應不了規(guī)模化繁育良種苗木的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種五味子組織培養(yǎng)的方法， 以滿足五味子良種苗木快速繁育的需要。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種五味子組織培養(yǎng)的方法，由外植體采集，外植體滅菌， 切段與接種，培養(yǎng)基的滅菌，初代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移入苗圃程序組成，其特征是 以 1/2B5 為基本培養(yǎng)基，以 1/2B5+BA0. 1 0. 6mg/L+NAA0. 01 0. 06mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊 脂7g/L為誘導、增生培養(yǎng)基，用于初代和繼代培養(yǎng)；生根培養(yǎng)于瓶內(nèi)或瓶外進行。瓶內(nèi)生根 時，以WPM為基本培養(yǎng)基，以WPM+NAAO. 2mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂9g/L為生根培養(yǎng)基；瓶外 生根時，以珍珠巖和草炭為基質(zhì)，上層為珍珠巖3 4厘米厚，下層為草炭5厘米厚；瓶外生 根，幼苗基部用300 500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基質(zhì)中，溫度控制在26 28°C，瓶外 生根時間25 45天。本發(fā)明經(jīng)過40多種培養(yǎng)基試驗，確定1/2B5為基本培養(yǎng)基，1/2B5+BA0. 1-0. 6mg/ L+NAAO. 01-0. 06mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L為誘導、增生培養(yǎng)基，與同類研究相比研究相 比，接種后側(cè)芽萌發(fā)時間縮短5 10天，誘導率提高10%，增值系數(shù)提高1. 9 2. 5倍，幼 苗生長時間縮短了 5 10天，大大提高了繁殖效率；在組培幼苗生根研究中，確定WPM為基 本培養(yǎng)基，提出WPM+NAAO. 2mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂9g/L為最佳生根培養(yǎng)基，幼苗生根率達 到96.4%，與前人研究結(jié)果相比，生根率提高6.4% ；首次以珍珠巖和草炭為基質(zhì)(上層為 珍珠巖3-4厘米厚，下層為草炭5厘米厚)進行了瓶外生根試驗，幼苗基部用300-500mg/L 吲哚丁酸浸沾后扦插到基質(zhì)中，溫度控制在26-28度，瓶外生根時間25-45天，生根率達到 94. 2%。
為使五味子大面積栽培健康發(fā)展，滿足生產(chǎn)對良種苗木的大量需求，經(jīng)過試驗培 養(yǎng)篩選出適宜的誘導、增生和生根培養(yǎng)基，為實現(xiàn)五味子試管苗工廠化生產(chǎn)奠定了好基礎。 新選育的單株或新引進的良種，利用試管繁殖，可在短期內(nèi)提供大量的無性系苗木，以滿足 生產(chǎn)上的需要。利用此項技術(shù)用1個五味子芽1年內(nèi)可繁殖40萬株苗，由此可見其應用前 景十分廣闊。本研究目的在于探索五味子離體快繁的有效途徑，以便建立快速高效的五味 子離體快繁技術(shù)體系。
具體實施例方式一種五味子組織培養(yǎng)的方法，有外植體采集選晴天上午9:00-11:00，從健康植 株上部剪取腋芽發(fā)育良好的一年生帶芽枝條，剪去葉片，留1厘米長葉柄，將枝條剪成5厘 米長的帶芽莖段，放入墊有濕布的容器中備用；外植體滅菌將剪好的外植體放入容器中， 用洗潔精漂洗15分鐘，注意不要損傷腋芽，沖洗干凈，放入容器中用自來水沖洗6-8小時， 取出放入4 °C冰箱備用，接種時先用75%酒精浸泡1分鐘，無菌水沖洗5次，再用0. 3%氯 化汞(升汞)浸泡5分鐘，浸泡過程搖晃使外植體上氣泡溢出，與消毒液充分接觸，最后用 無菌水徹底沖洗干凈，放入無菌容器備用；切段與接種經(jīng)外植體滅菌后，切成長度約1.5 厘左右的小段，腋芽居中，留0. 7厘米長葉柄，每段至少有1個芽，置于無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用無 菌濾紙吸去表面水分，移到超凈工作臺(市場購進)上無菌容器中，按無菌操作要求接種 于培基上，每個100毫升三角瓶內(nèi)放置4 5段；培養(yǎng)基的滅菌對裝入三角瓶的培養(yǎng)基， 用0. IMPa熱壓滅菌20分鐘；培養(yǎng)條件將接種后的三角瓶置于溫度25 28°C、光照強度 2000勒克斯的培養(yǎng)室，光照時間每天為12小時；初代培養(yǎng)接種后20天左右，葉腋處有腋 芽萌發(fā)，待芽長至1厘米左右時把芽從莖段上切下，接種于繼代培養(yǎng)基中，當新芽長至4 5 厘米時，進行繼代培養(yǎng)；繼代培養(yǎng)把初代培養(yǎng)產(chǎn)生的芽苗切成帶腋芽莖段，根據(jù)腋芽發(fā)育 情況接入相應培養(yǎng)基進行繼代擴增培養(yǎng)；生根培養(yǎng)當苗高2 2. 