專利名稱：Il-8受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的砜化合物、藥物組合物、其制備方法和它們在治療IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78介導的疾病中的用途。

背景技術(shù)：
白細胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)具有很多不同的名稱，如嗜中性粒細胞吸引/活化蛋白-1(NAP-1)、單核細胞衍生的嗜中性粒細胞趨化因子(MDNCF)、嗜中性粒細胞活化因子(NAF)和T-細胞淋巴細胞趨化因子。白細胞介素-8為嗜中性粒細胞、嗜堿細胞和T-細胞亞型的化學引誘物(chemoattractant)。其由許多有核細胞生成，包括暴露于TNF、IL-1α、IL-1β或LPS的巨噬細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞和上皮細胞，和當暴露于LPS或趨化因子如FMLP由嗜中性粒細胞本身生成。M.Baggiolini等人，J.Clin.Invest.84，1045(1989)；J.Schroder等人，J.Immunol.139，3474(1987)和J.Immunol.144，2223(1990)；Strieter等人，Science 243，1467(1989)和J.Biol.Chem.264，10621(1989)；Cassatella等人，J.Immunol.148，3216(1992)。
GROα、GROβ、GROγ和NAP-2也屬于趨化因子α家族。象IL-8一樣，這些趨化因子也有著不同的名稱。例如GROα、β、γ分別稱為MGSAα、β和γ(黑素瘤生長刺激活性)，參見Richmond等人，J.Cell Physiology 129，375(1986)和Chang等人，J.Immunol 148，451(1992)。所有這些α-家族的趨化因子結(jié)合至IL-8B受體(CXCR2)，這些趨化因子具有直接在CXC基序前的ELR基序。
IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78在體外刺激很多功能。它們都顯示具有對嗜中性粒細胞的化學引誘物特性，而IL-8和GROα已顯示T-淋巴細胞和嗜堿細胞趨化的活性。此外，IL-8可從正常和異位的個體的嗜堿細胞中誘導組胺釋放。此外，GRO-α和IL-8可從嗜中性粒細胞中誘導溶菌酶(lysozomal)釋放和突發(fā)性呼吸(respiratory burst)。也已顯示IL-8增加Mac-1(CD11b/CD18)在嗜中性粒細胞上的表面表達而沒有新生的蛋白合成。這可有助于嗜中性粒細胞與血管內(nèi)皮細胞的粘合力增加。許多已知的疾病的特征為大量嗜中性粒細胞浸潤。由于IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2促進嗜中性粒細胞的積聚和活化，因此這些趨化因子涉及于廣泛的急性和慢性炎性疾病，包括牛皮癬和類風濕性關(guān)節(jié)炎，Baggiolini等人，F(xiàn)EBS Lett.307，97(1992)；Miller等人，Crit.Rev.Immunol.12，17(1992)；Oppenheim等人，Annu.Rev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等人，J.Clin.Invest.87,463(1991)；Miller等人，Am.Rev.Respir.Dis.146,427(1992)；Donnely等人，Lancet 341，643(1993)。此外，ELR趨化因子(那些含氨基酸ELR基序恰好在CXC基序前的趨化因子)還在血管鈣化中涉及，Strieter等人，Science 258，1798(1992)。
在體外，IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2通過結(jié)合至并活化七跨膜、G蛋白偶聯(lián)家族的受體，尤其是通過結(jié)合至IL-8受體、特別是IL-8β受體(CXCR2)而誘導中性白細胞形狀變化、趨化性、顆粒釋放和突發(fā)性呼吸。Thomas等人，J.Biol.Chem.266，14839(1991)；和Holmes等人，Science 253，1278(1991)。已經(jīng)開發(fā)了對于該受體家族成員的非肽小分子拮抗劑。作為參考，參見R.Freidinger inProgress in Drug Research，Vol.40，pp.33-98，Birkhauser Verlag，Basel 1993。因此，該IL-8受體代表一種開發(fā)新的抗炎劑的有希望的靶點。
兩種高親合人IL-8受體(77％同源性)已被表征CXCR1，其以高親和力僅結(jié)合IL-8，和CXCR2，其對IL-8以及GROα、GROβ、GROγ和NAP-2具有高親和力。參見Holmes等人，suDra；Murphy等人，Science 253，1280(1991)；Lee等人，J.Biol.Chem.267，16283(1992)；LaRosa等人，J.Biol.Chem.267，25402(1992)；和Gayle等人，J.Biol.Chem.268，7283(1993)。
在該領(lǐng)域仍然需要能與CXCR1和/或CXCR2受體結(jié)合的用于治療的化合物。因此，與IL-8生成增加(其為嗜中性粒細胞和T-細胞亞型進入炎性位點的趨化性的原因)相關(guān)的病癥將受益于IL-8受體結(jié)合抑制劑的化合物。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明包括由式(I)表示的新的IL-8受體拮抗劑，和包含該化合物以及可藥用載體或稀釋劑的組合物。
本發(fā)明還包括由式(I)表示的新的IL-8受體拮抗劑，和包含該化合物和一種或多種其它治療成分(therapeutic ingredient)的組合(combination)。
本發(fā)明還包括治療趨化因子介導的疾病的方法，其中所述趨化因子是結(jié)合IL-8α或β受體的趨化因子，且該方法包括給藥有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。
本發(fā)明還涉及在需要的哺乳動物(特別是人)中抑制IL-8結(jié)合至其受體的方法，其包括給藥有效量的式(I)化合物。
發(fā)明詳述 本發(fā)明中的式(I)的化合物由以下結(jié)構(gòu)表示
其中 X選自鹵素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、氰基、CF3和OCF3； R2選自C3-6環(huán)烷基、苯基和雜芳基，其中所述苯基或雜芳基部分任選獨立地被選自C1-3烷基、鹵素、CF3、OCF3、苯氧基和芐氧基的取代基取代一次或兩次；或 R2為被亞甲二氧基(methylenedioxy)或(二鹵代)-亞甲二氧基取代的苯基； R1表示C4-8雜環(huán)基(CH2)n，其中所述雜環(huán)基部分任選獨立地被選自C1-3烷基、C(O)OR4和C(O)R5的取代基取代一次或兩次； R4和R5獨立地為C1-3烷基；和 n為0或1； 或 R1選自下述環(huán)體系(a-k)
