專利名稱：一種鹿胎深加工方法
技術領域：
本發(fā)明屬于食品科學和生物工程領域，具體地涉及一種利用生物工程技術深加工
鹿胎盤的方法，以獲得具有生物學活性的新產品。
背景技術：
胎盤(Placenta)又名"紫河車(Placenta hominid)"。臨床應用廣泛，常用于虛
勞羸弱，骨蒸盜汗，肺腎兩虛之咳嗽氣喘，腎氣不足、精血衰少之陽痿遺精、不育、不孕、少乳
等。它作為妊娠期母體與胎兒進行物質交換的紐帶，具有重要的生理功能，可分泌多種激
素、酶類，含有多種蛋白質、抗體、磷脂、生長因子、細胞因子及能剌激抗體免疫系統(tǒng)的小分
子活性物質。胎盤在免疫學上有增強抵抗力和免疫力的作用。現(xiàn)代生物學及醫(yī)學研究證明，
動物和人類胎盤的結構雖然不同，但胎盤中均含有多種免疫球蛋白、活性肽、激素等生物活
性物質及氨基酸、礦物質等成分，是一種較為理想的免疫調節(jié)劑和營養(yǎng)美容保健品。 鹿胎系指母鹿腹中的帶胎衣、胎水的胎兒，或體表無毛、空腹、體內各器官已經(jīng)發(fā)
育完整，但是由于機械等原因造成流產的胎兒或產后因缺乳、母鹿拒哺、惡癖等原因死亡的
幼鹿。鹿胎的藥理作用首載《本草綱目》，言其有益腎陽、補精血之功效。 雖然，我國在利用動物組織器官及代謝產物進行治病、防病方面有著悠久的歷史。
但是，國內外對于羊胎、牛胎、豬胎等的研究較為深入，而對于鹿胎的研究較少。我國對于鹿
胎的應用非常原始，鹿胎產品加工粗糙，產品初級、種類單一，療效不顯著，造成鹿胎資源的
極大浪費。事實上，利用現(xiàn)代生物工程技術，以鹿胎為原料可開發(fā)出多元化產品，有利于鹿
產業(yè)鏈的完善、升級。此外，在原始鹿胎加工生產過程中，直接將產生的剩余物丟棄，即造成
環(huán)境污染，又浪費了鹿胎中的很多有益成分，造成極大的資源浪費。

發(fā)明內容
針對上述問題，本發(fā)明通過生物工程技術，提供一種節(jié)約資源，可從鹿胎中提取出更多的生物活性物質的鹿胎深加工方法。本發(fā)明改變以往的鹿產品加工方式，通過生物工程技術，科學合理地進行鹿胎深加工，實現(xiàn)鹿產品的工業(yè)化生產和新產品開發(fā)。
為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案一種鹿胎深加工方法，其特征在于取新鮮鹿胎盤除去筋、膜，剪碎。按重量比，鹿胎盤生理鹽水為l : 1.5 2.5取料，研磨機中研磨、充分勻漿；-40 _201:冷凍、室溫融化，反復冷凍和融化3 5次，離心，上清液即為胎盤提取液，沉淀物備用。取胎盤提取液，按胎盤提取液與丙酮體積比2 4 : l加入丙酮，充分混勻后，離心，收集上層清液；再按所收集上層清液與丙酮體積比為2 4 : 1再加入丙酮，充分混勻后，離心，收集上層清液減壓蒸餾，經(jīng)0. 45 ii m膜和0. 22 ii m膜除菌，在0. 5kg/cm2下超濾，超濾模板選用10000NMWL，得活性鹿胎素提取液。
所用生理鹽水為常規(guī)氯化鈉溶液。 將得到的活性鹿胎素提取液進一步經(jīng)冷凍干燥可制得活性鹿胎素干粉。 取上述活性鹿胎素提取液，在0. 5kg/cm2下進行超濾(超濾模板10000NMWL)，之后進行透析，收集分子量3000 8000dal的活性成分，在利用S印hadex G25凝膠過濾層析脫鹽后，經(jīng)0. 22 ii m膜除菌，得鹿胎免疫調節(jié)因子提取液。 將得到的鹿胎免疫調節(jié)因子提取液進一步經(jīng)冷凍干燥制得鹿胎免疫調節(jié)因子純 稱取上述得到的沉淀物，每千克沉淀物加入4 6升的2 4mol/L的酸，在微波功率為500W下，水解10 50分鐘，過濾得到濾液，調節(jié)濾液至p朋.0，即得到復合氨基酸；
