專利名稱：：一種改善蛋雞免疫力的植物性飼料添加劑制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及動物科學，具體說就是一種改善蛋雞免疫力的植物性飼料添加劑制備方法。(二)
背景技術：
：中草藥作為飼料添加劑使用，在我國已有幾千年的悠久歷史，如我國最早的藥書《神農(nóng)草木經(jīng)》就有"桐葉飼豬，肥大三倍，且易養(yǎng)"的記載。中草藥飼料添加劑依據(jù)我國中醫(yī)中藥理論，科學組方配伍，不僅具有扶正祛邪、健脾開胃、抗菌促生長、增強動物免疫機能、改善動物產(chǎn)品品質(zhì)等效果，而且來源廣泛、無毒副作用、無殘留、無抗藥性，引起了國內(nèi)外學者的廣泛興趣，祖國這一寶貴遺產(chǎn)因而得以不斷發(fā)掘?！吨袊暳瞎I(yè)19962020年發(fā)展戰(zhàn)略》中提出"應該繼續(xù)努力發(fā)掘我國中草藥方面的遺產(chǎn)，特別是當今世界'回歸'自然聲浪日高的情況下，用中草藥替代化學合成物、抗生素類添加劑有著廣闊的前景"。因此，全面啟動天然中草藥添加劑的現(xiàn)代化研究和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)，替代傳統(tǒng)的抗生素添加劑，對于提高我國畜牧生產(chǎn)水平、增加畜禽產(chǎn)品出口份額，促進國民經(jīng)濟的發(fā)展，無疑具有重大的實踐意義，不僅勢在必行，而且迫在眉睫。(三)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種改善蛋雞免疫力的植物性飼料添加劑制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的所述的植物性飼料添加劑為天然中草藥_女貞子，其添加方法是將女貞子經(jīng)65t:烘至恒重，粉碎，過40目篩，并按0.5%、1%兩個劑量分別添加到蛋雛雞日糧中。本發(fā)明一種改善蛋雞免疫力的植物性飼料添加劑制備方法，將女貞子經(jīng)65t:烘至恒重，粉碎，過40目篩，并按0.5%、1%兩個劑量分別添加到蛋雛雞日糧中。經(jīng)過一定階段的飼養(yǎng)試驗，通過測定女貞子對蛋雞(雛雞、成雞和產(chǎn)蛋雞)生產(chǎn)性能、抗氧化功能、特異性免疫功能(體液免疫與細胞免疫)、蛋品質(zhì)及血液生化指標后發(fā)現(xiàn)女貞子具有1)對育成期蛋雞的成長發(fā)育有積極的促進作用，以添加1%女貞子的效果較好；2)女貞子有增強育成期蛋雞免疫功能的作用，添加1%女貞子能促進育成期蛋雞生長中、后期脾臟和胸腺發(fā)育，能提高蛋雞體液免疫和細胞免疫的作用，1%女貞子能提高蛋雞血清新城疫抗體滴度，延長持續(xù)時間，提高血清中免疫球蛋白濃度、血清IL-2和TNF含量，添加0.5%女貞子能提高前、中期血清補體C3、C4的濃度；3)女貞子能增強心臟、肝臟和腎臟的SOD、T-AOC、CAT、GSH-PX活性，且能降低組織中MDA含量，減少脂質(zhì)過氧化物對機體的損害；4)0.5%女貞子可提高蛋內(nèi)容物中蛋白質(zhì)含量，并且降低蛋內(nèi)膽固醇含量，并對蛋品的機械指標有作用。本發(fā)明主要是通過在雛雞日糧中添加0.5%、1%兩個劑量的經(jīng)烘干粉碎后的女貞子粉，可在一定程度上改善生產(chǎn)性能、抗氧化功能、免疫力和蛋品質(zhì)。本發(fā)明的產(chǎn)品具有價格低、生產(chǎn)和使用簡單、添加量少、添加效果明顯、無不良反應等特點。具體實施例方式下面對本發(fā)明作進一步說明。實施例1:本發(fā)明一種改善蛋雞免疫力的植物性飼料添加劑制備方法，所述的植物性飼料添加劑為天然中草藥_女貞子，其添加方法是將女貞子經(jīng)65t:烘至恒重，粉碎，過40目篩，并按0.5%或1%兩個劑量分別添加到蛋雛雞日糧中。