專利名稱：：一種木霉高孢粉可濕性粉劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥，更具體地說，本發(fā)明涉及一種木霉活體生物制劑及其制備方法
背景技術(shù)：
：木霉作為一類生防絲狀真菌，早在20世紀30年代就應(yīng)用于土傳真菌病害的生物防治。近幾十年來，隨著溫室栽培技術(shù)的廣泛應(yīng)用，木霉也漸漸用于一些頑固性葉部病害，如灰霉病、白粉病、葉霉病等的生物防治。木霉對植物病原真菌的拮抗作用主要表現(xiàn)為產(chǎn)生抗生素、重寄生作用、溶菌作用、競爭作用等。其中，木霉的竟?fàn)幾饔?、重寄生作用在抑制病原真菌過程中發(fā)揮著重要的作用。'木霉的制劑，目前以麥麩粉劑為主，最近幾年，針對其存活期短的缺點，陸續(xù)出現(xiàn)了一些制劑化的木霉產(chǎn)品，如加入大量的硅藻土粉劑化、進行包衣丸化成顆粒劑，大大改善了木霉的存活條件，延長了保存期，穩(wěn)定了菌劑質(zhì)量，保障了防治效果。這些制劑除極個別使用木霉有效提取物外，絕大多數(shù)是采用活體，包括菌絲體、分生孢子、厚垣孢子，即依然以活體農(nóng)藥為主，其生物相容性僅見卜2篇文獻報道。因此，木霉活體生物制劑還需要進一步改進，也需要開發(fā)一些實用的新劑型。木霉是活體菌劑，作為殺真菌劑，其制劑性能是影響藥劑效果的關(guān)鍵因數(shù)。木霉的制劑化必需盡可能地充分考慮與木霉的生物相容性，創(chuàng)造一個有利于存活的條件，而且施用后，需要提供一個有利于木霉孢子萌發(fā)、定殖、存活的微生態(tài)環(huán)境。因此，在木霉劑型中添加能使孢子存活、免受各種環(huán)境因子如紫外線傷害的物質(zhì)，抑制與木霉竟?fàn)幍娜~面微生物的物質(zhì)，促進木霉迅速占據(jù)生態(tài)位點、并形成優(yōu)勢種群的物質(zhì)，必將改善木霉菌劑的實際使用效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，特別是微生物農(nóng)藥速效性差的弊端，提供一種活性高、效果穩(wěn)定、易儲藏、方便運輸、使用簡便的生物制劑。同時，本發(fā)明還提供該生物制劑的制備方法。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實現(xiàn)。*除非另有說明，本發(fā)明中所釆用的百分數(shù)均為質(zhì)量百分數(shù)。本發(fā)明提供了一種木霉高孢粉可濕性粉劑，原料組成的質(zhì)量百分數(shù)為木霉高孢粉5%~6%敵克松原粉1%~2%硅藻土或膨潤土85°/。~90%木質(zhì)素磺酸鈉2%3%活性炭0.50/。~1.0%村檬酸0.1%~0.5%羧甲基纖維素鈉1%~2%本發(fā)明所釆用的生防菌株其分類命名為綠色木霉(7>/c/zo&rmavzW&)TV-1，保藏編號為CGMCCNo.2848;所述的木霉高孢粉是利用旋風(fēng)分離獲得的木霉高孢粉，所述的木霉高孢粉孢子含量為100~1000億個/克，活孢率80%以上。所述的敵克松原粉為化學(xué)殺菌劑，起到克服木霉藥效遲緩性、增加殺菌效果的作用，是木霉高孢粉可濕性粉劑的增效劑。所述的活性炭是光保護劑，檸檬酸是pH調(diào)節(jié)劑?；钚蕴勘Ｗo孢子的活性；杼檬酸調(diào)節(jié)微環(huán)境，促進孢子的存活、萌發(fā)、定殖。所述的硅藻土或膨潤土是吸附劑，木質(zhì)素磺酸納是分散劑，羧甲基纖維素鈉是增粘劑。硅藻土或膨潤土另外的一個重要特征是與木霉具有良好的生物相容性，可提供一個有利于木霉孢子存活的環(huán)境，延長木霉高孢粉可濕性粉劑的保質(zhì)期。