專利名稱：一種利用腋芽增殖試管快繁地靈的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于保健植物的試管快繁技術(shù)，具體涉及一種利用腋芽增殖試管快繁地靈
的方法。
背景技術(shù)：
地靈(Stachys f loridana)，又稱銀條，是唇形科水蘇屬多年生蓄根草本植物，主 要產(chǎn)于我國西北、華北等地，生長于水位較高的沙土荒地、田間及草叢濕地，目前在我國西 北地區(qū)的甘肅、寧夏、新疆、陜西延安、榆林以及河北、內(nèi)蒙、東北等地有一定分布，處于半野 生狀態(tài)。地靈作為蔬菜人工栽培面積很小，地靈含有豐富的水蘇糖；水蘇糖屬于低聚半乳 糖，是一種能顯著促進(jìn)雙歧桿菌增殖的功能性低聚糖，故被譽為"超強雙歧因子"低聚糖。作 為雙歧因子的一種，水蘇糖對人體胃腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌群有著極明顯 的增殖作用，能迅速改善人體消化道內(nèi)環(huán)境，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡。通過獲得大量增殖的雙歧桿 菌、乳酸桿菌，促進(jìn)形成有益菌在消化道內(nèi)的優(yōu)勢菌地位。雙歧桿菌等有益菌具有能清除自 由基及過氧化脂質(zhì)的能力，抑制產(chǎn)氣產(chǎn)酸梭狀芽孢桿菌等腐敗菌的生產(chǎn)，因而能夠延緩細(xì) 胞的衰老，另外產(chǎn)生大量生理活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)腸道pH值、滅殺致病菌，阻遏腐敗產(chǎn)物生成， 抑制內(nèi)源致癌物的產(chǎn)生和吸收，起到延年益壽的作用，除此，雙歧桿菌能非特異性地提高機 體的免疫力，提高抗感染的能力，也有利于健康和長壽。地靈作為我國水蘇糖生產(chǎn)的主要原 料，和我國水蘇糖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展是緊密相關(guān)聯(lián)的，我國近幾年水蘇糖產(chǎn)業(yè)的飛速發(fā)展，要求地 靈的生產(chǎn)在產(chǎn)量和質(zhì)量上要同步跟進(jìn)。但由于地靈是通過播種地下莖進(jìn)行無性繁殖的植 物，像馬鈴薯這些無性繁殖作物一樣，種性退化是其栽培的主要問題，近幾年我國地靈由半 野生的零星栽培到規(guī)?；娜斯o性繁殖栽培，使地靈不同程度病毒累積、種性退化、成片 死亡的問題日益凸現(xiàn)，給大規(guī)模生產(chǎn)帶來了極大風(fēng)險；同時地靈通過播種地下莖進(jìn)行無性 繁殖，繁殖系數(shù)很低，種源嚴(yán)重匱乏，這些都成為制約地靈大規(guī)模生產(chǎn)的瓶頸，因此加大地 靈的生產(chǎn)規(guī)模，保證地靈的安全生產(chǎn)，提高地靈根莖生產(chǎn)量已經(jīng)成為當(dāng)前我國特有野生資 源地靈栽培和水蘇糖產(chǎn)業(yè)開發(fā)的當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題或不足，申請人進(jìn)行了地靈腋芽發(fā)育試管克隆繁育 的技術(shù)開發(fā)研究，經(jīng)過實驗研究和技術(shù)的集成優(yōu)化，提出一種利用腋芽增殖試管快繁地靈 的方法。該方法利用植物克隆繁育技術(shù)，進(jìn)行工廠化、規(guī)?；牡仂`克隆繁育，克服了傳統(tǒng) 地靈利用根莖繁殖用種量大、繁殖效率低及多代無性繁殖種性退化嚴(yán)重、產(chǎn)量、品質(zhì)下降等 弊端，大幅度的提高地靈繁殖速度和繁殖效率，加快地靈產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，保證地靈種性和生產(chǎn) 潛力，大幅度的提高地靈的產(chǎn)量與品質(zhì)。 為實現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案
—種利用腋芽增殖試管快繁地靈的方法，包括下列步驟 1)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)在地靈收獲期，選取大田栽培、生長健壯、單株產(chǎn)量高的地靈單株地下根莖，經(jīng)充分水洗后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇消毒30秒，用每升含有0. 1% 的汞消毒10分鐘，于無菌條件下切成帶休眠芽的莖段，接種到休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基上， 于25°C 27t:溫度、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈地下根莖休眠芽發(fā)育；
