專利名稱：齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用石斛的種苗培養(yǎng)方法，尤其涉及一種齒瓣石斛種子無菌快速繁殖 方法。
背景技術(shù)：
石斛是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，齒瓣石斛是石斛類中的佳品，多附生于高山巖石 和樹上，近年來由于齒瓣石斛市場較好，人們對其進行掠奪式采摘，野生資源瀕臨枯竭。近 年來，人們采用傳統(tǒng)分株栽培和扦插對齒瓣石斛進行人工繁殖，但由于母株的叢生依賴性 較強，不僅原材料損失大，而且傷口易感染病害，抗逆性下降，導(dǎo)致種苗繁殖速度慢、種苗不 整齊，成活率低。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服傳統(tǒng)齒瓣石斛種苗繁殖方法上的不足，本發(fā)明提供一種齒瓣石斛種子無 菌快速繁殖方法，該方法可以提高齒瓣石斛的種苗繁殖速度和增值倍數(shù)，有利于齒瓣石斛 種苗工廠化生產(chǎn)。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是以齒瓣石斛成熟未開裂的蒴果為外 植體，經(jīng)消毒處理后，首先切開果皮，對種胚進行萌發(fā)培養(yǎng)，通過培養(yǎng)，形成大量的原球莖； 然后對原球莖進行增殖培養(yǎng)，形成大量的叢生芽或類原球莖；再對叢生芽進行壯苗生根培 養(yǎng)，可以形成帶根、莖、葉完整植株試管苗；最后通過對試管苗煉苗移栽后獲得大量優(yōu)質(zhì)種
田ο本發(fā)明的有益效果是，可提高齒瓣石斛種苗繁殖速度和增值倍數(shù)，苗齊、苗壯，利 于進行工廠化生產(chǎn)。
具體實施例方式選取齒瓣石斛成熟未開裂的蒴果為外植體，具體方法包括下述步驟(1)外植體 選取與消毒選取成熟未開裂的蒴果，用75%的酒精浸泡Imin后置于0. 的升汞溶液中 消毒15 20min，再用無菌水沖洗5 6次；(2)萌發(fā)培養(yǎng)切開蒴果皮，將金黃色粉末狀胚 接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，萌發(fā)培養(yǎng)基為花寶1號(N P K = 7 6 19)3克/升+LH(水 解乳蛋白)1克/升+蔗糖25克/升，萌發(fā)培養(yǎng)基ρΗ5. 8 6. 2，培養(yǎng)溫度25 27°C，光 照強度1500 2000Lx，每天光照12小時，培養(yǎng)時間40 45天，形成直徑Imm左右的綠色 原球莖；(3)增殖培養(yǎng)將原球莖接種到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA(6-芐基腺 嘌呤)0· 1 1.0毫克/升+離々(0-萘乙酸)0· 1 1.0毫克/升+紅薯汁50 100克/ 升+CH(水解酪蛋白)1克/升+活性炭0. 5 2. 0克/升+蔗糖30克/升，增殖培養(yǎng)基 PH5. 8 6. 2，培養(yǎng)溫度25 27°C，光照強度1500 2000Lx，每天光照12小時，培養(yǎng)時間 50 60天，形成高1 3厘米的叢生芽或類原球莖混合組織；(4)壯苗生根培養(yǎng)將叢生芽 轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基中，壯苗生根培養(yǎng)基為1/2MS+IAA (吲哚乙酸)0. 1 1.0毫克/升+ΝΑΑ0. 1 1. 0毫克/升+L-半胱氨酸0. 01 0. 05毫克/升+馬鈴薯汁50 100克/升 +香蕉汁50 150克/升+活性炭1. 0 3. 0克/升+蔗糖20克/升，壯苗生根培養(yǎng)基 PH5. 8 6. 2，培養(yǎng)溫度25 27°C，光照強度1500 2000Lx，每天光照12小時，培養(yǎng)時間 50 60天，培育出帶根、莖、葉完整植株試管苗；(5)試管苗煉苗移栽當(dāng)試管苗長3片伸 展葉以上、株高5cm以上、根長3cm以上時，將攜苗的試管轉(zhuǎn)移到大棚在自然光下煉苗10 15天，然后將苗從試管中取出，洗凈附于根部的培養(yǎng)基，用0. 的多菌靈溶液浸泡IOmin 后，移栽至移栽基質(zhì)上，移栽基質(zhì)先進行殺菌處理，移栽基質(zhì)由木炭末、椰子殼粉末、鋸末從 下至上分層排列于大棚苗床上，其厚度分別為lcm、4Cm、5Cm，移栽時以3株/叢置于鋸末上， 大棚溫度控制在20 32°C，空氣相對濕度60 80 %，蔭蔽度為75 85 %，光照度6000 12000LX，待苗直立時，用低濃度母液或化肥溶液進行葉面噴施，移栽的成活率達90%以上， 2 3個月后，可獲得大批優(yōu)質(zhì)種苗。
權(quán)利要求
