專利名稱：一種特異抑制腫瘤細胞和腫瘤新生血管的多肽ERC(N⁵)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)多肽領(lǐng)域，具體地講，涉及一種能夠同時識別腫瘤細胞和 腫瘤新生血管的多肽及其制備和用途。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病。據(jù)WH0 2001年統(tǒng)計，全 球存活的癌癥患者約有8000余萬人，每年新增癌癥患者約1030萬人，死于癌癥 人口有600余萬，居所有疾病死亡率的第二位。在巴黎舉行的世界抗癌大會預(yù)測， 到2020年，全世界每年新增癌癥患者將達到2000萬人，死于癌癥的人數(shù)將超過 1200萬，并主要分布在發(fā)展中國家。惡性腫瘤的危害主要在于其無限的增值能力 和強大的遷移能力。盡管醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展使臨床治療腫瘤的能力有了很大的提 高，但腫瘤轉(zhuǎn)移仍然是腫瘤臨床治療所面臨的最嚴峻挑戰(zhàn)。腫瘤的轉(zhuǎn)移和腫瘤增值與毛細血管新生及多種黏附因子的作用有關(guān)。腫瘤在 生長過程中，首先建立起自身血管網(wǎng)絡(luò)。由于腫瘤生成的基底膜和血管內(nèi)皮均有 缺陷，腫瘤細胞極易穿越其基底膜屏障進入血液循環(huán)，進而向遠端轉(zhuǎn)移和擴散。 腫瘤細胞進入循環(huán)系統(tǒng)后，與白細胞或血小板形成癌栓，在遠端血流緩慢的毛細 血管網(wǎng)處，癌栓粘附微血管內(nèi)皮并誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞裂解。癌細胞穿出微血管后，與 基底膜接觸并通過特殊膜受體結(jié)合基質(zhì)蛋白，完成在遠端組織的轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移的癌 灶進一步誘導(dǎo)新生血管以滿足其過度的增長需要，并在一定的情況下再度發(fā)生轉(zhuǎn) 移。從腫瘤轉(zhuǎn)移過程可以看出，建立自身血管網(wǎng)絡(luò)和誘導(dǎo)新生血管生成，是腫瘤 增值和轉(zhuǎn)移的必備條件。抑制腫瘤新生血管的生成，阻斷腫瘤細胞的營養(yǎng)供應(yīng)， 即可達到抑制或阻斷腫瘤增值與轉(zhuǎn)移的目的，對于腫瘤的防治具有重要的意義。近年來，血管生成抑制劑已成為抗癌研究的熱點之一，幾乎年年召開相關(guān)的 國際性學(xué)術(shù)研討會。血管新生抑制療法有望成為繼化學(xué)療法、放射治療及外科手 術(shù)以外，最具前瞻性的新一類療法。早在1971年，美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院Dr. Folkman首先提出一種理論，解釋抑制新血管生成，可以成為治愈腫瘤的新療法。他認為，血管新生對腫瘤的生長非常重要。當(dāng)腫瘤只有2 3mm大小時，它可依 靠滲透作用自外界取得養(yǎng)份。然而一旦超過這一大小，就需借助新生血管來獲取 養(yǎng)份。經(jīng)過三十多年的研究，迄今已有報道的血管新生抑制劑就有近三十種。雖然 還沒有抗腫瘤血管生成藥物正式應(yīng)用于臨床，但已有一些制劑正在進行基礎(chǔ)及臨 床試驗，并已取得令人振奮的結(jié)果。研究較多的有Angiostatin、 Endostatin、 Echistatm等。Folkman等人在不同的老鼠身上分別接種三種老鼠的腫瘤細胞(肺 癌、纖維肉瘤、網(wǎng)狀細胞肉瘤)，以及三種人類的腫瘤細胞(胰腺癌、大腸癌、乳 癌)。將Angiostatin注入這些老鼠體內(nèi)，可使不同的腫瘤縮小均在95%以上。這些令人振奮的實驗結(jié)果，為人類展現(xiàn)了不久的將來攻克癌癥的曙光。抑制 腫瘤血管新生，以其療效顯著、無副作用、不產(chǎn)生腫瘤耐藥等優(yōu)點，有望成為部 分取代或協(xié)同治療腫瘤的最新手段。