專利名稱：一種植物提取物作為畜禽添加劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，具體為一種對畜禽(特別是
雞)具有誘食作用的天然植物提取物飼料添加劑，對熱應(yīng)激厭食也具有明顯的緩解作用。
背景技術(shù)：
畜禽(包括雞)通過采食飼料，將飼料中營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為人們所需的肉、蛋和奶等畜產(chǎn)品，畜禽采食飼料量對生產(chǎn)性能的發(fā)揮至關(guān)重要。在過去相當(dāng)長時間內(nèi)，對畜禽營養(yǎng)與飼養(yǎng)技術(shù)的研究與應(yīng)用大多集中在提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用效率上，取得了顯著的效果和效益，但是，畜禽對營養(yǎng)物的進(jìn)一步利用已經(jīng)出現(xiàn)生理性限制，通過提高飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用效率來改善畜禽的生產(chǎn)性能已經(jīng)出現(xiàn)了技術(shù)瓶頸。同時，飼養(yǎng)密度、環(huán)境溫度和疾病等應(yīng)激
可使畜禽產(chǎn)生厭食反應(yīng)，導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降甚至喪失，降低了生產(chǎn)效益。 在改善飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用效率的同時，提高飼料的采食量可以有效地突破現(xiàn)有技術(shù)瓶頸，達(dá)到增產(chǎn)增效的目的。盡管在飼料行業(yè)已有添加劑中，有不少具有一定誘食作用，但大多數(shù)其誘食功能是附屬的，且效果不穩(wěn)定，目前還沒有專用的畜禽誘食性飼料添加劑。本發(fā)明在研究雞采食調(diào)控技術(shù)的基礎(chǔ)上，研制了對雞具有誘食作用的專用飼料添加劑，能有效提高雞的生產(chǎn)性能，實現(xiàn)增產(chǎn)增效。本發(fā)明添加劑來自于天然植物提取物，因而安全綠色。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠提高正常飼養(yǎng)采食量，而且能緩解熱
應(yīng)激的厭食反應(yīng)，提高畜禽的生產(chǎn)性能的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用。 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是該植物提取物作為飼料添加劑的
應(yīng)用，植物提取物用來制作對雞具有誘食作用的飼料添加劑，所述的植物提取物是從一枝
黃花(Solidago decurrens Lour)、溫郁金禾口多香果(Pimenta officinalis)中提取。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的植物提取物為倍半萜烯類化合物。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的倍半萜烯類化合物為欖香烯。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的飼料添加劑利用脫脂米糠作為載體充分吸附，逐級稀釋后直接添加到飼料中。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的飼料添加劑的使用量為肉雞飼料中的添加范圍為50-250卯m/噸，蛋雞飼料中的添加范圍為100-350卯m/噸。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的飼料添加劑與氨基酸、維生素和微量元素復(fù)配成添加劑使用。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的植物提取物經(jīng)過乳化處理，乳化處理的步驟為將天然植物提取物先與12mg/ml的大豆卵磷脂等比例混合，然后通過超聲波儀乳化3-5分鐘，最后，與0.9%鹽水溶液1 : l混合，得到乳化液。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的飲水的時間為與上午第一次喂料同步。