一種齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法，其特征是以齒瓣石斛成熟未開裂的蒴果為外植體，經(jīng)消毒處理后，首先切開果皮，對種胚進行萌發(fā)培養(yǎng)，通過培養(yǎng)，形成大量的原球莖；然后對原球莖進行增殖培養(yǎng)，形成大量的叢生芽或類原球莖；再對叢生芽進行壯苗生根培養(yǎng)，可以形成帶根、莖、葉完整植株試管苗；最后通過對試管苗煉苗移栽后獲得大量種苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法，其特征是，外植體選取與 消毒選取成熟未開裂的蒴果，用75%的酒精浸泡Imin后置于0. 的升汞溶液中消毒 15 20min，再用無菌水沖洗5 6次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法，其特征是，萌發(fā)培養(yǎng)切 開蒴果皮，將金黃色粉末狀胚接種到萌發(fā)培養(yǎng)基上，萌發(fā)培養(yǎng)基為花寶1號(N P K = 7:6: 19)3克/升+LH(水解乳蛋白)1克/升+蔗糖25克/升，萌發(fā)培養(yǎng)基pH5.8 6. 2，培養(yǎng)溫度25 27°C，光照強度1500 2000Lx，每天光照12小時，培養(yǎng)時間40 45 天，形成直徑Imm左右的綠色原球莖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法，其特征是，增殖培養(yǎng)將 原球莖接種到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA(6-芐基腺嘌呤)0. 1 1.0毫克/升 +ΝΑΑ(α-萘乙酸)0. 1 1.0毫克/升+紅薯汁50 100克/升+CH(水解酪蛋白)1克/ 升+活性炭0. 5 2. 0克/升+蔗糖30克/升，增殖培養(yǎng)基ρΗ5. 8 6. 2，培養(yǎng)溫度25 270C，光照強度1500 2000Lx，每天光照12小時，培養(yǎng)時間50 60天，形成高1 3厘米 的叢生芽或類原球莖混合組織。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法，其特征是，壯苗生根培養(yǎng) 將叢生芽轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基中，壯苗生根培養(yǎng)基為1/2MS+IAA(吲哚乙酸)0. 1 1.0 毫克/升+ΝΑΑ0. 1 1. 0毫克/升+L-半胱氨酸0. 01 0. 05毫克/升+馬鈴薯汁50 100克/升+香蕉汁50 150克/升+活性炭1. 0 3. 0克/升+蔗糖20克/升，壯苗生 根培養(yǎng)基ΡΗ5. 8 6. 2，培養(yǎng)溫度25 27°C，光照強度1500 2000Lx，每天光照12小時， 培養(yǎng)時間50 60天，培育出帶根、莖、葉完整植株試管苗。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法，其特征是，試管苗煉苗移 栽當(dāng)試管苗長3片伸展葉以上、株高5cm以上、根長3cm以上時，將攜苗的試管轉(zhuǎn)移到大 棚在自然光下煉苗10 15天，然后將苗從試管中取出，洗凈附于根部的培養(yǎng)基，用0. 1 % 的多菌靈溶液浸泡IOmin后，移栽至移栽基質(zhì)上，移栽基質(zhì)先進行殺菌處理，移栽基質(zhì)由木 炭末、椰子殼粉末、鋸末從下至上分層排列于大棚苗床上，其厚度分別為lCm、4Cm、5Cm，移栽 時以3株/叢置于鋸末上，大棚溫度控制在20 32°C，空氣相對濕度60 80 %，蔭蔽度為 75 85%，光照強度6000 12000LX，待苗直立時，用低濃度母液或化肥溶液進行葉面噴 施，2 3個月后，可獲得大批優(yōu)質(zhì)種苗。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種齒瓣石斛種子無菌快速繁殖方法，涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過下述方案得以實現(xiàn)以齒瓣石斛成熟未開裂的蒴果為外植體，經(jīng)消毒處理后，首先切開果皮，對種胚進行萌發(fā)培養(yǎng)，形成大量的原球莖；然后對原球莖進行增殖培養(yǎng)，形成大量的叢生芽或類原球莖混合組織；再對叢生芽進行壯苗生根培養(yǎng)，形成大量帶根、莖、葉完整植株試管苗；最后通過對試管苗煉苗移栽后獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗。該方法可提高齒瓣石斛的種苗繁殖速度和增值倍數(shù)，苗齊、苗壯，利于進行工廠化生產(chǎn)。
文檔編號A01G31/00GK101889547SQ20091014551
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月22日
發(fā)明者季麗坤, 李守嶺, 白燕冰, 高燕 申請人:云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所