實驗內(nèi)容如下1.試驗動物及試驗設計試驗動物選用1日齡海蘭褐蛋雛雞384只(購自哈爾濱遠大孵化廠)，均為母雞，隨機分為4組，每組6個重復，每個重復16只雞。對照組(I組)飼喂基礎日糧，試驗nIV組在基礎飼糧中分別添加5mg/kg的黃霉素、0.5%、1%的女貞子。試驗基礎飼糧養(yǎng)分含量均達到或超過NRC(1994)標準，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2-1(1-18周)和2_2(19-28周)。試驗動物籠養(yǎng)，自由采食和飲水，控制舍內(nèi)溫度、濕度和光照。從1周齡開始正式試驗至28周齡結(jié)束，為期28周。試驗設計見表2-3。表2-1基礎飼糧的組成和營養(yǎng)水平「n詞糧組成(％)Ingredients營養(yǎng)水平Nutrientlevels_1-6周7-1213-181-67-1213-18<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>(1)每kg飼糧中含VA:7600IU，VD:100IU，VE:15mg，VK:2.6mg，VB!:lmg，VB2:8mg，VB12:0.05mg，葉酸0.8mg，煙酸30mg，泛酸7mg。(2)每kg飼糧中含Cu:5mg，Mn:50mg，F(xiàn)e:40mg，Zn:40mg，Se:0.15mg，I:0.15mg。試驗基礎飼糧為玉米一豆粕型，按中國家禽營養(yǎng)需要配制，基礎飼糧配方與營養(yǎng)水平(見表2-1)表2-2基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>1每kg飼糧中含VA:7600IU，VD:100IU，VE:15mg，VK:2.6mg，VB丄:lmg，VB2:8mg，VB12:0.05mg，葉酸0.8mg，煙酸30mg，泛酸7mg。2每kg飼糧中含Cu:5mg，Mn:50mg，F(xiàn)e:40mg，Zn:40mg，Se:0.15mg，I:0.15mg。表2-3試驗設計方案<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.樣品收集于試驗的第6、12、18周每個重復選出2只接近平均體重的健康雞，翅下靜脈采血，分離血清，放于EP管內(nèi)，-201:保存，剖殺試雞摘取免疫器官脾臟、法氏囊，胸腺并稱重，測定免疫器官指數(shù)，同時采心臟、肝臟和腎臟，用玻璃勻漿器研磨，以生理鹽水稀釋成10%或1%組織勻漿，_201:保存，待用；于18周，每個重復選出2只接近平均體重的健康雞，翅下靜脈采血，用于外周淋巴細胞轉(zhuǎn)化率測定。于試驗的19周注射禽流感H具亞型疫苗，于21、24、26周即免疫后14、28、42天翅下靜脈采血，清晨喂料前，每個重復隨機取1只，標號，3000r/min離心10分鐘，制備血清分裝三份于印pendorf管中，-2(TC冰箱保存?zhèn)錂z。22、24、26、28周結(jié)束時的同一時間分別采集蛋樣，每個重復隨機抽取4枚，標號，隨取隨撿。3.檢測指標及方法(1)生長性能于試驗第1、6、12、18周對各組雞進行稱重，稱前空腹8h，僅供飲水，次日早上8點以重復為單位空腹稱重，同時稱量余料量。并計算各組試雞的日增重、采食量和飼料轉(zhuǎn)換率。公式如下日增重(g/d)=(末重-始重)/試驗天數(shù)飼料轉(zhuǎn)換率=采食量/日增重19-28周齡開始準確地記錄每重復產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋量、破軟蛋數(shù)，每周結(jié)束時結(jié)料，計算每重復耗料量，根據(jù)飼養(yǎng)試驗記錄，整理統(tǒng)計平均產(chǎn)蛋率、平均日采食量、料蛋比、破軟蛋率。