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作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的乳化好的飼料添加劑的使用方法為乳化好的飼料添加
劑與清涼干凈的水按照i : 50-ioo配比，用噴霧器直接對雞進(jìn)行噴霧。 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的噴霧量為每羽雞0. 5-10毫升。
本發(fā)明同已有的技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和特點 1.本發(fā)明通過促進(jìn)畜禽下丘腦內(nèi)參與誘食調(diào)控基因的表達(dá)獲得顯著的誘食效 果； 2.本發(fā)明從天然植物一枝黃花、溫郁金和多香果中提取，綠色安全； 3.本發(fā)明與維生素、氨基酸和礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，以及抗生素等不存在配伍問
題； 4.本發(fā)明除了具有顯著誘食作用外，還具有利尿、抗炎、抗氧化和增強免疫力等作 用，可增強畜禽的抗病能力； 5.以加拿大一枝黃花為代表的外來植物在我國長江以南地區(qū)大量逸生，已經(jīng)威脅 到生態(tài)系統(tǒng)的生物多樣性和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全，本發(fā)明可大量利用一枝黃花等外來植物，變廢 為寶，減輕生態(tài)危害。 本發(fā)明的技術(shù)方案，能夠大幅度提高畜禽的采食量，增加飼料的利用率，顯著提高 生產(chǎn)性能和效益。而且對熱應(yīng)激雞厭食也有顯著作用。


圖1為天然植物提取物添加劑主要功能物質(zhì)S -(A)和|3 -(B)欖香烯的化學(xué)結(jié)構(gòu) 式； 圖2為天然植物提取物添加劑制作工藝流程圖；
圖3側(cè)腦室(ICV)微注射示意圖；
圖4采食調(diào)控中樞下丘腦部位示意圖； 圖5為天然植物提取物ICV微注射對雞采食量(A)和下丘腦內(nèi)NPY及其Yl和Y5 受體基因mRNA水平的影響的柱狀圖； 圖6為在飼料中添加本發(fā)明添加劑對雞采食量、生產(chǎn)性能和效益的影響的柱狀 圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以下實施例是對本發(fā)明的解釋而
本發(fā)明并不局限于以下實施例。 以下對本發(fā)明方案進(jìn)行更為詳細(xì)的說明。 本發(fā)明的天然植物提取物飼料添加劑從一枝黃花中用水蒸汽法提取，其主要功能 物質(zhì)為欖香烯等倍半萜烯類化合物，包括S-和P-欖香烯等；S-和P-欖香烯為同分異 構(gòu)體(圖1)，分子式為(:151124，相對分子量為204。經(jīng)GC/MS聯(lián)用法分析，一枝黃花揮發(fā)油含 有欖香烯28.64%，其中S-欖香烯(21.72% )， P -欖香烯(6.92% )。
l制作工藝 本發(fā)明飼料添加劑的制作工藝見圖2。具體天然植物提取物與脫脂米糠按照 1 : 4(重量比)混合，讓脫脂米糠充分吸附，不使用霉變、氧化的脫脂米糠作載體，質(zhì)量必須符合國家對飼料原料質(zhì)量要求?；旌衔镌?(TC左右的烘箱中干燥5小時左右，冷卻后粉碎，30目過篩，分裝后密封，避光保存。上述工藝制作的添加劑含天然植物提取物的濃度為20%，如果需要較高濃度的添加劑，可以通過調(diào)整與麩皮載體的比例，或者重復(fù)吸附與干燥過程得到。 乳化處理液體狀天然植物提取物原液先與12mg/ml的大豆卵磷脂(Sigma公司)等比例混合，通過超聲波儀(XL2000，美國Microson公司)在70W乳化3_5分鐘，然后與0.9%鹽水溶液1 : l混合保存。