所述地靈休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2. Omg/L的6_呋 喃基氨基嘌呤； 調(diào)整休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋(壓力1.0kg/cm2)滅
菌15分鐘。 2)腋芽增殖培養(yǎng)當(dāng)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的地靈根莖休眠芽發(fā)育到3 4片 葉時，切下幼苗接種到地靈腋芽發(fā)育增殖培養(yǎng)基中，于溫度25t: 27t:、3000Lx光照條件 下誘導(dǎo)地靈無菌苗腋芽發(fā)育增殖； 所述的腋芽增殖培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2. Omg/L的6_呋喃基氨基 嘌呤(KT)和0. 5mg/L的口引哚乙酸(IAA);調(diào)整腋芽增殖培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋(壓力1.0kg/cm2)滅菌15分
鐘；無菌苗經(jīng)過腋芽增殖培養(yǎng)，一個無菌苗增殖到4 5個苗或枝條； 3)芽苗再增殖切取腋芽增殖培養(yǎng)基上的單個枝條，接種到同一腋芽增殖培養(yǎng)基 上，在同樣培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)腋芽發(fā)育再增殖； 腋芽發(fā)育增殖進(jìn)行多次，每次為一代，根據(jù)增殖起始苗數(shù)、有效繁殖系數(shù)和年生產(chǎn) 規(guī)模確定增殖代數(shù)； 4)壯苗生根培養(yǎng)地靈腋芽發(fā)育增殖每一代的試管苗和增殖培養(yǎng)結(jié)束后所有試 管苗，切下單個芽苗轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中，于25t:條件下連續(xù)光照培養(yǎng)18天進(jìn)行壯苗生 根； 壯苗生根培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，將MS通用培養(yǎng)基的無機鹽濃度降低一 半，并附加0. 5mg/L的a -萘乙酸(NAA); 調(diào)整壯苗生根培養(yǎng)基的pH值為5. 6，置高壓滅菌鍋(壓力1. 0kg/cm2)滅菌15分鐘；
5)煉苗和緩苗試管苗生根壯苗培養(yǎng)18天后，向培養(yǎng)瓶中加少量無菌自來水，于 10 181:遮陰條件下煉苗3 6天，然后取出試管苗，洗凈根部瓊脂，移栽于含30%沙子的 沙質(zhì)土壤營養(yǎng)缽中，置于10 18t:遮陰條件下緩苗10 15天； 6)起窩和栽種地靈大田定植每畝按3000 5000株起窩，每窩澆足水，將去掉營 養(yǎng)缽的地靈苗連同介質(zhì)直接栽入并復(fù)土、澆水；
7)地靈大田定植緩苗后，按常規(guī)方法管理。 本發(fā)明利用地靈地下根莖為外植體建立無性繁殖系，研發(fā)了通過腋芽增殖克隆繁 育地靈的方法，克服了傳統(tǒng)地靈利用根莖繁殖用種量大、繁殖效率低及多代無性繁殖種性 退化嚴(yán)重、產(chǎn)量、品質(zhì)下降等弊端。建立了效率高、技術(shù)路線可行、芽增殖系數(shù)在4.2左右、 生根率為100 % ，定植成活率在95 %以上，能集約化、大規(guī)模生產(chǎn)的地靈試管繁育技術(shù)體 系，為地靈優(yōu)良品種快速、高效的克隆繁育、種性保持和種苗生產(chǎn)提供了一個可行的、有效 的方法。


圖1是地靈在試管腋芽增殖繁育的圖片
圖2是試管克隆的地靈試管苗移入營養(yǎng)缽中生長情況圖片；
圖3是大田試管地靈繁育與常規(guī)根莖繁育生長比較。
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
具體實施例方式
—、具體實施例 實施例1 : 按照本發(fā)明的利用腋芽增殖試管快繁地靈的方法，包括下列步驟 1)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)在地靈收獲期，選取大田栽培、生長健壯、單株產(chǎn)量高的
地靈單株地下根莖，經(jīng)充分水洗后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇消毒30秒，用每升含有0. 1%
的汞消毒10分鐘，于無菌條件下切成帶休眠芽的莖段，接種到休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，