然而，血管新生抑制療法在動物實驗中盡管顯示了極大的優(yōu)越性，但是多年 的研究發(fā)現(xiàn)，有些因素限制了血管新生抑制劑的推廣和應(yīng)用，如以Angiostatin為 例，它是目前被認為最強的血管生成抑制因子，具有高效抑制腫瘤新生血管形成、 超大劑量在人體中無毒副作用以及反復(fù)使用不出現(xiàn)耐藥性等優(yōu)點。但是，治療所 需劑量很大且需每天進行，對于患者來講，高額費用不堪重負，制約了漫長期限 的臨床應(yīng)用。其次是，血管新生抑制療法屬于惡性腫瘤綜合治療的一部分，并不 能完全替代其它療法。血管生成抑制劑是通過抑制腫瘤血管生成，扼制腫瘤的生 長、轉(zhuǎn)移，通常只能使腫瘤細胞處于蟄伏狀態(tài)，并不直接殺死腫瘤細胞。單獨應(yīng) 用這種方法難以治愈腫瘤，對于原發(fā)腫瘤，還需結(jié)合手術(shù)、放療、化療等手段進 行綜合治療。基于現(xiàn)有血管新生抑制劑的局限性，科學(xué)家們?nèi)栽诶^續(xù)研究新的血管生成抑 制劑，不斷探索療效確切、成本低廉的血管新生抑制療法。新近的研究報告指出，整合素(Integrin)家族成員之一的 &，在血管新生 過程中扮演著非常重要的角色。％/33在正常機體的血管中檢測不到，但是內(nèi)皮細 胞受到血管新生促進因子刺激活化時，則會大量表現(xiàn)出來，并且引發(fā)血管新生的 信息傳遞與內(nèi)皮細胞的激活；與此同時，a^3在許多腫瘤細胞如結(jié)腸癌細胞、骨 肉瘤細胞、黑色素瘤細胞等表面也有表達，并且發(fā)現(xiàn)，在這些腫瘤細胞表面，還達。這些整合素可以被去整合素(Disintegrin)特異的超二級 結(jié)構(gòu)RGD (Arg-Gly-Asp)模體識別并結(jié)合，使得 /33、 a5^的功能被抑制。研究 證明，去整合素作用于C^53，可以抑制腫瘤細胞或生長因子所引發(fā)的血管新生作 用，同時可以導(dǎo)致增生血管細胞的程序性凋亡(apoptosis);去整合素還可以通 過抑制腫瘤細胞表面avft、 a5^受體，抑制腫瘤細胞增值，引起腫瘤細胞凋亡。 這一結(jié)論為血管新生抑制劑的研究提供了新的思路。去整合素可以視為一種具有 雙重功能的效應(yīng)分子，它不僅能夠抑制腫瘤血管新生，而且可以抑制和殺滅腫瘤 細胞。這就可以解決以往單獨運用血管新生抑制劑不能殺死腫瘤細胞的難題。目 前國內(nèi)外許多科研機構(gòu)在致力于去整合素抑制腫瘤的研究。本實驗室自上個世紀(jì) 卯年代即開始研究去整合素Echistatin，并建立了去整合素多肽的克隆、表達及制 備工藝。Echistatin由49個氨基酸組成，其中RGD (Arg、Gly^-Asp26)為其特異 性結(jié)合位點。生物學(xué)研究結(jié)果證明Echistatin除了可以抑制血小板聚集外，還 能呈劑量依賴性抑制鼠黑色素瘤細胞B16 BK6與纖維連接素、玻璃連接素、層 粘蛋白的粘附，并誘導(dǎo)新生血管內(nèi)皮細胞DNA的斷裂；Echistatin還能抑制結(jié)腸 腺癌細胞與纖維連接蛋白和幾種抗癌細胞整合素單抗的結(jié)合。當(dāng)然，進一步的研 究也發(fā)現(xiàn)，去整合素治療腫瘤還存在一些問題，例如，整合素雖然分子量小，但 由于大多來自蛇毒，其免疫原性不容忽視。為了降低其免疫原性，國內(nèi)外曾有一 些科學(xué)家通過化學(xué)方法合成RGD三肽，希望替代去整合素，但是RGD三肽的活 性下降了近百倍。進一步的研究提示，去整合素RGD周邊序列對于維持其功能 具有重要作用；再如，由于去整合素可以識別多種不同的整合素，因此，其介導(dǎo) 的生物效應(yīng)，作用廣泛但不特異。由于不同去整合素對av&、 a5^等整合素的選 擇性不同，通過改變?nèi)フ纤豏GD模體周邊序列，可以影響其選擇性。這一發(fā) 現(xiàn)為研究去整合素提供了新的思路。