所述的酸是硫酸、鹽酸或硝酸。 本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明解決了以往鹿胎產品加工粗糙、產品初級、產品種類單一等問題。本發(fā)明充分利用了鹿胎，達到了最大限度地獲得鹿胎中的有益成分，可一次生產出活性鹿胎素、鹿胎免疫調節(jié)因子和復合氨基酸三種新產品，產品種類多樣化。本發(fā)明利用鹿胎下腳料制備復合氨基酸，不僅節(jié)省了工業(yè)成本，還大大提高了原料的利用率，使廢棄蛋白質資源得到充分利用，而且也降低了其處理成本，避免造成環(huán)境污染。本發(fā)明制得的活性鹿胎素具有非常好的抗炎、抗衰老、增強機體免疫力，預防腫瘤、美容、養(yǎng)顏等多種功效。鹿胎免疫調節(jié)因子具有明顯的抗腫瘤活性，對大腸癌、肺癌、乳腺癌等具有非常好的抑制活性。復合氨基酸中含有17種氨基酸。這些氨基酸可作為風味增強劑、添加劑與引誘劑應用在飼料加工領域。通過本發(fā)明實現(xiàn)了對鹿胎的綜合利用和深加工，為進一步新產品開發(fā)奠定基石出。
具體實施例方式
實施例1，活性鹿胎素干粉的制備 1)取新鮮鹿胎盤除去筋、膜，剪碎；按重量比，鹿胎盤生理鹽水為1 : 1. 5 2. 5取料，研磨機中研磨、充分勻漿；-40 -20°〇完全冷凍，取出于室溫下完全融化，反復凍融3 5次，5000rpm離心10min，上清液為胎盤提取液，沉淀物備用；其中，生理鹽水為0. 9%的氯化鈉溶液。 2)取胎盤提取液，按胎盤提取液與丙酮的體積比為3 : l，加入丙酮，混勻后，8000rpm離心10min，取上層清液。再按所收集上層清液與丙酮的體積比為3 : l，加入丙酮，充分混勻后，8000rpm離心20min，收集上層清液減壓蒸餾，再經(jīng)0. 45 y m膜和0. 22 y m膜除菌，在0. 5kg/cm2條件下超濾(超濾模板選用10000NMWL)，得微黃色液體，即為活性鹿胎素提取液。 3)所得活性鹿胎素提取液進一步經(jīng)冷凍干燥制得活性鹿胎素干粉。
活性鹿胎素產率為每公斤鹿胎可以得到10g活性鹿胎素純品。
檢測結果 對于活性鹿胎素的生物學活性，采用體外細胞培養(yǎng)法。分離健康人外周血T細胞，以MTT法測定活性鹿胎素剌激T細胞增殖情況。結果表明，活性鹿胎素在50ng時，即可顯著剌激T細胞增殖，且可顯著抑制大腸癌Cx-l細胞的生長，表明活性鹿胎素具有非常好的抑瘤作用，抑瘤率可達18.6%。 采用平板法，檢測了活性鹿胎素樣品中是否存在需氧菌、厭氧菌、真菌和支原體，結果表明，活性鹿胎素中沒有任何微生物感染，研究結果符合《中國生物制品規(guī)程》之規(guī)定。
采用家兔法，對活性鹿胎素中是否存在熱原進行了必要的檢測，在每只家兔耳靜