平均產(chǎn)蛋率(％)=總蛋數(shù)/(雞數(shù)X天數(shù))平均日產(chǎn)蛋量(克/只日)=總蛋重/(雞數(shù)X天數(shù))平均日采食量(g/d)=總采食量/(雞數(shù)X天數(shù))料蛋比=總采食量/總蛋重破軟蛋率(％)=破軟蛋數(shù)/總蛋數(shù)X100%在每期試驗開始和結(jié)束時，每重復隨機抽取2只雞稱取體重，計算體重變化。體重變化=結(jié)束重_初始重(2)免疫功能指標l-18周齡時，測定免疫器官指數(shù)、新城疫血凝抑制抗體效價、外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)換率、血清免疫球蛋白含量、補體C3、C4含量、白細胞介素-2含量和腫瘤壞死因子含量。19-28周齡時，測定血清中的免疫球蛋白、禽流感亞型血凝抑制抗體效價。4.結(jié)果與分析各處理蛋雛雞不同時期的生長性能指標見表2-4。6周齡時1%女貞子組與對照組、抗生素組間日增重無顯著差異(P>0.05)，但0.5%女貞子組的日增重顯著低于1%女貞子組(P<0.05)，與對照組、抗生素組無顯著差異。12周齡時，O.5%女貞子組的日增重比對照組和抗生素組有增加，但無顯著差異(P>0.05)。18周齡時，試驗組較對照組、抗生素組的日增重有所增加，差異不顯著(P>0.05)。另外，各處理組間的118周日增重和飼料轉(zhuǎn)化率均無顯著差異(P>0.05)。表2-4女貞子對蛋雛雞生產(chǎn)性能的影響(克/只)曰增重(g)飼料轉(zhuǎn)化組別1~6周712周1318周118周R增重率(1~18周)對照11.55±0.91ab*16.19±1.75a11.48±0.41a11.48±0.41a2.85±0.33a黃霉素11.30±0.O8ab16.16±1.03a11.64±1.23a11.64±1.23a2.65±0.26a0.5%女貞子11.19±0.47b16.51±1.49a12.20±0.47a12.20±0.47a2.82±0.26a1%女貞子12.18±1.07a15.85±0.56a11.85±1.00a11.79±0.84a2.62±0.23a注同行肩標不同字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母差異極顯著(P<O.Ol)，下表同。由表2-5可知，在整個試驗期中各處理組間的結(jié)束體重和體重變化均呈增加趨勢，但生物統(tǒng)計差異不顯著(P>0.05)，表明女貞子對產(chǎn)蛋雞的增重影響不顯著，但是增重趨勢最大的是0.5%女貞子組。表2-5女貞子對蛋雞體重的影響處理起始體重結(jié)束體重體重變化(kg)(kg)(kg)0.5%女貞子組1.664±0.0551.860±0.0350.175±0.0561%女貞子組1.673±0.0331.814±0.0460.141±0.027黃霉素組1.692±0.0511.835±0.0220.143±0.041空白組1.660±0.0671.793±0.0390.136±0.033P值0.6950.2440.547由表2-6可知，隨蛋雞周齡的增長，各處理組的產(chǎn)蛋率都不同程度的升高。與空白組相比，其中24周時I組的產(chǎn)蛋率提高2.22%，各處理組對產(chǎn)蛋率的影響差異不顯著(P>0.05);與空白組相比，26周時，1、1I組分別提高10.60%、5.70%，I組與空白組相比差異顯著(P<0.05)，與II、III組差異不顯著(P>0.05);在產(chǎn)蛋高峰期28周時，各處理組產(chǎn)蛋率都達90%以上，且均高于空白組，與空白相比，I組高出7.50%，表現(xiàn)為差異顯著(P<0.05)，其他各組差異均不顯著(P>0.05)。試驗全期產(chǎn)蛋率無明顯影響(P<0.05)，其中I組高于空白組3.72%。