本發(fā)明提供了一種木霉高孢粉可濕性粉劑的制備方法，該方法包括以下步驟(1)將木霉高孢粉、敵克松原粉、硅藻土或膨潤土、木質(zhì)素磺酸鈉、活性炭、檸檬酸、羧甲基纖維素鈉按質(zhì)量配比混合均勻；(2)原料預(yù)粉碎，再經(jīng)過氣流粉碎，過325目標(biāo)準(zhǔn)篩；(3)質(zhì)量檢驗，滿足木霉孢子含量5億個/克以上、活孢率80%以上、濕潤性小于2分鐘、懸浮率70%以上、細度(過325目標(biāo)準(zhǔn)篩)99%以上、水分含量小于2%、pH值56等條件的，為合格的木霉高孢粉可濕性粉劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下突出的優(yōu)點1.木霉高孢粉是通過液固兩相一步法培養(yǎng)，固體培養(yǎng)物產(chǎn)抱后，再經(jīng)過旋風(fēng)集孢而獲得的。這樣孢子粉中夾帶的培養(yǎng)物少，孢子純度高，大大增強了可濕性粉劑的懸浮、分散性能。獲得的高孢子粉含量達1001000億個/克，含水量低于3%，99%的可通過325目標(biāo)準(zhǔn)篩，活孢率90°/。以上。2.在吸附劑、增效劑等的選擇上，注重其與木霉孢子的生物相容性，選擇的這些成分對孢子的萌發(fā)和菌絲及產(chǎn)孢沒有影響或影響較小。增效劑在可濕性粉劑配方中可顯著抑制孢子的萌發(fā)，但施用時稀釋可解除其抑制作用，而對其它真菌仍然存在較強的抑制作用。3.產(chǎn)品性能指標(biāo)優(yōu)良，木霉孢子含量5億個/克以上、活孢率80%以上、濕潤性小于2分鐘、懸浮率70%以上、細度(過325目標(biāo)準(zhǔn)篩)99%以上、水分含量小于2%、pH值56、存儲1年以上活孢率仍然在70%以上，符合可濕性粉劑農(nóng)藥制劑的商品標(biāo)準(zhǔn)要求。保藏生物材料的說明本發(fā)明的生防菌株分類命名為綠色木霉(7Hc/2o&，avzW&)TV-1,保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址北京巿朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2009年01月06日；保藏登記入冊的編號CGMCCNo.2848。具體實施例方式通過下面給出的具體實施例和應(yīng)用實施例，可以進一步清楚地了解本發(fā)明。但它們不是對本發(fā)明保護范圍的限定。實施例1—一制劑化中的生物相容性試驗1.材料與方法1.1材料硅藻土、膨潤土、滑石粉、輕質(zhì)碳酸鈣共四種吸附劑。增效劑為木霉半選擇性培養(yǎng)基中所用的敵克松原藥粉，主要是篩選其用量。1.2方法1.2.1吸附劑的篩選對分生孢子萌發(fā)的影響將各種供試吸附劑與木霉高孢粉按9:1的比例混合均勻，于2628'C培養(yǎng)箱中放置5d,釆用木霉半選擇性培養(yǎng)液TSM[MgS04.7H200.2g;K2HP040.9g;KC10.25g;NH4N03l,Og;葡萄糖3.0g;氯霉素0.25g;虎紅0.15g;敵克松可濕性粉劑(有效成分敵磺鈉)0.3g;五氯硝基苯素(PCNB)0.2g;H20lOOOml。]26~28°C、150r/m振蕩培養(yǎng)24h，血球記數(shù)板計測孢子萌發(fā)率，以木霉高孢粉為對照。對菌絲生長及產(chǎn)孢的影響以5M的比例將各種供試吸附劑加入PDA培養(yǎng)基滅菌后制成平板,用滅菌打孔器接入①0.5cm新鮮培養(yǎng)的木霉TV-l菌絲塊，27.5'C光照培養(yǎng)9d，統(tǒng)計每皿產(chǎn)孢量及菌落日生長量(mm),以未加吸附劑的PDA為對照。吸附劑比較、篩選對試驗測得的3個指標(biāo)，與對照進行差異性分析，篩選適宜的吸附劑。1.2.2增效劑農(nóng)藥的配比對分生孢子萌發(fā)的影響將適宜的吸附劑以9:1的比例與高孢粉混勻，制成混合物，再將混合物與增效劑農(nóng)藥分別按19:1、9:1、8:2、7:3的比例混合，計測孢子萌發(fā)率。