近年來，本實驗室將研究重點放在去整合素 結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系上，通過突變EchistatinRGD模體周邊部分氨基酸，得到兩種 不同的突變體Echistatin (A23K24G25D26W27)和Echistatin (A23R24G25D26N27)。 第一種突變體由于K^和W"的作用，特異地結(jié)合aub(33，而第二種突變體Echistatin (A23R24G25D26N27)則特異地結(jié)合％/33、 本實驗室同時建立了這兩種突變 體的基因工程生產(chǎn)工藝，并進行了藥效學(xué)研究，基本確證了去整合素Echistatin 作用的特異性問題。本發(fā)明在Echistatin (A23R24G25D26N27)突變體基礎(chǔ)上進行改造獲得的ERC (N5)多肽，具有特異性抑制腫瘤細胞和腫瘤新生血管的作用， 迄今尚未見有相關(guān)報道。本發(fā)明的目的，在于提供一種能夠同時特異性識別和抑制腫瘤細胞及腫瘤新 生血管的多肽，從而克服現(xiàn)有血管生成抑制劑存在副作用大、特異性不強等問題， 以期在臨床治療中發(fā)揮高效、特異的腫瘤抑制和殺滅作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種全新的小分子多肽，它由RGD (Arg-Gly-Asp)和部分 Echistatin的C端序列組成。根據(jù)Echistatin (A23R24G25D26N27)特異結(jié)合0^3、 0!5A 的特點，本發(fā)明將EchistatinN端l一22個氨基酸截斷并對其27位氨基酸實施了突 變，其突變后蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)為ARGD7VMPRNPHKGPAT(粗體、斜體表示突變 后氨基酸序列)，經(jīng)過計算機模擬，該小分子多肽具有一定柔軟空間構(gòu)象，RGD 模體和C端序列之間的距離接近于Echistatin結(jié)構(gòu)中的RGD與C端的距離，理論上 具備Echistatin相似的生物學(xué)活性。改造后的多肽由RGD和Echistatin的部分C端結(jié)合，其第五個氨基酸為N，使 之更易于與 ft、 asA結(jié)合。本發(fā)明將該多肽命名為ERC(N5)。 ERC(N勺既保留 了Echistatin (A23R24G25D267V27)特異性識別ovft、 asA的優(yōu)點，又以較小的分子 量降低了免疫原性，同時可以通過基因工程技術(shù)進行制備，既可降低成本，又能 解決現(xiàn)有血管生成抑制劑存在的缺陷。本發(fā)明的要點之一在于，提供一種新的小分子多肽設(shè)計與合成，其氨基酸序 列特征為ARGDiVMPRNPHKGPAT，其名稱為ERC(N5)。本發(fā)明的要點之二在于，ERC(N5)的基因序列特征為get cgt ggt gac aac atg ccg cgt aac ccg cac aaa ggt ccg get act。本發(fā)明還提供了多肽ERC (N5)在惡性腫瘤增值和轉(zhuǎn)移的臨床治療中的應(yīng)用。發(fā)明優(yōu)點本發(fā)明的優(yōu)點與積極效果在于，利用基因工程與蛋白質(zhì)工程技術(shù)，設(shè)計并制 備了一種小分子多肽，所述多肽不僅具有其它血管生成抑制劑的抑制腫瘤功效， 還具有殺滅腫瘤細胞的特異作用，有望成為一種新型血管生成抑制劑，為臨床提供一種新的抗腫瘤藥物和治療方法。


圖1一目的基因1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
其中從左向右，第一泳道為DNAmarker,最下面條帶分子量為100bp; 第二泳道為目的基因，其分子量小于100bp; 圖2 —重組表達質(zhì)粒載體？丁乂81- ERC(N5)的酶切鑒定
其中從左向右，第一泳道為低分子量DNAmarker，最下面條帶分子量為 100bp;
第二泳道為pTXBl- ERC(NS)經(jīng)酶切后的兩個片段，最下面其分子量 小于100bp; 圖3 —ERC(N5)-融合蛋白SDS-PAGE電泳圖
