專利名稱：北美海蓬子通過組織培養(yǎng)的快速繁苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及北美海蓬子的繁苗方法，尤其是一種北美海蓬子通過組織 培養(yǎng)的快速繁苗方法。
背景技術(shù)：
北美海蓬子(Salicornia Bigelovii Torr.)，又簡稱為海蓬子，屬于 藜科(Chenopodiaceae)、海蓬子屬(Salicornia)，也有譯作鹽角草屬，是 一種耐鹽性極強(qiáng)的真鹽生植物?？梢杂煤Ｋ苯訚补?，可以在沿海灘涂種 植。耐鹽極限達(dá)到5XNaCl濃度。海蓬子是由美國亞利桑那大學(xué)環(huán)境研究 室從全球范圍內(nèi)搜集到的1300多種野生鹽生植物中篩選出的最具有經(jīng)濟(jì) 價值的真鹽生植物，可作為無公害蔬菜、動物青飼料和生物能源物質(zhì)栽培 應(yīng)用。作為蔬菜栽培，采其幼嫩莖葉和幼嫩籽莢，清炒、做色拉或腌制。2001 年，海蓬子在江蘇鹽城沿海灘涂引種成功。目前海蓬子在江蘇鹽城地區(qū)海 邊灘涂推廣面積達(dá)到2000畝，作為有機(jī)和無公害海水蔬菜進(jìn)入高檔賓館 的餐桌，供不應(yīng)求。我國海岸線長，適合種植海蓬子的海邊灘涂面積巨大。
傳統(tǒng)的北美海蓬子繁殖方法主要采用種子播種的繁殖方法，海蓬子幼 苗在早期生長極其緩慢，管理困難，幼苗成活率低，需要花費(fèi)較大的人力 物力。此外，海蓬子的品種較為單一，海蓬子通過組織培養(yǎng)快速繁苗方 法的建立，為海蓬子進(jìn)行遺傳改良操作提供了新的途徑。
CWLee (1992年)取在盆缽中生長2個月的海蓬子幼苗莖尖，進(jìn)行組織 培養(yǎng)，建立了海蓬子的組培繁苗體系(CW Lee. In Wtro Propagation of Sa/z'corm'a by Shoot-tip Cultures. Hortscience, 1992, 27(5):472.)。但
是海蓬子幼苗生長極其緩慢，管理困難，成活率低。本研究直接取海蓬子 的種子，在培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，操作更為簡便，繁殖系數(shù)更高，在同 樣的時間內(nèi)可以繁殖更多的海蓬子幼苗。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對傳統(tǒng)的北美海蓬子繁殖方法存在的問題，提 供一種通過組織培養(yǎng)的快速繁苗方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的 一種北美海蓬子通過組織培養(yǎng)的快速繁 苗方法，組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，其特征在于萌發(fā)生
芽培養(yǎng)基為MS+TDZ l.Omg/L +NaCl 8.0g/L;增殖培養(yǎng)基為MS+TDZ 1.0mg/L+BA 2.0mg/L+NaCl 8.0mg/L ; 生根培養(yǎng)基為 1/2MS+IBA 0.3mg/L+KT O.lmg/L+活性炭0.5mg/L+麥芽提取物0.5mg/L+NaCl 8.0 mg/L;具體培養(yǎng)過程為
a) 北美海蓬子的種子接種在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上萌發(fā)健壯的叢生小植
株；
b) 將截取叢生小植株的莖尖、莖段在增殖培養(yǎng)基上繼代增殖； C)將繼代增殖后的小苗在生根培養(yǎng)基上生根；
d)將具有3~6條根的北美海蓬子幼苗移栽于由河沙、泥炭土和園土 三者按體積比l: 1: l配制的基質(zhì)中，移栽成活的幼苗定植于海邊灘涂的 大田中。
在本發(fā)明中所述的北美海蓬子的種子接種在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上萌發(fā) 健壯的叢生小植株是指將北美海蓬子種子在自來水下沖洗干凈，去除漂 浮的發(fā)育不良的種子，用酒精含量為75%的溶液浸泡1分鐘，用無菌水沖 洗一次，用升汞含量0.1%的表面消毒液消毒20分鐘，再用無菌水水洗六 次后，接種于萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上，置于黑暗的條件下培養(yǎng)，萌發(fā)白化的叢 生小植株后，再移到光照下培養(yǎng)，形成健壯的叢生小植株。
在本發(fā)明中所述的將截取叢生小植株的莖尖、莖段在增殖培養(yǎng)基上
繼代增殖是指將健壯的叢生小植株的莖尖或切成L2 1.8cm大小的莖段
接種到增殖培養(yǎng)基上繼代增殖。