4脈注射1ml活性鹿胎素樣品(100mg/ml)后，測定的3只家兔體溫未見有超過0. 6°C的，3只家兔體溫升溫總和也沒有超過1. 6t:，研究結果符合《中國生物制品規(guī)程》之規(guī)定。異常毒性試驗結果顯示，試驗小鼠未出現(xiàn)異常死亡，符合《中國生物制品規(guī)程》之規(guī)定。采用HPLC等方法，檢測活性鹿胎素樣品中是存在雌性激素，檢測結果證明，活性鹿胎素樣品不含有鹿胎中常見的孕二酮、孕三酮等雌性激素，符合《中國生物制品規(guī)程》之規(guī)定。
實施例2，鹿胎免疫調節(jié)因子純品的制備 1)取實施例1制得的活性鹿胎素提取液，經(jīng)超濾(超濾模板IOOOONMWL，超濾壓力0. 5kg/cm2)和透析(截留分子量8000dal)，收集分子量為3000 8000dal的活性成分，利用凝膠過濾層析(S印hadex G25)脫鹽，經(jīng)除菌(0. 22 y m膜)制得鹿胎免疫調節(jié)因子提取液。 2)將制得鹿胎免疫調節(jié)因子提取液，進一步經(jīng)冷凍干燥制得鹿胎免疫調節(jié)因子純
PR o 鹿胎免疫調節(jié)因子產率為每公斤鹿胎可以得到3. 5g鹿胎免疫調節(jié)因子純品。
檢測結果 用MTT法測定鹿胎免疫調節(jié)因子的抑瘤活性和淋巴細胞增殖活性。通過體外淋巴細胞增殖實驗發(fā)現(xiàn)，鹿胎免疫調節(jié)因子具有顯著促淋巴細胞增殖的功能，并表現(xiàn)出一定的劑量效應，平均淋轉率為20%， E-玫瑰花結試驗結果顯示，花結恢復率達到95X。隨著濃度升高其免疫生物學活性逐漸增強，至4ng/ml濃度附近時免疫生物活性達到最高峰，之后逐漸減弱。抑瘤實驗的結果表明，鹿胎免疫調節(jié)因子具有抑制腫瘤細胞生長的作用，有劑量依賴性，隨著濃度升高其免疫生物學活性逐漸增強，在4ng/ml達到最佳效果，抑瘤率為72. 43%，之后逐漸減弱。 采用平板法檢測鹿胎免疫調節(jié)因子樣品中是否存在需氧菌、厭氧菌、真菌和支原體等。平板法培養(yǎng)24h，無細菌生長。增菌培養(yǎng)144h，無細菌生長，研究結果符合《中國生物制品規(guī)程》之規(guī)定。 采用家兔法檢測鹿胎免疫調節(jié)因子中是否存在熱原。在每只家兔耳靜脈注射lml
鹿胎免疫調節(jié)因子樣品(100mg/ml)后，測定的3只家兔體溫未見有超過0. 6°C的，3只家兔
體溫升溫總和不超過1. 6t:，研究結果符合《中國生物制品規(guī)程》之規(guī)定。 小鼠急性毒性試驗，取同齡雌雄小鼠20只，隨機分成2組。反應組腹腔注射lml鹿
胎免疫調節(jié)因子(50mg/ml)，對照組注射生理鹽水，連續(xù)注射10天，用藥后無毒性反應。小
鼠慢性毒性試驗，取同齡雌雄小鼠40只，隨機分成2組。反應組腹腔注射lml鹿胎免疫調
節(jié)因子(50mg/ml)，對照組注射生理鹽水，連續(xù)注射30天，未見毒性反應，結果符合《中國生
物制品規(guī)程》之規(guī)定。 實施例3復合氨基酸的制備 1)同實施例1的步驟1)。 2)稱取沉淀物，每千克沉淀物加入6升的3mol/L的硫酸，在微波功率為500W下，水解30分鐘，過濾得到濾液，以NaOH調節(jié)濾液至p朋.0，即得到復合氨基酸。每公斤鹿胎制備鹿胎提取液后可產生約0. 5-0. 6kg下腳料沉淀。每克下腳料沉淀經(jīng)微波輔助酸水解可產生復合氨基酸730mg，每種氨基酸的含量詳見表1。
所用的硫酸也可以替換成鹽酸或硝酸。