其中第一泳道為蛋白marker,其分子量從大到小為97400， 66200， 43000， 31000， 20100， 14400;第二泳道為ERC(N5)-融合蛋白表達情況，在 43000和31000之間可見到融合蛋白條帶存在。 圖4一氨基酸序列為ARGDNMPRN肽段的MS/MS質(zhì)譜圖
其中縱坐標(biāo)表示相對豐度，橫坐標(biāo)為質(zhì)荷比，橫坐標(biāo)下面為相對應(yīng)的氨基 酸序列。坐標(biāo)軸之間的數(shù)字為相應(yīng)的離子和質(zhì)荷比。 圖5—ERC (N5)抑制CAM新生血管示意圖
其中包括對照組、O.l昭組，0,8嗎組，1.6pg組 圖6—ERC (N5)對腫瘤細胞抑制的劑量依賴性
其中橫坐標(biāo)表示蛋白質(zhì)濃度(mg/ml)，縱坐標(biāo)表示生長抑制率(％)
曲線代表人宮頸癌細胞株Siha; T-曲線代表人結(jié)腸癌細胞株SW4S0; ▲-曲線代表人結(jié)腸癌細胞株Colo205; *-曲線代表褐家鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞株P(guān)C-12，
-曲線代表非洲綠猴腎細胞株COS-7
圖7—Hoechst 33258染色
其中7-1:未經(jīng)處理的對照細胞；7-2: ERC (N5)處理8h; 7-3: ERC (N5) 處理16h; 7-4: ERC (N5)處理24h。實施方案
以下實施例僅為幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，但不以任何方式限 制本發(fā)明。
<實施例1>:利用基因工程與蛋白質(zhì)分析技術(shù)相結(jié)合制備ERC(N5) (1)、 ERC(N5)多肽基因的獲取
根據(jù)ERC(N^的氨基酸序列，利用大腸桿菌偏愛密碼子，設(shè)計ERC(N"的全 基因序列，基因上游引入AWeI酶切位點和起始密碼ATG，下游引入&戶I酶切位 點，基因序列由TaKaRa公司合成，其特征為
ggt get cat atg get cgt欲f gflc ctflc啤ccg c ccg c"c flfl"欲Z ccg gc, gga aga gca aca
全基因序列經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，低于DNA Marker的100bp，有一目的條 帶，符合預(yù)期大小(72bp，包括酶切位點)(圖l)。 (2) ERC(N5)融合蛋白表達體系的構(gòu)建
將合成所得目的基因片段首先亞克隆入pMD-18T克隆載體(購自TaKaRa公
司)，形成pMD-18T-ERC(NS)重組質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)化XL-lblue大腸桿菌(購自北
京北醫(yī)聯(lián)合生物工程公司)，經(jīng)質(zhì)粒提取、PCR、酶切鑒定，選取電泳鑒定正確
重組質(zhì)粒進行DNA測序，將準(zhǔn)確無誤的重組子用AWe I和&p I限制性內(nèi)切酶消化，
回收目的片段后，定向克隆于融合表達載體pTXBl (含有編碼Intein蛋白基因序
列)(購自NEB公司)中，pTXBl屬于IMPACT系統(tǒng)載體，具有自我剪切功能，
非常適用于表達小分子多肽。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化B121(DE3)大腸桿菌(購自博士德
公司)，構(gòu)建B121(DE3)-pTXBl-ERC(N5)融合蛋白表達體系(圖2)。
鑒定結(jié)果如圖2所示，
顯示100bp以下，有一 目的條帶存在，符合預(yù)期大小，證明pTXBl- ERC(N5) 重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。