對菌絲生長及產(chǎn)孢的影響將增效劑農(nóng)藥以實際施用的濃度(500x)分別按吸附劑和高孢粉形成的混合物與增效劑農(nóng)藥19:1、9:1、8:2、7:3的比例折算的濃度(即10,000x、5,000x、2,500x、1,250x)加入滅菌冷卻至55~60°C的PDA培養(yǎng)基中搖勻倒平板，接菌絲塊、測定、統(tǒng)計。2.結(jié)果與分析2.1吸附劑的篩選吸附劑的篩選結(jié)果見表1，對分生孢子萌發(fā)的影響及對菌絲生長及產(chǎn)孢的影響試驗測得的3個指標(biāo)與對照進行比較、進行差異性分析，從表中可以看出，吸附劑硅藻土除產(chǎn)孢量有所減少外，孢子萌發(fā)率(即為活孢率)及菌落曰生長量與對照無差異，是較為適宜的吸附劑；吸附劑膨潤土與對照有一定的差異，綜合比較，可作為高孢粉的吸附劑使用；吸附劑滑石粉不能產(chǎn)孢，6嚴重影響菌絲的生長，吸附劑輕質(zhì)碳酸鈣對菌絲生長影響較大，這兩種吸附劑都不宜作為高孢粉的吸附劑使用。表l.不同吸附劑對木霉的活力影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.2增效劑農(nóng)藥的配比增效劑農(nóng)藥對分生孢子萌發(fā)的影響及對菌絲生長及產(chǎn)孢的影響試驗測得的3個指標(biāo)與對照進行比較、進行差異性分析，可以看出(表2),增效劑農(nóng)藥與吸附劑和高孢粉混合物以19:1的比例混合不影響孢子萌發(fā)、菌絲生長及產(chǎn)孢量；9:1的比例混合對菌絲生長及產(chǎn)孢量影響較小，不影響孢子萌發(fā)。因此，增效劑農(nóng)藥以19:1的比例與吸附劑和高孢粉混合物混合較合適，即增效劑農(nóng)藥在整個配方中可占5%。表2.增效劑農(nóng)藥對木霉的活力影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例2將800億個/克、活孢率90。/。以上木霉高孢粉5Kg,敵克松原粉2Kg,木質(zhì)素磺酸鈉3Kg,活性炭lKg,檸檬酸0.5Kg,羧甲基纖維素鈉2Kg，加到86.5Kg硅藻土內(nèi)，在混合機中充分混勻，垂直預(yù)粉碎，再經(jīng)過氣流粉碎，過325目標(biāo)準(zhǔn)篩，質(zhì)量檢驗，滿足木霉孢子含量5億個/克以上、活孢率80%以上、濕潤性小于2分鐘、懸浮率70%以上、細度(過325目標(biāo)準(zhǔn)篩)99%以上、水分含量小于2%、pH值56等條件的，為合格的木霉高孢粉可濕性粉劑。實施例3將600億個/克、活孢率90。/。以上木霉高孢粉6Kg，敵克松原粉1.5Kg,木質(zhì)素磺酸鈉2.5Kg，活性炭lKg，檸檬酸0.5Kg，羧甲基纖維素鈉1.5Kg，加到87Kg膨潤土內(nèi)，在混合機中充分混勻，垂直預(yù)粉碎，再經(jīng)過氣流粉碎，過325目標(biāo)準(zhǔn)篩，質(zhì)量檢驗，滿足木霉孢子含量5億個/克以上、活孢率80%以上、濕潤性小于2分鐘、懸浮率70%以上、細度(過325目標(biāo)準(zhǔn)篩)99%以上、水分含量小于2%、pH值56等條件的，為合格的木霉高應(yīng)用實施例1一一防治煙草赤星病的效果1.材料與方法1.1供試材料供試菌株強致病力赤星病菌株97Aa003為本實驗室分離、篩選獲得，所用培養(yǎng)基為燕麥培養(yǎng)基。供試藥劑本發(fā)明可濕性粉劑，采用生防菌株TV-1(中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏編號為CGMCCNo.2848);對照藥劑菌核凈(浙江生產(chǎn))。供試煙草品種為K326。