于25°C、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈地下根莖休眠芽發(fā)育； 地靈休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2. 0mg/L 6_呋喃基氨 基嘌呤； 調(diào)整休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋(壓力1.0kg/cm2)滅 菌15分鐘; 通用培養(yǎng)基MS的配方為硝酸鉀(KN03) : 1900mg/L，硝酸氨(NH4N03) :1650mg/L， 氯化鈣(CaC12 2H20) :440mg/L，硫酸鎂(MgS04 7H20) :370mg/L，磷酸二氫鉀(KH2P04): 170mg/L，硫酸亞鐵(FeS04*7H20) :27. 8mg/L，乙二酸四乙鈉(Na2EDTA) :37. 3mg/L，硫酸錳 (MnS04'4H20) :22. 3mg/L，硫酸鋅(ZnS04 *7H20) :8.6mg/L，硼酸(H3B03) :6.2mg/L，碘化鉀 (KI) :0. 83mg/L，鉬酸鈉(Na2Mo04 *2H20) :0. 25mg/L，硫酸銅(CuS04 *5H20) :0.025mg/L，氯 化鈷(CoC12 6H20) :0. 025mg/L，肌醇100mg/L，鹽酸硫胺素0. 5mg/L，鹽酸吡哆鋅0. 5mg/ L，煙酸0. 5mg/L，甘氨酸2mg/L，蔗糖30000mg/L，瓊脂5000mg/L ; 2)腋芽增殖培養(yǎng)當(dāng)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的地靈根莖休眠芽發(fā)育到3 4片 葉時，切下幼苗接種到地靈腋芽發(fā)育增殖培養(yǎng)基中，于27t:、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈 無菌苗腋芽發(fā)育增殖； 腋芽增殖培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2. Omg/L的6_呋喃基氨基嘌呤 (KT)和0. 5mg/L的口引哚乙酸(IAA); 調(diào)整腋芽增殖培養(yǎng)基的pH值為5. 6，置高壓滅菌鍋滅菌15分鐘(1. 0kg/cm2)。無 菌苗經(jīng)過腋芽增殖培養(yǎng)，一個無菌苗可增殖到4 5個苗或枝條； 3)芽苗再增殖切取增殖培養(yǎng)基上的單個枝條，接種到同一腋芽增殖培養(yǎng)基上， 在同樣培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)腋芽發(fā)育再增殖； 這一腋芽發(fā)育增殖要進(jìn)行多次，每次為一代，增殖代數(shù)根據(jù)增殖起始苗數(shù)、有效繁 殖系數(shù)和年生產(chǎn)規(guī)模來定。如起始增殖苗數(shù)為IOO個苗，有效繁殖系數(shù)為4，年生產(chǎn)規(guī)模160 萬株，則增殖代數(shù)應(yīng)為7代； 4)壯苗生根培養(yǎng)地靈腋芽發(fā)育增殖每一代一定試管苗和增殖培養(yǎng)結(jié)束后所有 試管苗，切下單個芽苗轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中，于25t:條件下連續(xù)光照培養(yǎng)18天進(jìn)行壯苗 生根； 壯苗生根培養(yǎng)基采用通用培養(yǎng)基MS，以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，MS通用培養(yǎng)基的無機鹽濃度降低一半，附加0. 5mg/L a -萘乙酸(NAA); 調(diào)整壯苗生根培養(yǎng)基的pH值為5. 6，置高壓滅菌鍋(1. 0kg/cm2)滅菌15分鐘；
5)煉苗和緩苗生根壯苗培養(yǎng)18天的試管苗后，打開培養(yǎng)瓶口，向培養(yǎng)瓶中加 少量無菌自來水，于1『C遮陰條件下煉苗3天，然后取出試管苗，洗凈根部瓊脂，移栽于含 30%沙子的沙質(zhì)土壤營養(yǎng)缽中，置l(TC遮陰條件下緩苗10 15天； 6)起窩和栽種地靈大田定植每畝按5000株起窩，每窩澆足水，將去掉營養(yǎng)缽的