(3) ERC(N5)融合蛋白表達及純化 利用IPTG誘導(dǎo)宿主菌表達融合蛋白ERC(NS)-Intein，取少許樣品行 SDS-PAGE電泳。收集菌液經(jīng)超聲破菌，確定融合蛋白的表達形式，然后利用 IMPACT系統(tǒng)的自我剪切特性對融合蛋白進行切割，使ERC(NS)-Intein融合蛋白 裂解并釋放ARGDiV MPRNPHKGPAT(4) ERC(N5)結(jié)構(gòu)確證
對精細純化后目的蛋白進行LC-ESI-MS/MS質(zhì)譜分析，鑒定目的蛋白一級結(jié) 構(gòu)的正確性。MS/MS質(zhì)譜圖(二級質(zhì)譜圖)提示，ERC (N5) —級結(jié)構(gòu)正確(圖 4)。
<實施例2>: ERC(NS)抑制新生血管生成實驗
(1) 材料
雞胚110只(購自山西醫(yī)科大學(xué)動物中心)，共分為11組，包括PBS陰性 對照組、ERC(N5)0.1pg組，0.2pg組，0.4pg組，0.8pg組、1.6pg組；ERC(N5) O,lpg 組，0.2嗎組，0.4pg組,0.8嗎組、l如g組;
(2) 方法 孵育
用1%的新潔爾滅清洗新鮮雞蛋，將其放入37。C， 60%相對濕度的孵箱內(nèi)常 規(guī)孵育，使雞蛋的氣室向上，雞蛋長軸與蛋托呈80°角，每天翻蛋2 3次，至 第8天，選擇成活的雞胚進行標(biāo)記，在尿囊膜兩條主要血管交叉點離胚體一定距 離處確定開窗位置； 開窗
先在氣室頂端開一個小孔減壓，然后在選定位置消毒后開一個約 0.5cmx0.5cm的小窗，小心掀起殼膜，暴露其下方的尿囊膜及其血管； 施加測試物
分別置入已經(jīng)加入對照dH20及受試樣品的甲基纖維素膜，使其置于測試 區(qū)，用透明膠帶紙封閉小窗，繼續(xù)孵育48h，每組至少保證成活6只雞胚； 取膜及拍照
去掉雞胚絨毛尿囊膜(chrioall antoic membrane,縮寫為CAM)平面以上 的卵殼膜，加入l:l的甲醇/丙酮固定液1.5ml/只，室溫固定15min，待血液凝固 后剪下CAM，浸入水中使其展開。將CAM平鋪于玻璃板上，繼用另一玻璃板 壓平，在解剖顯微鏡下觀察。
(3) 結(jié)果
對照組血管普遍生長良好，血管分支適中；O.lpg ERC(NS)組血管數(shù)出現(xiàn)減 少，甚至個別小血管消失的現(xiàn)象；隨著ERC(N"劑量的增加，小血管網(wǎng)出現(xiàn)不同 程度的缺陷，甚至有大量小血管的消失，局部區(qū)域僅有較大血管存在；在1.6pg 組，所有小血管全部消失，僅有大血管尚存且有出血現(xiàn)象；說明ERC(NS)有劑量依賴性的抑制血管新生作用。
<實施例3>:誘導(dǎo)腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移實驗
(1) 材料 哺乳動物細胞株
人結(jié)腸癌細胞株ColQ205、 SW480，人宮頸癌細胞株Siha及褐家鼠腎上腺嗜 鉻細胞瘤細胞株P(guān)C-12，非洲綠猴腎細胞株COS-7 (購自中國科學(xué)院細胞庫)。 Colo205， SW480， Siha， COS-7細胞株用含10。/。胎牛血清的RPMI1640 (購自博士 德公司)培養(yǎng)液培養(yǎng)，PC12在含10。/。胎牛血清，5。/。馬血清的RPMI1640 (購自博 士德公司)培養(yǎng)液中培養(yǎng)。
(2) 方法
將Siha細胞株經(jīng)ERC (N5)作用24h后，收集存活細胞用無血清培養(yǎng)基重懸以 10"孔的密度接種于Boyden小室(Costar)，在侵襲實驗中，需在8ptm孔徑的聚 碳酸酯濾膜上加入10/il基質(zhì)膠(25mg/50ml)，并在小室的底部加入含血清培養(yǎng) 基，然后在37'C細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h。取出濾膜空氣干燥5h，將濾膜的 細胞經(jīng)甲醛固定后用吉姆薩染色，在光鏡下計數(shù)侵襲和轉(zhuǎn)移細胞的數(shù)目。
(3) 結(jié)果
ERC (N5)體外抗腫瘤作用