其中R3為H或C1-3烷基； 或其可藥用鹽。
在此使用的＂C1-3烷基＂是指含1至3個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基。這些基團的實例包括甲基、乙基、正丙基或異丙基。
在此使用的＂環(huán)烷基＂是指3至6個碳原子的飽和單環(huán)烴環(huán)。這些基團的實例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。
在此使用的＂雜環(huán)基＂是指含有1至3個選自氧、氮或硫的雜原子的4-8元飽和的或非芳香的、不飽和的單環(huán)。這些環(huán)的實例包括吡咯烷基、氮雜環(huán)丁烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基等。
在此使用的＂雜芳基＂是指含有1至3個選自氧、氮和硫的雜原子的5-6元芳香單環(huán)。這些芳香單環(huán)的實例包括吡啶基、吡咯基、吡喃基、吡唑基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基等。
在此使用的＂鹵素＂或＂鹵代＂是指F、Cl、Br或I。
在此使用的＂C1-3烷氧基＂是指含1至3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基。烷氧基在此的實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和丙-2-氧基等。
除非另有說明，在此使用的＂任選被取代＂是指在各種情況下被鹵素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基獨立地取代一次至三次，而該任選的取代基(除了鹵素)可進一步獨立地被鹵素或C1-2烷基取代一至三次。
本發(fā)明的化合物可包含一個或多個不對稱的碳原子，且可以以外消旋形式和光學活性形式存在。所有這些化合物和非對映異構(gòu)體都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
適宜地，X選自鹵素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、氰基、CF3和OCF3。
在一個實施方案中，X為鹵素。
在另一個實施方案中，X選自F、Cl和Br。
在另一個實施方案中，X為Cl。
適宜地，R2選自C3-6環(huán)烷基、苯基和雜芳基，其中所述苯基或雜芳基部分任選獨立地被選自C1-3烷基、鹵素、CF3、OCF3、苯氧基和芐氧基的取代基取代一次或兩次；或 R2為被亞甲二氧基或(二鹵代)-亞甲二氧基取代的苯基。
在一個實施方案中，R2表示任選獨立地被選自C1-3烷基、鹵素、OCF3或苯氧基的取代基取代一次或兩次的苯基。
在一個實施方案中，R2表示任選被鹵素取代一次的吡啶基。
在另一個實施方案中，R2表示被氯取代的吡啶基。
在另一個實施方案中，R2表示被二氟亞甲二氧基取代的苯基。
在另一個實施方案中，R2表示C3-6環(huán)烷基。
在另一個實施方案中，R2表示鹵代甲基苯基、三鹵代甲氧基苯基、二鹵代苯基、乙基苯基或苯氧基苯基。
在另一個實施方案中，R2表示3-氟-2-甲基苯基、2-三氟甲氧基苯基、2-氯-3-氟苯基、2-乙基苯基或2-苯氧基苯基。
在另一個實施方案中，R2表示鹵代吡啶基。
在另一個實施方案中，R2表示2-氯-3-吡啶基。
適宜地，R1表示C4-8雜環(huán)基(CH2)n，其中所述雜環(huán)基部分任選獨立地被選自C1-3烷基、C(O)OR4和C(O)R5的取代基取代一次或兩次；和 其中R4和R5獨立地為C1-3烷基；且n為0或1； 或 R1選自以下環(huán)體系(a-k)
其中R3為H或C1-3烷基。
在一個實施方案中，所述R1雜環(huán)基部分為吡咯烷基。
在一個實施方案中，所述R1雜環(huán)基部分選自氮雜環(huán)丁烷基、哌啶基和吡咯烷基。
在另一個實施方案中，R1選自吡咯烷基甲基、氮雜環(huán)丁烷基、哌啶基、吡咯烷基和1-哌啶基羧酸乙酯(ethyl-1-piperidinylcarboxylate)。
在另一個實施方案中，R1選自3-吡咯烷基甲基、3-氮雜環(huán)丁烷基、4-哌啶基、3-哌啶基、3-吡咯烷基和1-哌啶基羧酸乙酯。
適宜地，n為0或1。
在一個實施方案中，n為0。
在另一個實施方案中，n為1。
在一個實施方案中，R1表示雜環(huán)基，且其選自2-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚基、8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛基、8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛基、3-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛基、2-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛基和2-氧雜-5-氮雜二環(huán)[2.2.2]辛基。
在另一個實施方案中，R1表示3-外-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基或3-外-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基。
合適的可藥用鹽是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，且包括無機和有機酸的堿鹽，所述的酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、乙酸、蘋甲酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、苯甲酸、水楊酸、苯基乙酸和扁桃酸。此外，例如，如果取代基包含羧基部分，式(I)化合物的可藥用鹽也可與可藥用陽離子而形成。合適的可藥用陽離子是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，且包括堿、堿土、銨和季銨陽離子。
示例性的本發(fā)明的化合物包括，但不限于 N-(4-氯-2-羥基-3-{[(3-外)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基]磺?；鶀苯基)-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3-吡咯烷基甲基)磺?；鵠苯基}-N′-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲； N-[3-(3-氮雜環(huán)丁烷基磺?；?-4-氯-2-羥基苯基]-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3-吡咯烷基甲基)磺酰基]苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-[3-(3-氮雜環(huán)丁烷基磺?；?-4-氯-2-羥基苯基]-N′-(2-氯-3-氟苯基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯(benzodioxol)-4-基)脲； N-[3-(3-氮雜環(huán)丁烷基磺?