表2-6女貞子對蛋雞產(chǎn)蛋率和軟蛋率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表2-6知，從整個試驗全期來看，各組之間的軟蛋率差異不顯著(P>0.05)，II組的破軟蛋率表現(xiàn)為最低，I組與III組在整個試驗期幾乎無差異，都低于空白組。整個試驗期來看，破軟蛋率最低的是1%女貞子組。對于蛋雞的日產(chǎn)蛋量，本試驗用只日蛋重(克/只日)來表示。由表2-7可知，22周齡時各組之間日產(chǎn)蛋量幾乎平行，表現(xiàn)為差異不顯著(P>0.05);24、26周齡時，與空白組相比，各組都表現(xiàn)出升高的趨勢，I組尤為明顯，但差異不顯著(P>0.05);在28周齡時，I組高出空白組5.47%，與空白組相比，I組日產(chǎn)蛋量差異顯著(P<0.05)。日產(chǎn)蛋量與產(chǎn)蛋率在蛋雞高峰期時表現(xiàn)相似性。表2-7女貞子對蛋雞日產(chǎn)蛋量的影響處理曰產(chǎn)蛋量(克/只'日)22W24W26W28W0.5%女貞51.42±0.4555.05±0.6659.19±0.8961.89±子組51.72±0.9254.72±0.6858.25±0.841.15a1%女貞子51.94±0.8755.55±1.3158.32±0.8859.95±組51.70±0.6654.66士0.5956.99±1.180.86ab黃霉素組60.51±空白組0.84ab58.68±由表2-8知，蛋雞日采食量在整個試驗期過程中，各組采食量呈現(xiàn)增加的趨勢，但無明顯差異(P>0.05)。與空白組相比，各處理組在22、24、26周表現(xiàn)為差異不顯著(P>0.05);整個試驗期II組采食量比其它各組都高。在28周時女貞子II組采食量最大，高出空白組6.85%，其中I組耗料最低，I組和II組相比差異顯著(P〈0.05)，和其它各組差異不顯著(P>0.05)。由表3-4可知，各組料蛋比在22、24周齡差異不顯著(P>0.05)，其中22周齡時，與空白組相比，第I、III組分別下降了12.5%、13.64%，II組和IV組料蛋比幾乎無差異；24周齡時各組料蛋比無明顯差異；26周齡時，與空白組相比，1組表現(xiàn)為差異性顯著(P<o.05);與其它各組差異不顯著(P>0.05);28周齡時I組顯著高于其它各處理組(P<0.05)，其它各組之間無差異(P>0.05)，其中II組與空白組相比表現(xiàn)出負效應?？傮w看來，I組的料蛋比在整個試驗期最低，與空白組相比，試驗全期料蛋比顯著降低(P<0.05)。表2-9女貞子對蛋雛雞免疫器官指數(shù)的影響組別胸腺指數(shù)法氏囊指數(shù)脾臟指數(shù)對照3.30±0.57a*4.64±0.70b2.62±0.42a6W黃霉素3.31±0.77a4.70±0.52b2.74±0.45a0.5%女貞子3.46±0.99a5.77±1.30a2.88±0.30a1%女貞子3.38±0.40a4.80±0.52ab3.09±0.51a對照2.75±0.58a0.52±0.16a2.43±0.16b12W黃霉素2.73±0.63a0.57±0.17a2.51±0.17ab0.5%女貞子2.85±0.27a0.52±0.12a2.54±0.24ab1%女貞子2.48±0.17a0.61±0.25a2.82±0.39a對照1.59±0.09b0.81±0.43a2.08±0.34a18W黃霉素0.5%女貞子1.80±0.35ab1.90±0.49ab0.71±0.16a0.63±0.23a2.16±0.42a1.89±0.25a1%女貞子2.09±0.37a0.86±0.27a2.07±0.29a由表2-10可知，免疫當日、免疫后7天女貞子組抗體效價較對照組與抗生素組有升高的趨勢，但各組間抗體效價無顯著差異(P>0.05)。免疫后14天，女貞子組抗體效價均高于對照組，其中1%女貞子組的抗體效價顯著高于其他各組(P<0.05)。