1.2方法1.2.1離體防效測定離體葉片的準(zhǔn)備釆摘K326煙株中部黃綠色健康葉1~2片，洗潔精漂洗后，浸入l%NaC10溶液中表面消毒23min,無菌水漂洗清除葉面的NaClO,晾干表水，備用。離體葉片的接種將制備的赤星病菌孢子液(孢子濃度為106個/1111)分別與等體積稀釋25倍、250倍、500倍的本發(fā)明可濕性粉劑混勻后，釆用懸滴法將制備的混合孢子液滴在離體葉片上，同一葉片滴同濃度的的孢子混合液，共滴加10滴，記號筆點記接種位點，每濃度接3張葉片，以滴1%葡萄糖溶液作空白對照，置26'C保濕箱中培養(yǎng)57d。按病情嚴重度計測病指，并根據(jù)病指計算防效。1.2.2對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定，在云南省煙草科學(xué)研究所研和基地試驗田中進行，共設(shè)3個處理。每個處理設(shè)l個小區(qū)，重復(fù)4次，小區(qū)隨機排列，每小區(qū)植煙200株，中間、四周設(shè)保護行間隔。具體處理如下，處理A:500倍本發(fā)明可濕性粉劑；處理B:500倍菌核凈藥劑對照；處理C:清水空白對照。3個處理均為噴施，施用時間為去腳葉后進入釆烤期時。病情調(diào)查在施用前后均應(yīng)進行，即施用當(dāng)天及施用15天后調(diào)查病情。調(diào)查時五點取樣，定株定點調(diào)查，每次只需調(diào)查煙株底部往上數(shù)的6片葉。記載標(biāo)準(zhǔn)釆用煙草病害調(diào)查的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T39-1996進行。統(tǒng)計病指，以病指增長計算防效。2.結(jié)果與分析2.1離體防效測定離體防效測定結(jié)果見表3。從表3可看出，隨著本發(fā)明可濕性粉劑中生防菌株TV-1孢子濃度的增加，防效愈顯著。當(dāng)本發(fā)明可濕性粉劑中生防菌株TV-1孢子濃度低于赤星病菌孢子濃度時，防效大為降低。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2.2對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定結(jié)果(見表4)表明，本發(fā)明可濕性粉劑對煙草赤星病的防效達75%以上，與菌核凈效果相當(dāng)。_表4.藥劑對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定處理調(diào)查次序-ABC15.207.569.7026.256.6014.15防效(％)_76.40__——注表中調(diào)査次序編號后的數(shù)據(jù)為4次重復(fù)的病指平均數(shù)。應(yīng)用實施例2一一防治煙草白粉病的效果1.材料與方法1.1供試材料供試藥劑本發(fā)明可濕性粉劑，釆用生防菌株TV-1(中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏編號為CGMCCNo.2848);對照藥劑粉銹靈。供試煙草品種為香料煙云香巴斯瑪1號。1.2方法對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定，在云南省保山香料煙種植區(qū)的昌寧柯街進行，共設(shè)3個處理。每個處理設(shè)l個小區(qū)，重復(fù)4次，小區(qū)隨機排列，每小區(qū)植煙800株，中間、四周設(shè)保護行4行以上間隔。具體處理如下，處理a:500倍本發(fā)明可濕性粉劑；處理b:1000倍粉銹靈藥劑對照；處理c:清水空白對照。3個處理均為噴施。施用時間為團棵封行，白粉病初發(fā)時。