；?-4-氯-2-羥基苯基]-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3-吡咯烷基甲基)磺?；鵠苯基}脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(2-乙基苯基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺酰基)苯基]-N′-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}-N′-(2-乙基苯基)脲； N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺酰基]-4-氯-2-羥基苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}-N′-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺酰基)苯基]-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺酰基)苯基]-N′-(2-乙基苯基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺酰基)苯基]-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N′-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}-N′-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N′-[2-(苯氧基)苯基]脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N′-[2-(苯氧基)苯基]脲； 4-{[6-氯-3-({[(3-氟-2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺?；鶀-1-哌啶羧酸乙酯； N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N′-(2-氯-3-氟苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； 4-({6-氯-2-羥基-3-[({[2-(苯氧基)苯基]氨基}羰基)氨基]苯基}磺酰基)-1-哌啶羧酸乙酯； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N′-[2-(苯氧基)苯基]脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]脲； 4-{[6-氯-3-({[(2-氯-3-氟苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺酰基}-1-哌啶羧酸乙酯； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]脲；和 N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(2，3-二氯苯基)脲； 或其可藥用鹽。
適合地，所述鹽為鹽酸鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物包括，但不限于 N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺酰基)苯基]-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺酰基)苯基]-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N′-[2-(苯氧基)苯基]脲； 4-{[6-氯-3-({[(3-氟-2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺?；鶀-1-哌啶羧酸乙酯； N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺酰基]-4-氯-2-羥基苯基}-N′-(2-氯-3-氟苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； 4-({6-氯-2-羥基-3-[({[2-(苯氧基)苯基]氨基}羰基)氨基]苯基}磺?；?-1-哌啶羧酸乙酯； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N′-[2-(苯氧基)苯基]脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]脲； 4-{[6-氯-3-({[(2-氯-3-氟苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺?；鶀-1-哌啶羧酸乙酯； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]脲；和 N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(2，3-二氯苯基)脲； 或其可藥用鹽。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物包括，但不限于 N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N′-(2-氯-3-氟苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}脲； N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺酰基)苯基]脲；和 N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N′-(2，3-二氯苯基)脲； 或其可藥用鹽。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物包括，但不限于 N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺酰基]苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲； N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲；和 N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺酰基]苯基}脲； 或其可藥用鹽。
制備方法 本發(fā)明的化合物可通過包括以下步驟的方法合成 A)氧化根據(jù)式(II)的硫化物
生成式(III)的砜
B)水解所述砜生成式(IV)的氨基苯酚
和 C)將該氨基苯酚與異氰酸酯(isocyanate)或異氰酸酯前體反應，生成最終產(chǎn)物。
本發(fā)明還包括新的中間體，且其選自式(II)、(III)和(IV)
式(I)的化合物可通過使用合成步驟來獲得，其中的一些步驟在下面流程