免疫后21天，各試驗組抗體效價均高于對照組，其中1%女貞子組抗體效價與對照組、0.5%女貞子組差異顯著(P<0.05)。免疫后28天，各試驗組血清抗體效價均高于對照組，并且女貞子組抗體效價顯著高于對照組(P<0.05)。表2-10女貞子對接種新城疫油苗蛋雛雞血清抗體效價的影響(log2X)組別免疫當日免疫后7d免疫后14d免疫后21d免疫后28d對照2.50±0.55a*3.00±1.26a6.83±1.33b6.17±0.75b3.17±0.98b黃霉素2.33±0.82a3.17±1.47a6.50±1.05b7.33±0.82ab3.67±0.52ab0.5%女貞子2.33±0.52a3.17±0.41a7.17±0.98b6.33±1.37b4.17±0.75a1%女貞子3.00±0.63a3.33±1.03a8.67±0.82a7.77±0.82a4.33±0.52a各處理蛋雛雞外周淋巴細胞轉(zhuǎn)換率結(jié)果見表2-11。用ConA剌激后，女貞子組淋巴細胞轉(zhuǎn)換率顯著高于對照組與抗生素組(P<0.05)。表2_11女貞子對蛋雛雞淋巴細胞轉(zhuǎn)換率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>女貞子對各處理蛋雞不同時期血清免疫球蛋白含量的影響見表2-12。6周齡時，各試驗組IgG含量顯著高于對照組(P<0.05)，各組間IgA，IgM含量無顯著差異(P>0.05);12周齡時，l^女貞子組IgG含量與對照組差異顯著(P〈0.05)，各試驗組IgA含量與對照組相比無明顯差異(P>0.05)，但IgM含量顯著高于對照組(P<0.05);18周齡時，各試驗組的IgG，IgM含量與對照組差異不顯著，l^女貞子組的IgA含量顯著高于對照組(P<0.05)。表2-12女貞子對血清中IgG、IgA、IgM含量的影響(g/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表2-13可知，6周齡時，添加女貞子能提高血清中C3的含量，其中0.5%女貞子組較對照組差異顯著(P<0.05)，12周齡時添加女貞子能顯著提高血清中C3的含量(P<0.05)，18周齡時各組間無顯著差異(P>0.05)，但女貞子組的血清C3含量較對照組與抗生素組有提高的趨勢。女貞子組不同時期血清中c;含量均高于對照組與抗生素組，但無顯著差異(P>0.05)。表2-13女貞子對蛋雛雞血清C3、C4的影響(g/L)組別6周c3c412周18周6周12周18周對照2.69±0.14b*2.31±0.16b2.39±0.30a0.08±0.03a0.08±0.04a0.09±0.01a黃霉素2，0.28ab2.32±0,07b2.49±0.13a0.09±0.04a0.09±0.05a0.10±0.04a0.5%女貞子3.18±0.59a2.64±0.25a2.73±0.27a0.11±0.05a0.10±0.04ao.io士o.or1%女貞子2.78±0.15ab2.52±0.05a2.66±0.60a0.10±0.03ao.mo.or0.11±0.02a由表2-14可知，6周齡時，1%女貞子組IL-2含量顯著高于對照組和抗生素組(P<0.05);12周齡時，女貞子組IL-2含量顯著高于對照組和抗生素組(P<0.05)，其中以添加1%女貞子組1卜2含量最高；18周齡時，添加女貞子能顯著提高血清中IL-2含量(P<0.05)，其中0.5%女貞子組與對照組差異極其顯著(P<0.01)，1%女貞子與空白組差異顯著(P<0.05)。表2-14女貞子對蛋雛雞血清IL-2含量的影響(ng/mL)組別6周12周18周對照2.23±1.06b*3.26±0.53b5.74±2.05e黃霉素2.33±1.30b3.42±0.46b7.30±1.69bc0.5%女貞子5.14±3.67ab5.66±1.13a10.14±2.30a1%女貞子6.06±2.76a6.39±1.71a8.71±1.32ab由表2-15可知，6周齡和18周齡時，各試驗組血清中TNF含量均較對照組有增加，但差異不顯著(P>0.05)。