檢測結果 Folin-酚法測定復合氨基酸中蛋白質含量，甲醛滴定法與凱氏定氮法測定水解 度，復合氨基酸采用日立835-50型氨基酸自動分析儀測定氨基酸含量。
鹿胎沉淀物水解液蛋白質含量隨著時間增加先減少后增大，蛋白質含量最低時為 0. 661mg/ml。甲醛滴定法測定復合氨基酸氨基態(tài)氮，試驗表明在一定時間范圍內，氨基態(tài)氮 變化比較穩(wěn)定。凱氏定氮法測定總氮含量，復合氨基酸總氮含量隨著時間的增加，先減少后 增加?？偟孔畹椭禐閘. 197mg/ml?？偟侩S時間變化比氨基態(tài)氮明顯。根據(jù)水解 度計算公式水解度(％ )=水解液中總氨基態(tài)氮/原料總氮X100X計算出水解度，水解 度隨著時間的增大先增大后減少，水解度最大為8. 27%。水解度與氨基態(tài)氮含量成正比， 與總氮含量成反比。因此確定水解時間在水解10 50min之間，30min最適宜。復合氨基 酸，用日835-50型氨基酸自動分析儀測定氨基酸組分含量，結果見表1 。
表1復合氨基酸中氨基酸組分含量氨基酸組成
天冬氨酸Asp61.660
蘇氨酸Thr21.262
絲氨酸Ser24.625
谷氨酸Glu106.960
甘氨酸Gly122.077
丙氨酸Ala68.300
半胱氨酸Cys5.279
纈氨酸Val29.961
蛋氨酸Met8.933
異亮氨酸lie27.053
亮氨酸Leu53.463
絡氨酸Tyr45.419
苯丙氨酸Phe25.875
賴氨酸Lys43.424
NH311.418
組氨酸His17.591
精氨酸Arg56.428
氨基酸總量Total729.727 實施例4 一種鹿胎深加工方法 1)取新鮮鹿胎盤除去筋、膜，剪碎；按重量比，鹿胎盤生理鹽水為1 : 2取料，于 研磨機中研磨、勻漿；-40 -20匸完全冷凍、室溫完全融化，反復凍融3 5次，5000rpm離 心，上清液為胎盤提取液，沉淀物備用；其中，生理鹽水為0.9%的氯化鈉溶液。
2)取胎盤提取液，加入丙酮(胎盤提取液與丙酮的體積比為3 : l)，混勻后， 8000rpm離心10min，取上層清液。再添加丙酮(所取上層清液與丙酮的體積比為3 : l)，充 分混勻后，8000rpm離心10min，收集上層清液，經(jīng)減壓蒸餾得到淡黃色透明液體。再經(jīng)過膜 (先0. 45 ii m膜，再利用0. 22 ii m膜)除菌、超濾(超濾模板IOOOONMWL，超濾壓力0. 5kg/ cm2)得到微黃色液體，即為活性鹿胎素提取液。進一步經(jīng)冷凍干燥制得活性鹿胎素干粉。活 性鹿胎素產率為每公斤鹿胎可以得到10g活性鹿胎素純品。 3)取活性鹿胎素提取液，經(jīng)超濾(超濾模板IOOOONMWL，超濾壓力0. 5kg/cm2)和
7透析(截留分子量8000dal)，收集分子量為3000 8000dal的活性成分，利用凝膠過濾層 析(S印hadex G25)脫鹽，經(jīng)除菌(0. 22ym膜)制得鹿胎免疫調節(jié)因子提取液。進一步經(jīng)冷 凍干燥制得鹿胎免疫調節(jié)因子純品。鹿胎免疫調節(jié)因子產率為每公斤鹿胎可以得到3.5g 鹿胎免疫調節(jié)因子純品。 4)稱取步驟1)中制得的沉淀物，每千克沉淀物加入5升的3mol/L的硫酸，在微波 功率為500W下，水解30分鐘，過濾得到濾液，以Na0H調節(jié)濾液至p朋.0，即得到復合氨基 酸。每公斤鹿胎制備鹿胎提取液后可產生約0.5-0.6kg下腳料沉淀。每克下腳料沉淀經(jīng)微 波輔助酸水解可產生復合氨基酸730mg，每種氨基酸的含量詳見表1。