圖1中示例性的列出。這些流程圖中提供的合成適于制備具有多種不同基團的式(I)的化合物，運用經(jīng)合適保護的任選取代基，將其反應，以與此處所列的反應相一致。在那些情況下，隨后脫保護接著得到一般公開性質(zhì)的化合物。一旦建立起該脲核(urea nucleus)，這些通式的其它化合物可通過使用現(xiàn)有技術(shù)中已知的官能團互換的標準技術(shù)來進行制備隨后脫保護，在那些情況下，然后獲得自然通常公開的化合物。一旦建立起該脲核(ureanucleus)，這些通式的其它化合物可通過使用現(xiàn)有技術(shù)中已知的標準技術(shù)來實現(xiàn)官能團的互換。
流程
圖1
a)芳基膦，DMF；a1)i.BuLi，ii.硫；b)R1-LG，堿；c)氧化劑；d)H2SO4或HCl；e)R2C＝N＝O或R2CON3 在其中R1包含一個或多個3°或芳香胺部分的實施例中，式(I)的化合物可根據(jù)流程
圖1制備。
磺酰氯1(根據(jù)WO 01/68033A2制備，以能夠教導如何制備流程
圖1化合物1的程度在此引入作為參考)在如DMF中的三苯基膦的條件下還原成相應的硫醇2?；蛘撸摶衔?可通過用硫(S8)猝滅(quenching)相應的鋰陰離子而制備(參見WO 01/68033A2，以能夠教導如何制備流程
圖1化合物1的程度在此引入作為參考)。然后在堿存在下通過用R1-LG處理對2進行烷基化，其中LG表示離去基團如氯、溴、碘或磺酸酯(sulfonate)。然后通過將其與氧化劑如過氧化氫反應，將所得的硫化物3氧化生成砜4。水解該苯并噁唑部分生成氨基苯酚5，然后再將其與異氰酸酯或可原位轉(zhuǎn)化為異氰酸酯的合適的異氰酸酯前體反應。該反應生成最終的脲6。
在其中R1包含被Boc基團或類似的酸不穩(wěn)定的保護基團保護的1°或2°胺的情況下，所述化合物可按照流程圖2制備。該砜的生成和水解如上所述進行，然而，因為后者將導致Boc基團的脫去，必須將其再次引入，這可通過在合適的反應條件如Boc酸酐和氫氧化鈉的條件下而實現(xiàn)，得到化合物5a。生成脲之后，在酸性條件下(如在4N鹽酸的1，4-二噁烷溶液中)去除Boc基團，得到所需的產(chǎn)物7。最后，可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，如還原胺化將所得的胺進一步處理，生成2°或3°胺8。
流程圖2
a)i)H2SO4/aq.1，4-二噁烷ii)NaOH，Boc2O；b)R2C＝N＝O或R2CON3c)4NHCl，1，4-二噁烷；d)NaCNBH3，醛或酮 中間體4a、5a、6a、7和8表示流程圖2中新的中間體。
合成實施例 以下實施例示例性地說明本發(fā)明。這些實施例不是為了限制本發(fā)明的范圍，而是為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供制備和使用本發(fā)明的化合物、組合物和方法的指導。盡管描述了本發(fā)明的具體實施方案，技術(shù)人員會理解在不偏離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)可以作出各種變化和改良。
所有所述的醚是指乙醚；鹽水是指飽和的NaCl水溶液，DCM是指二氯甲烷，THF是指四氫呋喃，EtOAc是指乙酸乙酯，Hex和Hx是指己烷，IMS是指工業(yè)用甲醇化酒精，TBME是指叔丁基甲基醚，DMF是指二甲基甲酰胺，BOC和Boc是指叔丁氧基羰基。除非另有所指，所有溫度以℃(攝氏度)表示。除非另有說明，所有反應在惰性氣氛和室溫下進行。
1H NMR譜在Jeol Delta2(300MHz)光譜儀上記錄?；瘜W位移表示為百萬分之幾(ppm，δ單位)。裂分模式描述了表觀多重性，且表示為s(單峰)、d(兩重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)、br(寬峰)。
除非另有所述，“快速”和“柱色譜”是指使用所述溶劑體系在二氧化硅上的快速柱色譜。
LC-MS數(shù)據(jù)自PE Sciex Single Quadrupole LC/MS API-150與ShimadzuLC系統(tǒng)(SCL-10A Controller和雙UV檢測器)的組合或自Waters micromassZQ與Waters 2695分離模件來獲得。
起始原料1 N-(3，4-二氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺 將3，4-二氯苯胺(150g)溶于1.0L TBME中，并將該溶液冷卻至10℃。在機械攪拌下加入氫氧化鈉(140.7g，30％水溶液)。滴加新戊酰氯(125.9mL)，同時保持內(nèi)部溫度在35℃之下。加入之后，將反應溫度在30-35℃再保持30分鐘。然后將反應混合物冷卻至室溫并隨后在0-5℃保持1小時。過濾所得沉淀物并用600mL水/MeOH(90/10)洗滌，然后用900mL水洗滌。所得固體在真空烘箱并在55℃干燥4天。產(chǎn)量162g。1H-NMR(DMSO-d6)δ 9.46(s，1H)，8.04(d，J＝2.4Hz，1H)，7.65(dd，J＝9.0.2.4Hz，1H)，7.54(d，J＝9.0Hz，1H)，1.22(9H，s)。
起始原料2 6-氯-2-(1，1-二甲基乙基)-1，3-苯并噁唑-7-磺酰氯 將N-(3，4-二氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺(121g)溶于720mL THF中，并將該溶液冷卻至-50℃。添加丁基鋰(433mL，2.5N的己烷溶液)，同時保持內(nèi)部溫度在-45℃至-35℃(最終溫度-35℃)。在-25℃保持40分鐘。Hplc檢測該反應混合物顯示剩余5-10％的起始原料。在-30℃下，添加另外35mL的丁基鋰，并將該反應在-30至-25℃再保持30分鐘(HPLC沒有顯著變化)。將該反應混合物冷卻至-45℃，并將SO2鼓泡至該溶液中，直到溶液看起來達到飽和為止。隨后，將該反應混合物在-10至0℃攪拌45分鐘。將氬氣(2氣球體積(2-double-balloon volumes))鼓入該溶液，隨后將反應混合物冷卻至-5℃。加入磺酰氯(58.8mL)并同時保持溫度低于22℃。隨后，將反應混合物在10-15℃下保持1小時(HPLC反應完全)。加入EtOAc并將混合物濃縮，用水、飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并將溶劑真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物結(jié)晶并用熱的己烷研制。產(chǎn)量87.2g。1H-NMR(DMSO-d6)δ 7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，1.43(9H，s)。
中間體1