5厘米時，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng) 基，待苗基部長出數(shù)條粗壯短根時，逐漸開瓶鍛煉3天，然后移入營養(yǎng)缽中，濕度保持90% ； 移入苗圃幼苗長到6厘米以上時，帶土坨移入苗圃，移入苗圃應在當?shù)亟K霜期過后進行， 其特征是本發(fā)明以IAB5為基本培養(yǎng)基，1/2B5+BA0. 1 0. 6mg/L+NAA0. 01 0. 06mg/L+蔗 糖30g/L+瓊脂7g/L為誘導、增生培養(yǎng)基，用于初代和繼代培養(yǎng)；組培幼苗生根，采用瓶內(nèi) 或瓶外生根培養(yǎng)，瓶內(nèi)生根，確定WPM為基本培養(yǎng)基，以WPM+NAAO. 2mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂 9g/L為生根培養(yǎng)基；瓶外生根培養(yǎng)時，本發(fā)明首次以珍珠巖和草炭為基質(zhì)，上層為珍珠巖 3 4厘米厚，下層為草炭5厘米厚；進行了瓶外生根試驗，幼苗基部用300 500mg/L吲 哚丁酸浸沾后扦插到基質(zhì)中，溫度控制在26 28°C，瓶外生根時間25 45天，生根率達到 942%。通過表1、2、3、4中的數(shù)據(jù)的比較，進一步表明本發(fā)明具有突出的實質(zhì)性特點和顯 著的進步、積極的效果。表1用于比較的誘導增生培養(yǎng)基種類 表2誘導增生培養(yǎng)使用效果的比較 表3用于比較的生根培養(yǎng)基種類 表4生根培養(yǎng)基使用效果的比較 隨著五味子基地建設規(guī)模的不斷擴大，良種匱乏、繁殖技術(shù)短缺，嚴重制約產(chǎn)業(yè)化 基地建設的水平。本發(fā)明對推進五味子科技產(chǎn)業(yè)化基地建設健康發(fā)展具有十分重要的現(xiàn)實 和長遠意義。
權(quán)利要求
一種五味子組織培養(yǎng)的方法，由外植體采集，外植體滅菌，切段與接種，培養(yǎng)基的滅菌，初代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移入苗圃程序組成，其特征是以1/2B5為基本培養(yǎng)基，以1/2B5+BA0.1～0.6mg/L+NAA0.01～0.06mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L為誘導、增生培養(yǎng)基，用于初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)；生根培養(yǎng)于瓶內(nèi)或瓶外進行，瓶內(nèi)生根時，以WPM為基本培養(yǎng)基，以WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂9g/L為生根培養(yǎng)基；瓶外以珍珠巖和草炭為基質(zhì)，上層為珍珠巖3～4厘米厚，下層為草炭5厘米厚；瓶外生根，幼苗基部用300～500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基質(zhì)中，溫度控制在26～28℃，瓶外生根時間25～45天。
全文摘要
五味子組織培養(yǎng)的方法，由外植體采集及滅菌，切段與接種，培養(yǎng)基的滅菌，初代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移入苗圃程序組成，其特征是1/2B5為基本培養(yǎng)基，1/2B5+BA0.1～0.6mg/L+NAA0.01～0.06mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L為誘導、增生培養(yǎng)基；采用瓶內(nèi)或外生根培養(yǎng)，瓶內(nèi)生根時，以WPM為基本培養(yǎng)基，以WPM+NAA0.2mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂9g/L為生根培養(yǎng)基；瓶外生根時，以珍珠巖和草炭為基質(zhì)，上層珍珠巖3～4厘米厚，下層草炭5厘米厚，幼苗基部用300～500mg/L吲哚丁酸浸沾后扦插到基質(zhì)中，溫度控制在26～28℃，瓶外生根25～45天。
文檔編號A01H4/00GK101878737SQ20101022933
公開日2010年11月10日 申請日期2010年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月14日
發(fā)明者杜麗華 申請人:長春百瑞藍莓科技發(fā)展有限公司