本實驗為一定測試條件下(8h,37'C)，不同劑量ERC (N5)的測試結(jié)果。相 比受試的人癌細胞(Siha,SW480和Colo205)及褐家鼠癌細胞株(PC12)，非洲 綠猴腎細胞株COS-7對ERC (N5)殺傷活性的敏感程度要小得多，而且不同受 試癌細胞對ERC (N5)的敏感程度也不同，達到50%生長抑制率所需的作用濃 度范圍約為0.2 1.25mg/ml。其中，PC12細胞對ERC (N5)的活性成分較敏感， 其明顯受到ERC (N5)抗腫瘤活性成分的抑制，當(dāng)濃度提高至0.5mg/ml時，顯 微鏡下可看到大量破裂溶解的細胞。 細胞凋亡檢測結(jié)果
Hoechst 33258染色
用Hoechst33258染色可明顯觀察到細胞核形態(tài)的改變(圖7)。在空白對照 組，細胞核形態(tài)呈圓形，淡藍色，著色均勻(圖7-l);經(jīng)0.5mg/mlERC (N5) 處理8h.l6h和24h后，細胞核明顯亮染，在許多細胞可見染色質(zhì)濃縮聚集，有的細胞可觀察到凋亡小體的形成，呈現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。(圖7-2，圖7-3， 圖7-4)。
Siha細胞株經(jīng)ERC(N5) (0.5mg/ml)處理8h， 16h， 24h后，經(jīng)Hoechst 33258
染色后，在熒光顯微鏡下觀察細胞核形態(tài)的改變。
權(quán)利要求
1. 一種小分子多肽ERC(N5)，其蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)為ARGDNMPRNPHKGPAT，基因序列為gct cgt ggt gac aac atg ccg cgt aac ccg cac aaa ggt ccg gct act。
2、 制備權(quán)利要求1所述多肽ERC (N5)的方法，其主要步驟包括a、 目的基因的獲取根據(jù)ERC(NS)的氨基酸序列，利用大腸桿菌偏愛密碼 子，設(shè)計ERC(N"的全基因序列，在基因上、下游引入恰當(dāng)?shù)拿盖形稽c合成得到；b、 融合蛋白表達體系的構(gòu)建將目的基因片段克隆、轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)質(zhì)粒提取、PCR、酶切鑒定，選取正確重組質(zhì)粒進行DNA測序，將序列準(zhǔn)確無誤的 重組子經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化，回收目的片段后，克隆于融合表達載體；c、 融合蛋白的表達含重組表達載體的宿主菌，在適當(dāng)條件下表達融合蛋 白，進行SDS-PAGE電泳檢測；d、 融合蛋白的精細與純化采用高壓液相HPLC方法，對ERC(N"進行精細 純化，得到ERC(N"純品；e、 融合蛋白的結(jié)構(gòu)確證對精細純化后的蛋白ERC(NS)進行LC-ESI-MS/MS 質(zhì)譜分析，確證其一級結(jié)構(gòu)。
3、 權(quán)利要求1所述多肽ERC (N5)在制備治療惡性腫瘤增值及轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種特異抑制腫瘤細胞和腫瘤新生血管的多肽ERC(N⁵)，具體地講，涉及運用基因工程與蛋白質(zhì)工程技術(shù)設(shè)計、制備的一種小分子多肽ERC(N⁵)，實驗研究結(jié)果表明，所述多肽不僅具有其它血管生成抑制劑抑制腫瘤的功效，還具有殺滅腫瘤細胞的特異作用，有望成為一種新型血管生成抑制劑，為臨床提供一種新的抗腫瘤藥物和治療方法。
文檔編號C12N15/11GK101280004SQ200810100199
公開日2008年10月8日 申請日期2008年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月28日
發(fā)明者利 張, 棟 張, 張建林, 方 李, 濤 楊, 楊利軍, 勃 牛, 索利敏, 趙志強, 俊 閆 申請人:山西醫(yī)科大學(xué)