將起始原料1，N-(3，4-二氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺(根據(jù)WO01/68033A2制備，以達到教導合成起始原料1的程度將其引入作為參考，也描述于上)溶于無水THF(400mL)中，然后在氬氣氛下冷卻至-75℃。滴加n-BuLi(160mL，2.5M的己烷溶液，5當量)，同時保持溫度低于-60℃。一旦加入所有n-BuLi，將該反應在-5℃下攪拌1.5小時，然后冷卻至-70℃，并加入硫(“硫黃華”)(13g)，隨后在-70℃至室溫攪拌過夜。在-10℃攪拌該反應混合物之后，該溶液顏色由黃色變?yōu)樽厣?橙色。將該反應混合物冷卻至0℃，然后用2N HCl溶液(200mL)猝滅，并攪拌10分鐘。分離有機層并用2N NaOH溶液堿化至pH為12-13，然后用EtOAc洗滌。將水層再用2MHCl溶液酸化至pH約為1，并用二氯甲烷萃取(2X)，用水洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物通過柱色譜純化，使用1:5(EtOAc/己烷)洗脫。產(chǎn)量6g(30％，橙色油)。1H-NMR(CDCl3)δ 7.39-7.30(m，2H)，4.08(s，1H)，1.50(9H，s)。
或者，中間體1以下述方法制備 將三苯基膦(89g)溶于DCM(200ml)和DMF(2.2ml)中。將該溶液在冰/甲醇浴中冷卻至-1℃。經(jīng)30分鐘，向其中加入6-氯-2-(1，1-二甲基乙基)-1，3-苯并噁唑-7-磺酰氯、起始原料2(根據(jù)WO01/68033A2制備，以達到教導合成起始原料2的程度將其引入作為參考，也描述于上)(35g)于DCM(100ml)中的溶液，并保持溫度低于15℃。將反應混合物在室溫和氮氣下攪拌18小時。使用2N鹽酸(200ml)猝滅反應混合物。分離相并真空蒸發(fā)有機相。將該殘余物懸浮于2N氫氧化鈉(400ml)中，并快速攪拌3小時。通過過濾除去固體并用水洗滌。合并的濾液和洗出物在冰/水浴中冷卻，并使用5N鹽酸酸化至～pH1。將其用TBME(400ml)萃取。該有機相用硫酸鎂干燥，并在真空下蒸發(fā)，得到中間體1(22.85g)，其為棕色固體。
中間體2(通用方法A)
在0℃下，向(R)-(+)-3-羥基哌啶鹽酸鹽(1g)于DCM(20mL)中的懸浮液中加入Et3N(3.04mL)，隨后加入BOC2O(1.75g)，然后將其放置過周末。加入水(50mL)并用DCM(100mL)萃取。合并的有機相用水洗滌(2 x 50mL)，然后用鹽水洗滌(50mL)，干燥(Na2SO4)，并濃縮。該殘余物過柱(快速，用梯度為0-10％ MeOH/DCM洗脫)。產(chǎn)量1.55g。1H-NMR(CDCl3)δ 3.74-3.69(2H，m)，3.56-3.48(1H，m)，3.18-3.03(2H，m)，1.92-1.83(1H，m)，1.79-1.71(2H，m)，1.55-1.45(1H，m)，1.43(9H，s)。
中間體3(通用方法B)
在0℃下，向中間體2(1g)于DCM(10mL)中的溶液中加入Et3N(1.38mL)，隨后滴加MsCl(0.46mL)。在0℃下攪拌1小時后，將反應溫熱至室溫，用水(10mL)猝滅，并分離。該水層用DCM萃取(2 x 20mL)。合并的有機相用水洗滌(40mL)，加入一角匙二氧化硅，干燥(NaSO4)并濃縮。產(chǎn)量1.4148g。1H-NMR(CDCl3)δ 4.71(1H，br s)，3.62(2H，br d)，3.49-3.27(2H，m)，3.04(3H，s)，2.01-1.76(3H，m)，1.79-1.71(2H，m)，1.55-1.45(1H，m)，1.45(9H，s)。
中間體4(通用方法C)
向NaH(0.30g)于THF(20mL)中的懸浮液中滴加中間體1(使用起始原料1)(1.22g)。攪拌1小時后，添加于THF中的中間體3(1.41g)并將反應加熱至80℃并過夜。將該反應混合物冷卻至室溫，然后用飽和的NaHCO3水溶液(50mL)猝滅。反應混合物用DCM萃取(2 x 50mL)。合并的有機相用水洗滌(100mL)，干燥(NaSO4)，并濃縮。殘余物過柱(快速，20％ EtOAC/己烷，二氧化硅)。產(chǎn)量946.9mg.1H-NMR(CDCl3)δ 7.50(d，J＝7.9Hz，1H)，7.38(d，J＝7.9Hz，1H)，3.82(d，J＝13.4Hz，1H)，3.55-3.45(m，1H)，3.00-2.80(m，2H)。
中間體5(通用方法D)
在-10℃下，向中間體4(946.9mg)于DCM(10mL)中的溶液中加入于DCM(10mL)中的mCPBA(2.31g)。將反應在-10℃下攪拌1小時，然后溫熱至室溫。將反應混合物用飽和的NaHCO3水溶液(50mL)猝滅，然后用DCM萃取(2 x 70mL)。合并的有機相用水(50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并濃縮。殘余物過柱(快速，30％ EtOAc/己烷，二氧化硅)。產(chǎn)量353.6mg(35％，黃色油狀物)。MS(m/z，ES+，M+H)457.08。
中間體6(通用方法E)
向中間體5(353mg)于IMS(5mL)中的溶液中加入濃HCl水溶液(5mL)。然后將反應加熱至80℃并過夜。將反應混合物冷卻至室溫并濃縮以去除IMS。殘余物用飽和的NaOH水溶液堿化至pH12，在0℃加入EtOAc(30mL)、BOC2O(1當量，0.17g)并過夜。分離反應混合物，且水層用EtOAc萃取(2x30mL)。干燥合并的有機相(用Na2SO4)，并濃縮。殘余物過柱(快速，用梯度10％-30％的EA/Hx洗脫)。產(chǎn)量分離出含兩部分產(chǎn)物的級分58.0mg和180.9mg。MS(m/z，ES+，M+H)291.01。
中間體7(通用方法F)
將3-氟-2-甲基苯胺(7.4g)在室溫和氬氣氛下溶于DCM(220mL)中。冷卻至0℃后，添加飽和的NaHCO3水溶液(220mL)，然后加入三光氣(5.85g)。將反應在0℃下攪拌1小時。隨后，將產(chǎn)物用DCM萃取(2 x 50mL)。合并有機級分，用MgSO4干燥并真空除去溶劑得到黃色油狀物。加入己烷得到白色的鹽的沉淀，將其濾除。真空去除己烷，得到黃色油狀物(7.69g，86％)。1H-NMR(CDCl3)δ 7.09(dd，1H)，6.92-6.85(m，2H)，2.24(s，3H)。
中間體8(通用方法G)
向中間體6(60mg)于DCM(3mL)中的溶液中添加中間體7(70mg)，并將反應放置過周末。濃縮反應混合物，并將殘余物過柱(快速，用梯度20％-30％ EtOAc/己烷洗脫)。產(chǎn)量56.2mg。MS(m/z，ES+，M+H)542.01。
實施例1N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(3-氟-2-甲基苯基)脲(通用方法H)
將中間體8(56.2mg)和4N HCl/二噁烷(3mL)一起在室溫攪拌并過夜。中間體6、5、4、3和2如上制備。使用起始原料1制備中間體1用于合成實施例1。將反應混合物濃縮并添加溶于最少量MeOH和Et2O的殘余物。粉碎固體并將其過濾和干燥。粗產(chǎn)量28.4mg。粗產(chǎn)物溶于加入的最少量的MeOH和Et2O。粉碎固體，將溶劑傾析并干燥固體。產(chǎn)量18.8mg。MS(m/z，ES+，M+H)441.98。NMR(MeOD)δ 8.40(1H，d，ArH)，7.46(1H，d，ArH)，7.19-7.15(2H，m，ArH)，6.85(1H，t，ArH)，4.14(1H，dt，CH)，3.66(1H，dd，CH)，3.37(2H，d，CH2)，3.04(1H，dt，CH)，2.19(3H，S，ArCH3)，2.14-1.69(4H，m，2xCH2)。
中間體9