地靈苗連同介質(zhì)直接栽入并復(fù)土、澆水； 7)地靈大田定植緩苗后，按常規(guī)方法管理。 實施例2 : 本實施例與實施例1步驟相同，二者區(qū)別在于步驟中的具體條件的控制，本實施 例能夠達(dá)到實施例1的技術(shù)效果，包括下列步驟 1)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)在地靈收獲期，選取大田栽培、生長健壯、單株產(chǎn)量高 的地靈單株的地下根莖，經(jīng)充分水洗后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇消毒30秒，用每升含有 0. 1%的汞消毒10分鐘，于無菌條件下切成帶休眠芽的莖段，接種到休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng) 基上，于27。C、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈地下根莖休眠芽發(fā)育； 地靈休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基采用通用培養(yǎng)基MS，以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加 2. Omg/L 6-呋喃基氨基嘌呤； 調(diào)整休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋(壓力1.0kg/cm2)滅 菌15分鐘; 2)腋芽增殖培養(yǎng)當(dāng)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的地靈根莖休眠芽發(fā)育到3 4片葉時，切 下幼苗接種到地靈腋芽發(fā)育增殖培養(yǎng)基中，于25t:、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈無菌苗腋 芽發(fā)育增殖； 腋芽增殖培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2. Omg/L的6_呋喃基氨基嘌呤 (KT)和0. 5mg/L的口引哚乙酸(IAA); 調(diào)整腋芽增殖培養(yǎng)基的pH值為5. 6，置高壓滅菌鍋(壓力；1. 0kg/cm2)滅菌15分
鐘。無菌苗經(jīng)過腋芽增殖培養(yǎng)， 一個無菌苗可增殖到4 5個苗或枝條； 3)芽苗再增殖切取腋芽增殖培養(yǎng)基上的單個枝條，接種到同一腋芽增殖培養(yǎng)基
上，在同樣培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)腋芽發(fā)育再增殖；這一腋芽發(fā)育增殖要進(jìn)行多次； 4)壯苗生根培養(yǎng)地靈腋芽發(fā)育增殖每一代一定試管苗和增殖培養(yǎng)結(jié)束后所有
試管苗，切下單個芽苗轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中，于25t:條件下連續(xù)光照培養(yǎng)18天進(jìn)行壯苗
生根； 壯苗生根培養(yǎng)基采用通用培養(yǎng)基MS，以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，MS通用培養(yǎng)基的無 機鹽濃度降低一半，附加0. 5mg/L的a -萘乙酸(NAA); 調(diào)整壯苗生根培養(yǎng)基的pH值為5. 6，置高壓滅菌鍋(壓力1. 0kg/cm2)滅菌15分 鐘； 5)煉苗和緩苗生根壯苗培養(yǎng)18天的試管苗后，打開培養(yǎng)瓶口，向培養(yǎng)瓶中加 少量無菌自來水，于l(TC遮陰條件下煉苗6天，然后取出試管苗，洗凈根部瓊脂，移栽于含 30%沙子的沙質(zhì)土壤營養(yǎng)缽中，置18t:遮陰條件下緩苗10 15天； 6)起窩和栽種地靈大田定植每畝按3000株起窩，每窩澆足水，將去掉營養(yǎng)缽的地靈苗連同介質(zhì)直接栽入并復(fù)土、澆水； 7)地靈大田定植緩苗后，按常規(guī)方法管理。 實施例3 : 本實施例與實施例1步驟相同，二者區(qū)別在于步驟中的具體條件的控制，本實施 例能夠達(dá)到實施例1的效果，包括下列步驟 1)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)在地靈收獲期，選取大田栽培、生長健壯、單株產(chǎn)量高 的地靈單株的地下根莖，經(jīng)充分水洗后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇消毒30秒，用每升含有 0. 1%的汞消毒10分鐘，于無菌條件下切成帶休眠芽的莖段，接種到休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng) 基上，于26t:溫度、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈地下根莖休眠芽發(fā)育；