在本發(fā)明中所述的將繼代增殖后的小苗在生根培養(yǎng)基上生根是指 將繼代增殖后高于2.0cm的北美海蓬子幼苗接種到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。本發(fā)明的優(yōu)點在于應(yīng)用組織培養(yǎng)的手段，克服北美海蓬子常規(guī)育苗 苗期生長緩慢，管理困難，幼苗成活率低，需要花費(fèi)較大的人力物力等缺 點，達(dá)到工廠化快速育苗，以適應(yīng)生產(chǎn)上對北美海蓬子的大量需求。同時， 由于組織培養(yǎng)時直接選取北美海蓬子的種子，拓寬了北美海蓬子組培快繁 的取材范圍，組織培養(yǎng)中能對每個環(huán)節(jié)實施監(jiān)控，大大提高了繁殖速度和 移栽成活率。


圖1是北美海蓬子種子在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上形成白化叢生芽； 圖2是組織培養(yǎng)后的具有3~6條根的北美海蓬子幼苗。
具體實施方式
實施例l
萌發(fā)生芽培養(yǎng)基為MS+TDZ 1.0mg/L+NaCl 8.0g/L。 將北美海蓬子的種子用自來水沖洗干凈，去掉漂浮的發(fā)育不良的種 子，置于1升的燒杯中，用酒精含量為75%溶液浸泡1分鐘，用無菌水沖 洗一次，再用升汞含量0.1%的表面消毒液消毒20分鐘，用無菌水水洗六 次。接種于萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上，置于黑暗的條件下培養(yǎng)。接種后3天開始 萌發(fā)，1月左右可以形成4~5個叢生小植株，2月左右可以形成15~20個 叢生小植株，叢生小植株白化，移到光照的條件下培養(yǎng)10天左右，即可 轉(zhuǎn)綠，形成健壯的叢生小植株。 實施例2
增殖培養(yǎng)基為MS+TDZ 1.0mg/L+BA2.0mg/L+NaCl 8.0mg/L。
取實施例1獲得的健壯的叢生小植株的莖尖，并將叢生小植株的莖切 成1.2 1.8cm大小的莖段接種于增殖培養(yǎng)基上，使莖尖及小莖段在增殖培 養(yǎng)基上快速繼代增殖，形成北美海蓬子叢生小苗，月增殖倍數(shù)可達(dá)CWLee 建立的海蓬子的組培繁苗體系的1.5倍以上。
實施例3
生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.3mg/L+KT0.1mg/L+活性炭0.5mg/L+麥芽提取物0.5mg/L+NaCl 8.0mg/L。
將實施例2增殖后高于2cm的幼苗接種在生根培養(yǎng)基上，7天左右開 始有不定根萌發(fā)，20天左右平均每株根數(shù)可達(dá)到3 6條，形成北美海蓬子 幼苗。
實施例4
將具有3~6條根的幼苗移栽于由河沙、泥炭土和園土三者按體積比1:
1: 1的比例配制的基質(zhì)中，澆NaCl含量為1%的鹽水，移栽時苗高一般為 3cm左右，移栽的成活率可以達(dá)到95%以上。移栽l個月左右即可將北美 海蓬子幼苗移植于海邊灘涂的大田。
常規(guī)播種育苗2月中旬取海蓬子種子進(jìn)行盆缽播種，三個重復(fù)，每 個重復(fù)播種100粒，播種在5個盆缽中，每個盆缽20粒。出苗率在40% 左右，由于海蓬子幼苗早期在盆缽生長極其緩慢，成活率低，播后3月左 右，100粒種子平均只有10% 20%的成活率。
以CW Lee (1992年)報道的方法進(jìn)行育苗在盆缽育苗階段，與常規(guī) 播種育苗相似，幼苗成活率低，成活率10% 20%,可取的用于培養(yǎng)的莖 尖材料數(shù)量較少。按照CW Lee (1992年)報道的方法，播種100粒種子進(jìn) 行育苗，播種2月后取莖尖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)2月后，取幼苗進(jìn)行生根培養(yǎng)， 生根培養(yǎng)2月后移栽，l月后移栽成活。由于用該方法培養(yǎng)的幼苗根部有 較多的愈傷組織，雖然根數(shù)較多，但移栽成活率仍然相對較低，在80%左 右。從播種，經(jīng)組織培養(yǎng)到移栽成活需要7個月左右的時間，100粒種子 可以繁殖400株左右的幼苗。
以本發(fā)明的方法，種子直接播種在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上，出芽率在50% 左右，2月左右每個發(fā)芽的種子可增殖形成15 20個叢生小植株，此后移 至增殖培養(yǎng)基上，單個莖尖或1.2 1.8cm大小的莖段可增殖15倍以上。增 殖培養(yǎng)基上形成的幼苗移到生根培養(yǎng)基上20天左右，每株形成3~6條健 壯的根，即可進(jìn)行移栽。在本發(fā)明中幼苗在生根培養(yǎng)基上莖基部只形成根系，而不形成愈傷組織，因此幼苗移栽成活率高，達(dá)到95%以上。本發(fā)明 方法從在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上播種開始到移栽成活，約需5個月，100粒種 子可以繁殖10000株以上的幼苗。遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CW Lee (1992年)報道的方法 和常規(guī)播種育苗方法。