在0℃下，將于DCM(40mL)中的三光氣(7.7g)加入于DCM(200mL)和飽和的NaCHO3水溶液(200mL)中的3-氨基-2-氯吡啶(10g)。然后將反應攪拌1小時。然后產(chǎn)物用DCM萃取(2 x 50mL)，用Na2SO4干燥并真空除去溶劑，得到灰白色固體。用己烷研制，然后過濾該固體并從洗脫液中除去溶劑，得到產(chǎn)物，為無色油狀物。在用氬氣吹掃該產(chǎn)物后，將其置于冰箱，得到白色結(jié)晶固體(6g)。1H-NMR(CDCl3)δ 8.22(br s，1H)，7.45(d，1H)，7.27-7.20(m，1H)。
中間體10
向中間體6(60mg)于DCM(3mL)中的溶液中添加中間體9(71mg)，并將反應放置過周末。濃縮該反應混合物并將殘余物過柱(快速，20-30％EtOAc/己烷，二氧化硅)。產(chǎn)量60.0mg。MS(m/z，ES+，M+H)544.97。
實施例2.N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N′-(2-氯-3-吡啶基)脲
將中間體10(60mg)和4N HCl/二噁烷(3mL)一起在室溫攪拌并過夜。中間體6、5、4、3和2如上制備。使用起始原料1制備中間體1以合成實施例2。濃縮反應混合物并添加溶于最少量MeOH和EtOAc中的殘余物。粉碎固體，傾析溶劑并干燥固體。產(chǎn)量9.1mg。MS(m/z，ES+，M+H)444.91。NMR(MeOD)δ 8.57(1H，dd，ArH)，8.45(1H，d，ArH)，8.04(1H，dd，ArH)，7.35(1H，dd，ArH)，7.19(1H，d，ArH)，4.17-4.09(1H，m，CH)，3.64(1H，dd，CH)，3.39-3.33(2H，m，CH2)，3.05(1H，dt，CH)，2.15-1.74(4H，m，2xCH2)。
中間體11
向中間體6(60mg)于DCM(3mL)中的溶液中添加2-氯-3-氟苯基異氰酸酯(79mg)并將反應放置過周末。濃縮反應混合物并將殘余物過柱(快速，用梯度為0-30％ EtOAc/己烷洗脫)。產(chǎn)量71.2mg。Rf0.51(50％ EA/己烷)。MS(m/z，ES+，M+H)561.95。
實施例3.N-(2-氯-3-氟苯基)-N′-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}脲
將中間體11(71.2mg)和4N HCl/二噁烷(3mL)一起在室溫攪拌并過夜。中間體6、5、4、3和2如上制備。使用起始原料1制備中間體1以合成實施例3。濃縮該反應混合物并添加溶于最少量MeOH和Et2O的殘余物。粉碎固體并過濾和干燥。產(chǎn)量50.1mg(灰白色固體)。MS(m/z，ES+，M+H)461.96。NMR(MeOD)δ 8.42(1H，d，ArH)，7.93(1H，d，ArH)，7.26(1H，dt，ArH)，7.18(1H，d，ArH)，6.95(1H，dt，ArH)，4.21-4.11(1H，m，CH)，3.66(1H，dd，CH)，3.39-3.31(2H，m，CH2)，3.03(1H，dt，CH)，2.17-1.72(4H，m，2xCH2)。
表1.中間體根據(jù)通用方法A-E制備。


中間體18
根據(jù)對于中間體9描述的方法，將兩批2，2-二氟-1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-胺(1g和3.58g)用在DCM(20mL和80mL)中的三光氣(566mg和2.04mg)和飽和的NaHCO3水溶液(20mL和80mL)處理，在將兩批合并后得到3.27g所需產(chǎn)物。1H-NMR(CDCl3)δ 7.05(t，1H)，6.90(d，1H)，6.82(d，1H)。
使用起始原料1制備中間體1用于所有合成。
表2.由表1中中間體制備的實施例



中間體19
將N-Boc-降托品酮(nortropinone)(6.3g)溶于MeOH(150mL)中，并冷卻至0℃。將NaBH4分批加入，并將反應混合物在0℃下攪拌2.5小時。將反應用水猝滅，酸化至pH3并用DCM萃取(x3)。將合并的有機層用Na2SO4干燥，并濃縮，得到所需產(chǎn)物(5.0g，79％，白色固體)。Rf0.38(EtOAc/己烷1/1)。
中間體20
根據(jù)通用方法B、C、D和E，由中間體18和中間體1(使用起始原料1)制備中間體19?？偖a(chǎn)率29％，MS(m/z，ES+，M+H)316.99。
中間體21
在氬氣氛下，向100mL圓底燒瓶添加(R)-(-)-N-Boc-3-吡咯烷醇(1.5g)。然后加入CBr4(1.5g)，再加入無水THF(50mL)，并將混合物冷卻至5℃。然后經(jīng)5分鐘加入PPh3，反應用TLC跟蹤。過濾除去固體并用乙醚洗滌。濃縮濾液并通過柱色譜純化，用1:3EtOAc己烷洗脫。產(chǎn)量2.3g(>100％，不用進一步純化而使用)。1H-NMR(CDCl3)δ 4.48(br s，1H)，3.82-3.65(m，2H)，3.62-3.46(m，2H)，2.38-2-18(m，2H)，1.46(s，9H)。
中間體22(通用方法I)
將中間體1(1.0g)、中間體21(1.24g)和K2CO3(0.49g)在甲基乙基酮(10mL)中在室溫下攪拌過夜。使用起始原料1制備中間體1。將反應用水猝滅，用EtOAc萃取，并將有機層用Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物通過柱色譜純化，用1:4EtOAc己烷洗脫。產(chǎn)量0.60g(36％，棕色油狀物)。1H-NMR(CDCl3)δ 7.53(d，J＝8.3Hz，1H)，7.39(d，J＝8.3Hz，1H)，4.15-4.05(m，1H)，3.70-3.50(m，2H)，3.50-3.27(m，2H)，2.28-2.10(m，1H)，1.90-1.77(m，1H)，1.47(s，9H)，1.44(s，9H)。
中間體23
在-10℃下，將中間體22(0.40g)在DCM(4mL)中攪拌，并添加mCPBA(0.68g)。所得混合物在-10℃下攪拌30分鐘。該反應用NaHCO3溶液猝滅，用DCM萃取，用水洗滌。有機層用Na2SO4干燥，濃縮并通過柱色譜純化，用1:3 EtOAc己烷洗脫。產(chǎn)量0.30g(69％，白色固體)。LCMS(m/z，M+H)443。
中間體24(通用方法J)
將中間體23(0.30g)在THF(2mL)中攪拌，然后添加濃HCl，并加熱至80℃過夜。冷卻該反應混合物，去除溶劑并將剩余混合物用50％ NaOH水溶液堿化。將混合物冷卻至0℃并添加EtOAc，隨后添加BOC2O(0.155g)，并將所得混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物用EtOAc稀釋并分離有機相，用Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物通過柱色譜純化，用梯度為33-75％的EtOAc的己烷溶液洗脫。0.25g(定量的)。LCMS(m/z，M+H-tBu)321.00。
中間體25
根據(jù)通用方法I、D和J，由中間體1(0.5g)和N-Boc-4-溴哌啶(0.59g)制備中間體25。產(chǎn)量0.50g(58％總產(chǎn)率)。使用起始原料1制備中間體1。