2使用方法
2. 1飼料中添加 根據(jù)雞不同飼養(yǎng)階段和飼養(yǎng)季節(jié)添加不同的量，一般而言，飼養(yǎng)后期的添加量大于前期，高溫的添加量大于低溫。肉雞飼料中的添加范圍為50-250ppm/噸，蛋雞為100-350卯m/噸。可通過逐級稀釋直接添加到飼料中，也可與氨基酸、維生素和微量元素等復(fù)配添加劑使用。
2. 2飲水 —年四季使用均有效果。具體方法經(jīng)乳化處理的液體狀天然植物提取物原液與
干凈的飲用水按照l : 20-50配比，直接讓雞飲水，飲水的最好時間是與上午第一次喂料同
止少。 2. 3噴霧 夏季高溫干燥時，采用噴霧方式具有較好效果。具體方法經(jīng)乳化處理的液體狀天
然植物提取物原液與清涼干凈的水按照i : 50-ioo配比，可用噴霧器直接對雞進(jìn)行噴霧，
噴霧量為每羽雞0. 5-10毫升，噴霧時間最好在溫度最高時。
3保存方法 在避光、干燥處，夏季的保存時間為15-20天，春秋季為30-40天，冬季為2個月。
在夏季，如要延長保存時間，可置于冷庫或添加適量飼用抗氧化劑，冷藏或使用200卯m EMQ
等抗氧化劑，可延長保存20-30天，冷凍則可延長4-6個月。 效果試驗通過下面試驗對本發(fā)明的使用效果進(jìn)行論證和描述。 1側(cè)腦室(ICV)微注射試驗 1. 1試驗動物 5日齡健康哈巴德肉雞32羽，平均分成2組， 一組為對照組，另一組為ICV微注射試驗組。對照組和試驗組均飼喂相同的飼料，配方為玉米60% ，豆粕35% ，添加劑5% ，營養(yǎng)水平為ME :11. 58MJ/kg， CP :20. 15%。自由飲水和采食。
1. 2乳化處理 液體狀天然植物提取物原液先乳化后，與0. 9% Ringer溶液(147mM NaCl，4mMKCl，3mM CaCl2)混合。ICV微注射前1小時，與0. 2%的伊文思藍(lán)溶液混勻。
1.3ICV微注射 用手固定雞頭，按照圖3示意的方法，用25iU注射器吸取10 iU經(jīng)預(yù)處理過的添加劑混合物，緩緩注入雞側(cè)腦室(時間為20秒左右)。對照組注射等容量的大豆卵磷脂、Ringer溶液和伊文思藍(lán)溶液混合物，試驗組每羽雞注射的10 yl經(jīng)預(yù)處理過的添加劑混合物中，實際含有原液量為10-2 iU。圖3為雞腦縱切面圖，注射部位為雞未閉合的腦門處(A8. 0)，深度約為0.5厘米。
1.4測定指標(biāo) 對照組和試驗組各一本試驗雞用于測定采食量，分別測定注射后30、60、90、120 分鐘每羽雞采食量；另一半用于測定大腦采食調(diào)控中心(下丘腦)內(nèi)參與誘食調(diào)節(jié)的NPY 及其Yl和Y5受體基因的mRNA水平。
1. 5mRNA水平測定
1.5. 1總RNA提取 下丘腦組織的摘取根據(jù)本發(fā)明人建立的方法，注射后60分鐘，將雞處死取腦，并 迅速在粉末狀干冰凍結(jié)中，將冷凍的雞腦用干冰直立固定在載玻片上，用手術(shù)刀片從嗅球 部分開始，沿中線切除腦組織直到包含前交叉的橫截面消失。參照K皿zel描繪的雞腦斷 面圖，以視交叉、第三腦室和側(cè)前腦束作為確定雞下丘腦的標(biāo)記，用手術(shù)刀摘取下丘腦(圖 4)。圖4中，陰影部分為下丘腦，摘取的下丘腦大小為2毫米(長)X1.5毫米(寬)X1.5 毫米(深)。 下丘腦組織總RNA提取參考RNeasy Lipid Tissue Mini Kit試劑盒說明書。將 摘出的下丘腦核團(tuán)組織迅速放入QLAzol Lysis Reagent中，勻漿30秒后，加200 氯仿 并劇烈震蕩15秒，4°C 12000rpm離心15min，吸取上清與600 y 1 70%的乙醇溶液混合后過 柱，加80 ii lRNase-free water分2次將結(jié)合在柱上的總RNA沖洗下來。分離得到的總RNA 測定其0D260/280, _701:保存?zhèn)溆谩?