病情調(diào)查在施用前后均應(yīng)進行，即施用當(dāng)天及施用7天后調(diào)查病情。調(diào)查時五點取樣，定株定點調(diào)查，每次調(diào)查煙株所有葉片。記載標(biāo)準(zhǔn)采用煙草病害調(diào)查的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T39-1996中葉斑病的方法進行。統(tǒng)計病指，以病指增長計算防效。2.結(jié)果與分析對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定結(jié)果(見表5)表明，本發(fā)明可濕性粉劑對煙草白粉病的防效達65°/。以上，與粉銹靈效果相當(dāng)。10表5.藥劑對小區(qū)自然發(fā)病煙株的防效測定調(diào)查次序處理3b12防效(％)2.277.0166.433.487,8668.983.2417.36注表中調(diào)查次序編號后的數(shù)據(jù)為4次重復(fù)的病指平均數(shù)。權(quán)利要求1.一種木霉高孢粉可濕性粉劑，其特征在于原料組成的質(zhì)量百分數(shù)為木霉高孢粉5％～6％敵克松原粉1％～2％硅藻土或膨潤土85％～90％木質(zhì)素磺酸鈉2％～3％活性炭0.5％～1.0％檸檬酸0.1％～0.5％羧甲基纖維素鈉1％～2％其中，所述的木霉高孢粉采用的生防菌株其分類命名為綠色木霉(Trichodermaviride)TV-1，保藏編號為CGMCCNo.2848。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的木霉高孢粉可濕性粉劑，其特征在于所述的木霉高孢粉孢子含量為100-1000億個/克，活孢率80%以上。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的木霉高孢粉可濕性粉劑，其特征在于，所述的制備方法采用以下步驟(1)將木霉高孢粉、敵克松原粉、硅藻土或膨潤土、木質(zhì)素磺酸鈉、活性炭、檸檬酸、羧甲基纖維素鈉按質(zhì)量配比混合均勻；(2)原料預(yù)粉碎，再經(jīng)過氣流粉碎，過325目標(biāo)準(zhǔn)篩；(3)質(zhì)量檢驗，滿足木霉孢子含量5億個/克以上、活孢率80%以上、濕潤性小于2分鐘、懸浮率70%以上、細度(過325目標(biāo)準(zhǔn)篩)99%以上、水分含量小于2%、pH值56等條件的，為合格的木霉高孢粉可濕性粉劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種木霉高孢粉可濕性粉劑及其制備方法。原料組成的質(zhì)量百分數(shù)為，木霉高孢粉5％～6％，敵克松原粉1％～2％，硅藻土或膨潤土85％～90％，木質(zhì)素磺酸鈉2％～3％，活性炭0.5％～1.0％，檸檬酸0.1％～0.5％，羧甲基纖維素鈉1％～2％，其中，所述的木霉高孢粉采用的生防菌株其分類命名為綠色木霉(Trichodermaviride)TV-1，保藏編號為CGMCCNo.2848。將各原料混合均勻，經(jīng)預(yù)粉碎，再經(jīng)過氣流粉碎，過325目標(biāo)準(zhǔn)篩；經(jīng)質(zhì)量檢驗，滿足木霉孢子含量5億個/克以上、活孢率80％以上、濕潤性小于2分鐘、懸浮率70％以上、細度(過325目標(biāo)準(zhǔn)篩)99％以上、水分含量小于2％、pH值5～6等條件的，為合格的木霉高孢粉可濕性粉劑。文檔編號A01N25/14GK101574091SQ20091009428公開日2009年11月11日申請日期2009年4月1日優(yōu)先權(quán)日2009年4月1日發(fā)明者宋春滿,方敦煌,革王,鄧云龍,鄧建華,顧金剛申請人:云南省煙草科學(xué)研究所