所用的硫酸也可替換成鹽酸或硝酸。
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權利要求
一種鹿胎深加工方法，其特征在于取新鮮鹿胎盤除去筋、膜，剪碎；按重量比，鹿胎盤∶生理鹽水為1∶1.5～2.5取料，研磨機中研磨、充分勻漿；-40～-20℃冷凍，室溫下融化，反復冷凍和融化3～5次，離心，上清液為胎盤提取液，沉淀物備用；取胎盤提取液，按胎盤提取液與丙酮的體積比為2～4∶1，加入丙酮，混勻后，離心，取上層清液；再按所收集上層清液與丙酮的體積比為2～4∶1，加入丙酮，充分混勻后，離心，收集上層清液減壓蒸餾，再經(jīng)0.45μm膜和0.22μm膜除菌，在0.5kg/cm2條件下超濾，超濾模板選用10000NMWL，得活性鹿胎素提取液。
2. 按照權利要求1所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步驟將得到的活性 鹿胎素提取液經(jīng)冷凍干燥制得活性鹿胎素干粉。
3. 按照權利要求1所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步驟取活性鹿胎 素提取液，經(jīng)超濾模板IOOOONMWL，超濾壓力0. 5kg/cm2下超濾，透析，收集分子量3000 8000dal活性成分，利用S印hadexG25凝膠過濾層析脫鹽后用0. 22 y m膜除菌，得鹿胎免疫 調節(jié)因子提取液。
4. 按照權利要求3所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步驟鹿胎免疫調節(jié) 因子提取液經(jīng)冷凍干燥制得鹿胎免疫調節(jié)因子純品。
5. 按照權利要求1或3所述的鹿胎深加工方法，其特征在于包括如下步驟稱取沉淀 物，每千克沉淀物加入4 6升的2 4mol/L的酸，在微波功率為500W下，水解10 50 分鐘，過濾得到濾液，調節(jié)濾液至pH6. 0，即得到復合氨基酸；所述的酸是硫酸、鹽酸或硝酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鹿胎深加工方法。技術方案是按重量比1∶1.5～2.5，取鹿胎盤和生理鹽水，研磨勻漿；-40～-20℃冷凍、室溫下融化，反復凍融，離心，上清液為胎盤提取液，沉淀物備用。取胎盤提取液，加入丙酮，混勻，離心，收集上層清液。再按相同比例添加丙酮，混勻，離心，上層清液經(jīng)減壓蒸餾，除菌、超濾得活性鹿胎素提取液。取活性鹿胎素提取液，經(jīng)超濾和透析，收集分子量3000～8000dal成分，經(jīng)凝膠過濾層析脫鹽，過膜除菌得鹿胎免疫調節(jié)因子提取液。將沉淀物利用微波輔助酸水解得復合氨基酸。本發(fā)明可從鹿胎中提取更多生物活性物質，不僅使廢棄蛋白質資源得到充分利用，又可降低其處理成本，同時避免造成環(huán)境污染。
文檔編號A23K1/10GK101703259SQ20091021967
公開日2010年5月12日 申請日期2009年11月5日 優(yōu)先權日2009年11月5日
發(fā)明者胡風慶, 邊媛媛 申請人:遼寧大學