1. 5. 2RT-PCR 下丘腦基因mRNA水平用本發(fā)明人建立的RT-PCR方法測定。本發(fā)明人設(shè)計的 T叫Man探針和引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。探針和引物序列如下 NPY基因上游引物5 ， -CTACTCGGCTCTGAGGCACTACA-3' 下游引物5' -TCAGTGTCTCTGGGCTTGATCTC-3' 探針5 ， -FAM-CAACCTCATCACCAGGCAGAGATATGGAA-TAMRA-3' Yl基因上游引物5， -GAGAAGAACTCGCAGATCTTGCA-3' 下游引物5' -CCAGAGACTCCCAGAATTATCACA-3' 探針5， -FAM-TGCCTTTGGCCATGGTCTTCACCTT-TAMRA-3' Y5基因上游引物5 ， -TGGCCTTTTCTGACATCTTAGTTG-3 ， 下游引物5' -CATCCACCGATCAAGGAGTACAG-3' 探針5， -FAM-CCTATTTTGTTCTCCTTTCACGC-TAMRA-3， 18srRNA(看家基因)上游引物5' -CTCCGACTTTCGTTCTTGATTAATG-3' 下游引物5' -ATTGTGCCGCTAGAGGTGAAAT-3' 探針5， -FAM-CTTTAGTTCGTCTTGCGCCGGTCCA-TAMRA-3' RT-PCR反應(yīng)體系(40 ii 1)組成5 ii 1 RNA模板(NPY、 Yl禾P Y5含50ng， 18s
rRNA含lng)、20iU 2XMaster mix w/o UNG、10iU 40XMultiScrible and Rnase Inhibitor、200nmTaqMan probe(5u M)、300nM Forward primer(100u M)、900nM Reverse primer (100 ii M)。反應(yīng)程序為:48 °C反轉(zhuǎn)錄30min ;95。C預(yù)變性lOmin ;95。C變性15sec ; 60。C退火/延伸lmin ;共45個循環(huán)。
1. 4結(jié)果分析
ICV微注射經(jīng)乳化處理的本發(fā)明添加劑原液混合物，顯著提高注射60分鐘以后雞的采食量(圖5A)，注射后60、90和120分鐘采食量提高幅度分別為31. 13%、44. 74%和48. 25%，其中90和120分鐘采食量與對照組比有顯著統(tǒng)計差異。但是注射后30分鐘的采食量沒有影響。本發(fā)明添加劑原液混合物顯著抬高了下丘腦內(nèi)具有誘食調(diào)節(jié)功能的NPY及其Yl和Y5受體基因的mRNA水平(圖5B)。結(jié)果表明，本發(fā)明添加劑原液對雞具有顯著的誘食作用，其誘食作用的機理是通過促進(jìn)采食調(diào)節(jié)中樞(下丘腦)內(nèi)參與誘食調(diào)節(jié)的NPY系統(tǒng)功能實現(xiàn)的。圖5中，* :表示試驗組和對照組比較，有顯著的統(tǒng)計差異，P < 0. 05。
2飼喂試驗
2. 1試驗動物 119羽14日齡AA肉雞，稱重后分成2組，即對照組(32 $ ， 28早)和試驗組(32古，27早)，對照公母雞平均體重分別為247. 2 ±7. 5克和247. 8 ±5. 6克，試驗組為251. 9 ±6. 6克和241. 9±5. 9克，對照組和試驗組對應(yīng)的公母雞間體重沒有統(tǒng)計差異。公母分群飼養(yǎng)，自由飲水和采食。試驗從14日齡開始至49日齡結(jié)束。
2. 2試驗飼料 試驗的基礎(chǔ)飼料配方為中期料(14-41日齡投喂；營養(yǎng)水平為ME :11. 76MJ/kg，CP :18.33% ):玉米65%，豆粕30%，添加劑5% ;后期料(42日齡以后投喂；營養(yǎng)水平為ME :11. 93MJ/kg， CP :16.51%):玉米70 % ，豆粕25% ，添加劑5 % 。對照組飼喂基礎(chǔ)飼料，試驗組在5%常規(guī)添加劑中增加100ppm/噸飼料的本發(fā)明添加劑。
2. 3測定指標(biāo) 每天稱重飼料投喂量和剩余量，記錄死亡雞情況，測定49日齡試驗?zāi)╇u體重。