實施例27.4-({6-氯-2-羥基-3-[({[2-(苯氧基)苯基]氨基}羰基)氨基]苯基}磺?；?-1-哌啶羧酸乙酯(通用方法K)
將中間體25(0.25g)和2-苯氧基苯基異氰酸酯(0.175g)溶于DMF(3mL)中，并將反應混合物在室溫下攪拌過夜。蒸發(fā)過量的DMF并將剩余混合物裝載在柱上，用1:3 EtOAc己烷洗脫。產(chǎn)量400mg(定量的，白色固體)MS(m/z，ES+，M+H)574.17。
實施例28.N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N′-[2-(苯氧基)苯基]脲
在室溫和氬氣氛下，將實施例27(0.20g)在CHCl3(2mL)中攪拌。加入三甲基碘硅烷(0.21g)，并將混合物加熱回流過夜。該反應沒有發(fā)生，直到添加兩批三甲基氯硅烷(0.037g兩批(pr.batch))和NaI(0.051g兩批)才開始，并將反應加熱至75℃再保持6小時。此時，添加MeOH并將混合物再攪拌30分鐘，然后去除溶劑，添加氨的甲醇溶液。該混合物用DCM萃取，用水洗滌有機層，用Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物用DCM/醚研制然后通過柱色譜純化，用甲醇洗脫。產(chǎn)量10mg(6％，淺棕色固體)MS(m/z，ES+，M+H)502.06。
中間體4-6、8、10-17、20、22-25為新的中間體。
表3.由中間體20、24和25制備的實施例

治療方法 式(I)的化合物或其可藥用鹽可用于制備用于在人或其它哺乳動物中預防性治療或治療性治療任何疾病狀態(tài)的藥物，該疾病由哺乳動物細胞(例如，但不限于，單核細胞和/或巨噬細胞)生成的過度的或未調(diào)節(jié)的IL-8細胞因子或其它結(jié)合至IL-8α或β受體的趨化因子(也稱為I型或II型受體)惡化或引起的。
因此，本發(fā)明提供治療趨化因子介導的疾病的方法，其中該趨化因子是結(jié)合至IL-8α或β受體的趨化因子，且該方法包括給藥有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。具體地，該趨化因子為IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。
式(I)的化合物以足以抑制細胞因子(特別是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78)功能的量給藥，以使它們被生物調(diào)節(jié)降至生理功能的正常水平，或在一些情況下降至低于正常水平，從而來改善疾病狀態(tài)。異常水平的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78，例如，在本發(fā)明中，由以下幾種情況組成(i)游離IL-8水平大于或等于1皮克/mL；(ii)任何細胞相關(guān)的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78高于正常生理水平；或(iii)在細胞或組織中存在IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78高于基礎(chǔ)水平，其中IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78分別生成。
存在許多疾病狀態(tài)，其中在惡化和/或造成該疾病中涉及過度的或未調(diào)節(jié)的IL-8產(chǎn)生。趨化因子介導的疾病包括牛皮癬、特應性皮炎、骨關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、節(jié)段性回腸炎(Crohn’s disease)、潰瘍性結(jié)腸炎、中風、敗血癥性休克、內(nèi)毒素性休克、革蘭氏陰性膿毒癥(gram negative sepsis)、中毒性休克綜合癥、心臟和腎再灌注損傷(cardiac and renal reperfusion injury)、腎小球腎炎、血栓形成、移植物抗寄主反應(graft vs.host reaction)、阿爾茨海默氏病、同種異體移植排斥、瘧疾、再狹窄(restinosis)、血管生成、動脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松、齦炎、病毒病(viral disease)例如鼻病毒或不希望的造血干細胞釋放。
這些疾病的主要特征為大量嗜中性粒細胞浸潤(massive neutrophilinfiltration)、T-細胞浸潤或新生血管生長(neovascular growth)，且其與增加的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78產(chǎn)生相關(guān)，該增加的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78產(chǎn)生是造成嗜中性粒細胞進入炎性位點的趨化性或內(nèi)皮細胞的定向生長的原因。與其它炎性細胞因子(IL-1、TNF和IL-6)不同，IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78具有促進嗜中性粒細胞趨化性、酶釋放(包括但不限于彈性蛋白酶釋放)以及過氧化物產(chǎn)生和活化的獨特性質(zhì)。該α-趨化因子，尤其是GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78，通過IL-8I型或II型受體發(fā)揮功效，可通過促進內(nèi)皮細胞的定向生長促進腫瘤的新血管形成。因此，抑制IL-8誘導的趨化性或活化將導致嗜中性粒細胞浸潤的直接減少。
最近的證據(jù)也表明趨化因子在治療HIV感染中的作用，Littleman等人，Nature 381，pp.661(1996)和Koup等人，Nature 381，pp.667(1996)。
目前的證據(jù)也表明使用IL-8抑制劑可治療動脈粥樣硬化。第一份文獻，Boisvert等人，J.Clin.Invest，1998，101353-363表明，通過骨髓移植，IL-8受體在干細胞(并且因此在單核細胞/巨噬細胞)的缺失導致在LDL受體缺失小鼠中粥樣硬化斑塊發(fā)展的減少。其它支持的文獻為Apostolopoulos等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.1996，161007-1012；Liu等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol，1997，17317-323；Rus等人，Atherosclerosis.1996，127263-271.；Wang等人，J.Biol.Chem.1996，2718837-8842；Yue等人，Eur.J.Pharmacol.1993，24081-84；Koch等人，Am.J.Pathol.，1993，1421423-1431.；Lee等人，Immunol.Lett.，1996，53，109-113.；和Terkeltaub等人，Arterioscler.Thromb.，1994，1447-53。