地靈休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基采用通用培養(yǎng)基MS，以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加 2. Omg/L 6-呋喃基氨基嘌呤； 調(diào)整休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋(壓力1.0kg/cm2)滅 菌15分鐘; 2)腋芽增殖培養(yǎng)當(dāng)休眠誘導(dǎo)發(fā)育培養(yǎng)基上的地靈根莖休眠芽發(fā)育到3 4片葉 時，切下幼苗接種到地靈腋芽發(fā)育增殖培養(yǎng)基中，于26t:、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈無 菌苗腋芽發(fā)育增殖； 腋芽增殖培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2. Omg/L的6_呋喃基氨基嘌呤 (KT)和0. 5mg/L的口引哚乙酸(IAA); 調(diào)整腋芽增殖培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋滅菌15分鐘(壓力；1.0kg/
cm2)。無菌苗經(jīng)過腋芽增殖培養(yǎng)， 一個無菌苗可增殖到4 5個苗或枝條； 3)芽苗再增殖切取腋芽增殖培養(yǎng)基上的單個枝條，接種到同一腋芽發(fā)育增殖培
養(yǎng)基上，在同樣培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)腋芽發(fā)育再增殖； 這一腋芽發(fā)育增殖要進(jìn)行多次； 4)壯苗生根培養(yǎng)地靈腋芽發(fā)育增殖每一代一定試管苗和增殖培養(yǎng)結(jié)束后所有 試管苗，切下單個芽苗轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中，于25t:條件下連續(xù)光照培養(yǎng)18天進(jìn)行壯苗 生根； 壯苗生根培養(yǎng)基采用通用培養(yǎng)基MS，以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，MS通用培養(yǎng)基的無 機鹽濃度降低一半，附加0. 5mg/L的a -萘乙酸(NAA); 調(diào)整壯苗生根培養(yǎng)基的pH值為5. 6，置高壓滅菌鍋(壓力1. 0kg/cm2)滅菌15分 鐘； 5)煉苗和緩苗生根壯苗培養(yǎng)18天的試管苗后，打開培養(yǎng)瓶口，向培養(yǎng)瓶中加 少量無菌自來水，于15t:遮陰條件下煉苗5天，然后取出試管苗，洗凈根部瓊脂，移栽于含 30%沙子的沙質(zhì)土壤營養(yǎng)缽中，置12t:遮陰條件下緩苗14天； 6)起窩和栽種地靈大田定植每畝按4000株起窩，每窩澆足水，將去掉營養(yǎng)缽的
地靈苗連同介質(zhì)直接栽入并復(fù)土、澆水； 7)地靈大田定植緩苗后，按常規(guī)方法管理。 二、大田試驗研究及試驗結(jié)果 試驗采用上述實施例l，進(jìn)行了小規(guī)模地靈試管克隆繁育，用100個無菌苗起始繁 育，增殖三代，獲試管苗7500株，增殖系數(shù)達(dá)到了 4. 2 ;經(jīng)生根壯苗獲7500株生根苗，生根率為100% ;經(jīng)煉苗移栽和田間定植，共獲得了 7210個生長健壯、發(fā)育良好的移栽苗，定植 成活率達(dá)96%。 參見圖片l，地靈增殖通過腋芽發(fā)育進(jìn)行地靈試管增殖繁育，繁殖系數(shù)4 5 ;參 見圖片2，地靈試管克隆的試管苗移入營養(yǎng)缽中生長情況良好；參見圖片3，大田試管地靈 繁育與常規(guī)根莖繁育生長比較，試管繁育地靈(近端)生長遠(yuǎn)好于根莖繁育地靈(遠(yuǎn)處)。
綜上，本發(fā)明利用地靈地下根莖為外植體建立無性繁殖系，通過腋芽增殖進(jìn)行地 靈試管克隆繁育，是一個效率高、技術(shù)路線可行、能集約化、大規(guī)模生產(chǎn)的地靈試管克隆繁 育技術(shù)體系，為地靈優(yōu)良品種快速、高效的克隆繁育、種性保持和種苗生產(chǎn)提供了一個可行 的、有效的技術(shù)體系和方法。該技術(shù)芽增殖系數(shù)在4. 2左右、生根率為100%，定植成活率在 95%以上?？朔藗鹘y(tǒng)地靈利用根莖繁殖用種量大、繁殖效率低及多代無性繁殖種性退化 嚴(yán)重、產(chǎn)量、品質(zhì)下降等弊端。
權(quán)利要求