以上各實施例不是對本發(fā)明的具體限制。
權(quán)利要求
1、一種北美海蓬子通過組織培養(yǎng)的快速繁苗方法，組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，其特征在于萌發(fā)生芽培養(yǎng)基為MS+TDZ 1.0mg/L+NaCl 8.0g/L；增殖培養(yǎng)基為MS+TDZ 1.0mg/L+BA 2.0mg/L+NaCl8.0mg/L；生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.3mg/L+KT 0.1mg/L+活性炭0.5mg/L+麥芽提取物0.5mg/L+NaCl 8.0mg/L；具體培養(yǎng)過程為a)北美海蓬子的種子接種在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上萌發(fā)健壯的叢生小植株；b)將截取叢生小植株的莖尖、莖段在增殖培養(yǎng)基上繼代增殖；c)將繼代增殖后的小苗在生根培養(yǎng)基上生根；d)將具有3～6條根的北美海蓬子幼苗移栽于由河沙、泥炭土和園土三者按體積比1∶1∶1配制的基質(zhì)中，移栽成活的幼苗定植于海邊灘涂的大田中。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的北美海蓬子通過組織培養(yǎng)的快速繁苗方法， 其特征在于所述的北美海蓬子的種子接種在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上萌發(fā)健壯 的叢生小植株是指將北美海蓬子種子在自來水下沖洗干凈，去除漂浮的 發(fā)育不良的種子，用酒精含量為75%的溶液浸泡1分鐘，用無菌水沖洗一次，用升汞含量0.1%的表面消毒液消毒20分鐘，再用無菌水水洗六次后，接種于萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上，置于黑暗的條件下培養(yǎng)，萌發(fā)白化的叢生小植 株后，再移到光照下培養(yǎng)，形成健壯的叢生小植株。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的北美海蓬子通過組織培養(yǎng)基的快速繁苗方 法，其特征在于所述的將截取叢生小植株的莖尖、莖段在增殖培養(yǎng)基上繼代增殖是指將健壯的叢生小植株的莖尖或切成1.2~1.8cm大小的莖段接種到增殖培養(yǎng)基上繼代增殖。
4、 據(jù)權(quán)利要求1所述的北美海蓬子通過組織培養(yǎng)的快速繁苗方法， 其特征在于所述的將繼代增殖后的小苗在生根培養(yǎng)基上生根是指將繼 代增殖后高于2.0cm的北美海蓬子幼苗接種到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種北美海蓬子通過組織培養(yǎng)的快速繁苗方法，使用的萌發(fā)生芽培養(yǎng)基為MS+TDZ 1.0mg/L+NaCl 8.0g/L；增殖培養(yǎng)基為MS+TDZ1.0mg/L+BA 2.0mg/L+NaCl 8.0mg/L；生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.3mg/L+KT 0.1mg/L+活性炭0.5mg/L+麥芽提取物0.5mg/L+NaCl 8.0mg/L；培養(yǎng)過程為北美海蓬子的種子接種在萌發(fā)生芽培養(yǎng)基上萌發(fā)健壯的叢生小植株；將截取叢生小植株的莖尖、莖段在增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基上繼代增殖、生根；將具有3～6條根的幼苗移栽于由河沙、泥炭土和園土三者按體積比1∶1∶1配制的基質(zhì)中，移栽成活的幼苗定植于大田中。
文檔編號A01G31/00GK101548643SQ20091002799
公開日2009年10月7日 申請日期2009年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月15日
發(fā)明者任麗娟, 余桂紅, 周淼平, 孫曉波, 旭 張, 柏文娟, 馬鴻翔 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院