2.4結(jié)果分析 添加本發(fā)明添加劑，試驗公母雞平均采食量為2. 78千克，比對照組增加19. 31 %，死亡率為6. 78% (59羽試驗雞中死亡4羽)，比對照組下降49. 14% (圖6A);試驗公母雞49日齡平均體重達(dá)到2. 24千克和1. 89千克，分別比對照組提高11. 28%和9. 62%，具有顯著的統(tǒng)計差異(圖6B);按照中期雞和后期飼料價格分別為2. 59元/千克和2. 51元/千克，活雞價格按8. 6元/千克計算(2009年6-7月份浙江寧波地區(qū)飼料原料價格和活雞核算)，試驗組每羽雞平均利潤為1. 38元，比對照組的0. 46元增效2倍(圖6C) 。 * :表示試驗組公母雞分別和對照組比較，有顯著的統(tǒng)計差異，P < 0. 05。取得了顯著的飼養(yǎng)效果和經(jīng)濟效益。 此外，需要說明的是，本說明書中所描述的具體實施例，其配方、工藝所取名稱等可以不同。凡依本發(fā)明專利構(gòu)思所述的構(gòu)造、特征及原理所做的等效或簡單變化，均包括于本發(fā)明專利的保護(hù)范圍內(nèi)。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替代，只要不偏離本發(fā)明的結(jié)構(gòu)或者超越本權(quán)利要求書所定義的范圍，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 雖本發(fā)明已以實施例公開如上，但并非用以限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，任何熟悉該項技術(shù)的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的構(gòu)思和范圍內(nèi)所作的更動與潤飾，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，植物提取物用來制作對雞具有誘食作用的飼料添加劑，所述的植物提取物是從一枝黃花(Solidago decurrens Lour)、溫郁金和多香果(Pimenta officinalis)中提取。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的植物 提取物為倍半萜烯類化合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的倍半 萜烯類化合物為欖香烯。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的飼料添加劑利用脫脂米糠作為載體充分吸附，逐級稀釋 后直接添加到飼料中。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的 飼料添加劑的使用量為肉雞飼料中的添加范圍為50-250ppm/噸，蛋雞飼料中的添加范圍 為100-350ppm/噸。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的 飼料添加劑與氨基酸、維生素和微量元素復(fù)配成添加劑使用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的 植物提取物經(jīng)過乳化處理，乳化處理的步驟為將天然植物提取物先與12mg/ml的大豆卵 磷脂等比例混合，然后通過超聲波儀乳化3-5分鐘，最后，與0.9%鹽水溶液1 : l混合，得 到乳化液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的乳化 好的飼料添加劑的使用方法為乳化好的飼料添加劑與干凈的飲用水按照l : 20-50配比， 直接讓雞飲水，所述的飲水的時間為與上午第一次喂料同步。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的乳化 好的飼料添加劑的使用方法為乳化好的飼料添加劑與清涼干凈的水按照1 : 50-100配 比，用噴霧器直接對雞進(jìn)行噴霧。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，其特征是所述的噴霧量為每羽雞O. 5-10毫升。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，具體為一種對畜禽(特別是雞)具有誘食作用的天然植物提取物飼料添加劑，對熱應(yīng)激厭食也具有明顯的緩解作用。該植物提取物作為飼料添加劑的應(yīng)用，植物提取物用來制作對雞具有誘食作用的飼料添加劑，所述的植物提取物是從一枝黃花(Solidago decurrens Lour)、溫郁金和多香果(Pimenta officinalis)中提取。
文檔編號A23K1/14GK101779732SQ20101012721
公開日2010年7月21日 申請日期2010年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月18日
發(fā)明者周衛(wèi)東 申請人:周衛(wèi)東