一種利用腋芽增殖試管快繁地靈的方法，其特征在于，包括下列步驟1)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)在地靈收獲期，選取大田栽培、生長健壯、單株產(chǎn)量高的地靈單株的地下根莖，經(jīng)充分水洗后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的乙醇消毒30秒，用每升含有0.1％的汞消毒10分鐘，于無菌條件下切成帶休眠芽的莖段，接種到地靈休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，于25℃～27℃溫度、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈地下根莖休眠芽發(fā)育；所述的地靈休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2.0mg/L的6-呋喃基氨基嘌呤；調(diào)整休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋(壓力1.0kg/cm2)滅菌15分鐘；2)腋芽增殖培養(yǎng)當(dāng)休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的地靈根莖休眠芽發(fā)育到3～4片葉時，切下幼苗接種到地靈腋芽發(fā)育增殖培養(yǎng)基中，于溫度25℃～27℃、3000Lx光照條件下誘導(dǎo)地靈無菌苗腋芽發(fā)育增殖；所述的腋芽增殖培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，附加2.0mg/L的6-呋喃基氨基嘌呤(KT)和0.5mg/L的吲哚乙酸(IAA)；調(diào)整腋芽增殖培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋(壓力1.0kg/cm2)滅菌15分鐘；無菌苗經(jīng)過腋芽增殖培養(yǎng)，一個無菌苗增殖到4～5個苗或枝條；3)芽苗再增殖切取腋芽增殖培養(yǎng)基上的單個枝條，接種到同一腋芽增殖培養(yǎng)基上，在同樣培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)腋芽發(fā)育再增殖；腋芽發(fā)育增殖進(jìn)行多次，每次為一代，根據(jù)增殖起始苗數(shù)、有效繁殖系數(shù)和年生產(chǎn)規(guī)模確定增殖代數(shù)；4)壯苗生根培養(yǎng)地靈腋芽發(fā)育增殖每一代的試管苗和增殖培養(yǎng)結(jié)束后所有試管苗，切下單個芽苗轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中，于25℃條件下連續(xù)光照培養(yǎng)18天進(jìn)行壯苗生根；壯苗生根培養(yǎng)基以通用培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)，將MS通用培養(yǎng)基的無機鹽濃度降低一半，并附加0.5mg/L的α-萘乙酸(NAA)；調(diào)整壯苗生根培養(yǎng)基的pH值為5.6，置高壓滅菌鍋滅菌15分鐘(1.0kg/cm2)；5)煉苗和緩苗試管苗生根壯苗培養(yǎng)18天后，向培養(yǎng)瓶中加少量無菌自來水，于10～18℃遮陰條件下煉苗3～6天，然后取出試管苗，洗凈根部瓊脂，移栽于含30％沙子的沙質(zhì)土壤營養(yǎng)缽中，置于10～18℃遮陰條件下緩苗10～15天；6)起窩和栽種地靈大田定植每畝按3000～5000株起窩，每窩澆足水，將去掉營養(yǎng)缽的地靈苗連同介質(zhì)直接栽入并復(fù)土、澆水；7)地靈大田定植緩苗后，按常規(guī)方法管理。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用腋芽增殖試管克隆快繁地靈的方法，具體步驟包括休眠芽發(fā)育誘導(dǎo)培養(yǎng)；腋芽增殖培養(yǎng)；芽苗再增殖；壯苗生根培養(yǎng)；煉苗和緩苗；起窩和栽種；地靈大田定植緩苗后進(jìn)行常規(guī)方法管理。本發(fā)明利用地靈地下根莖為外植體建立無性繁殖系，通過腋芽增殖進(jìn)行地靈試管克隆繁育，克服了傳統(tǒng)地靈利用根莖繁殖用種量大、繁殖效率低及多代無性繁殖種性退化嚴(yán)重、產(chǎn)量、品質(zhì)下降等缺陷。效率高、技術(shù)路線可行、能集約化、大規(guī)模生產(chǎn)，為地靈優(yōu)良品種快速、高效的克隆繁育、種性保持和種苗生產(chǎn)提供了一個可行的、有效的方法，該技術(shù)芽增殖系數(shù)在4.2左右、生根率為100％，定植成活率在95％以上。
文檔編號A01H4/00GK101755682SQ20101010081
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月22日
發(fā)明者任慧莉, 李春蓮, 白延紅, 郭東偉, 陳耀鋒, 陳鑫 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)