12周齡時，女貞子組、抗生素組血清中TNF含量均高于對照組，其中添加1%女貞子可顯著提高血清中TNF含量(P<0.05)。表2-15女貞子對蛋雛雞血清TNF的影響(ng/mL)組別6周12周18周對照0.52±0.09a*0.53±0.15b0.66±0.17a黃霉素0.53±0.15a0.57±0.13b1.13±0.72a0.5%女貞子1.16±1.39a0.88±0.18ab1.58±1.61a1%女貞子0.58±0.07al,18±0.60a1.77±1.69a各處理組對蛋雞的禽流感115^亞型抗體效價結(jié)果見表2-16。與空白組相比，在免疫后28天或42天，各試驗組的禽流感H5亞型抗體效價均顯著性升高，在免疫后28天，0.5%女貞子組抗體效價顯著高于空白組(P<0.05);免疫后42天，除黃霉素組抗體效價表現(xiàn)下降外各組抗體效價仍舊表現(xiàn)升高，0.5%女貞子顯著高于空白組(P<0.05)，1%女貞子組、黃霉素組和空白組相比無顯著性差異(P〉0.05)。表2-16女貞子對蛋雞禽流感亞型抗體效價的影響曰齡0.5%女貞子組1%女貞子組黃霉素組空白組免疫后144.50±2.505.25±1.184.00±0.000天7.80±0.37a6.57±0.53ab6.33±0.67ab5.67±0.76b免疫后288.14±0.67a7.00±0.45ab5.67±0.61ab5.86±0.55b天免疫后42天由表2-17可知1%女貞子組與空白組相比，IgG和IgM都表現(xiàn)為差異顯著(P<0.05)，其中IgG相比空白組高出33.3%，0.5%女貞子組和黃霉素組與各組之間差異不顯著(P〉0.05);與空白組相比，兩種女貞子添加方式對IgA含量的影響表現(xiàn)為顯著性差異(P<0.05)，黃霉素組與各組差異不顯著(P>0.05)。表2-17女貞子對蛋雞免疫球蛋白的影響處理0.5%女貞子組1%女貞子組黃霉素組空白組0.21±IgGIgAIgM0.23±0.014ab0.14±0.003a0.13±0.006ab0.28±0.025a0.14±0.008a0.14±0.006a0.21±0.023ab0.13±0.008ab0.12±0.004ab0.010b0.12±0.004b0.12±0.004b權利要求一種改善蛋雞免疫力的植物性飼料添加劑方法，其特征在于所述的植物性飼料添加劑為天然中草藥-女貞子，其添加方法是將女貞子經(jīng)65℃烘至恒重，粉碎，過40目篩，并按0.5％、1％兩個劑量分別添加到蛋雛雞日糧中。全文摘要本發(fā)明提供一種改善蛋雞免疫力的植物性飼料添加劑制備方法。所述的植物性飼料添加劑為天然中草藥一女貞子，其添加方法是將女貞子經(jīng)65℃烘至恒重，粉碎，過40目篩，并按0.5％、1％兩個劑量分別添加到蛋雛雞日糧中。通過測定女貞子對蛋雞(雛雞、成雞和產(chǎn)蛋雞)生產(chǎn)性能、抗氧化功能、特異性免疫功能(體液免疫與細胞免疫)、蛋品質(zhì)及血液生化指標后發(fā)現(xiàn)女貞子對育成期蛋雞的成長發(fā)育有積極的促進作用，本發(fā)明主要是通過在雛雞日糧中添加0.5％、1％兩個劑量的經(jīng)烘干粉碎后的女貞子粉，可在一定程度上改善生產(chǎn)性能、抗氧化功能、免疫力和蛋品質(zhì)。本發(fā)明的產(chǎn)品具有價格低、生產(chǎn)和使用簡單、添加量少、添加效果明顯、無不良反應等特點。文檔編號A23K1/16GK101731480SQ20101010252公開日2010年6月16日申請日期2010年1月29日優(yōu)先權日2010年1月29日發(fā)明者單安山,張瑋,石莉莎申請人:東北農(nóng)業(yè)大學