本發(fā)明還提供通過趨化因子受體拮抗劑式(I)的化合物治療CNS損傷的方法。這種治療在緊急治療(acute setting)中使用，也用來在那些認為易于損傷的個體中預防損傷。
在此定義的CNS損傷包括開放性或穿通性頭部創(chuàng)傷，例如通過手術(shù)，或閉合性頭顱損傷，例如通過對頭部區(qū)域的損傷。同樣在此定義內(nèi)的為缺血性發(fā)作(ischemic stroke)，特別是對于腦區(qū)域。
缺血性發(fā)作可定義為局部神經(jīng)疾病，其由對特定腦區(qū)域的不充足的血液供給所致，通常為栓子、血栓癥或血管的局部粥樣閉合的結(jié)果。炎性細胞因子在該區(qū)域的作用已經(jīng)顯現(xiàn)出來，而本發(fā)明提供有效治療這些損傷的方法。對于例如在此所述的急性損傷的相對較小的治療已經(jīng)可以得到。
TNF-α是具有促炎作用的細胞因子，包括內(nèi)皮細胞白細胞粘附分子表達。白細胞滲入缺血性腦損傷中，且抑制或減少TNF水平的化合物可用于治療缺血性腦損傷。參見Liu等人，Stroke，Vol.25.，No.7，Dp.1481-88(1994)，將其公開內(nèi)容引入作為參考。
閉合性頭部損傷的模型和用混合的5-LO/CO試劑治療在Shohami等人，J.of Vaisc & Clinical Physiology and Pharmacology，Vol.3，No.2，Dp.99-107(1992)中討論。發(fā)現(xiàn)了減少水腫形成的治療，從而改善在那些治療的動物中的功能結(jié)果。
式(I)的化合物以足以抑制IL-8結(jié)合至IL-8α或β受體的量給藥，如通過嗜中性粒細胞趨化性和激活減少所證明。式(I)化合物為IL-8結(jié)合的抑制劑的發(fā)現(xiàn)是基于式(I)化合物在體外受體結(jié)合測試的效果，其在本文中描述。已經(jīng)顯示式(I)化合物為II型IL-8受體抑制劑。
如在此使用的術(shù)語＂IL-8介導的疾病或疾病狀態(tài)＂是指在其中IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78通過以下方式起作用的任一以及全部疾病狀態(tài)通過其本身生成IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78，或通過IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78引起別的單核因子被釋放，該單核因子例如但不限于IL-1、IL-6或TNF。疾病狀態(tài)，其中例如IL-1為主要組分，且其產(chǎn)生或作用隨IL-8而加劇或分泌，因此可認為是IL-8介導的疾病狀態(tài)。
如在此使用的術(shù)語＂趨化因子介導的疾病或疾病狀態(tài)＂是指其中結(jié)合至IL-8α或β受體的趨化因子起作用的任一以及全部疾病狀態(tài)，該趨化因子例如但不限于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。這將包括下述疾病狀態(tài)，其中IL-8通過本身產(chǎn)生IL-8起作用或通過IL-8引起另外的單核因子被釋放起作用，該單核因子例如但不限于IL-1、IL-6或TNF。疾病狀態(tài)，其中例如IL-1為主要組分，且其產(chǎn)生或作用隨IL-8而加劇或分泌，因此可認為是IL-8介導的疾病狀態(tài)。
如在此使用的，術(shù)語＂細胞因子＂是指任一分泌的多肽，其影響細胞功能且為調(diào)節(jié)細胞在免疫、炎性或造血反應中細胞間相互作用的分子。細胞因子包括，但不限于，單核因子和淋巴因子，而不考慮何種細胞產(chǎn)生它們。例如，單核因子通常是指由單核細胞(例如巨噬細胞和/或單核細胞)產(chǎn)生和分泌。然而許多其它細胞也產(chǎn)生單核因子，例如自然殺傷細胞、成纖維細胞、嗜堿細胞、嗜中性粒細胞、內(nèi)皮細胞、腦星形細胞、骨髓基質(zhì)細胞、表皮角化細胞和B-淋巴細胞。淋巴因子通常是由淋巴細胞產(chǎn)生的。細胞因子的實例包括，但不限于，白細胞介素-1(IL-1)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和腫瘤壞死因子β(TNF-β)。
如在此使用的術(shù)語＂趨化因子＂是指任一影響細胞功能的分泌的多肽，且為調(diào)節(jié)免疫、炎性或造血反應中的細胞間的相互作用的分子，類似于上述術(shù)語＂細胞因子＂。趨化因子主要通過細胞跨膜分泌，并引起特定的白細胞和粒細胞、嗜中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞、T-細胞、B-細胞、內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的趨化性和活化。趨化因子的實例包括，但不限于，IL-8、GRO-α、GRO-β、GRO-γ、NAP-2、ENA-78、IP-10、MIP-1α、MIP-β、PF4、和MCP 1、2和3。
為在治療中使用式(I)化合物或其可藥用鹽，通常將其根據(jù)標準藥物實踐配制成藥物組合物。因此，本發(fā)明還涉及包含有效的、無毒性量的式(I)化合物以及可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
式(I)的化合物、其可藥用鹽和摻入其的藥物組合物可通過任何常規(guī)給藥途徑方便的給藥，例如口服、局部、腸胃外或吸入給藥。式(I)的化合物可以常規(guī)劑型給藥，該常規(guī)劑型根據(jù)常規(guī)方法將式(I)化合物與標準藥物載體組合而制備。式(I)的化合物可以常規(guī)劑量與已知的第二治療活性化合物組合給藥。這些方法可包括視情況混合、制粒和壓片或溶解成分以形成所需的制劑。應理解可藥用載體或稀釋劑的形式和特征由與其組合的活性成分的量、給藥途徑和其它已知變量而指示。該載體必須是＂可接受的＂，能與其它制劑成分相容且不有害于其接受者。
該使用的藥物載體可為，例如固體或液體。固體載體的實例為乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸等。液體載體的實例為糖漿、花生油、橄欖油、水等。類似地，該載體或稀釋劑可包括現(xiàn)有技術(shù)已知的延時(time delay)物質(zhì)，例如單獨的甘油單硬脂酯或甘油二硬脂酯或與蠟組合。
可使用許多類型的藥物形式。因此，如果使用固體載體，該制劑可被壓片以粉末或小丸形式置于硬明膠膠囊中，或以含片(troche)或錠劑形式。固體載體的量可有很大改變但優(yōu)選為約25mg至約1g。當使用液體載體，該制劑是以糖漿、乳劑、軟膠膠囊、注射用無菌液體如安瓿或非水液體混懸液形式。
式(I)的化合物可局部給藥，即非全身給藥。這包括外部施用式(I)化合物于表皮或口腔，和將這種化合物滴入耳、眼和鼻，以使該化合物不大量地進入血流中。相反，全身給藥是指口服、靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)和肌內(nèi)給藥。
適用于局部給藥的制劑包括適用于穿透皮膚進入炎癥位點的液體或半液體制劑，例如搽劑、洗劑、乳膏、軟膏或糊劑，和適用于給藥于眼、耳或鼻的滴劑。該活性成分可占用于局部給藥的制劑的0.001％至10％ w/w，例如1％至2％重量。然而其可占制劑的高達10％ w/w，但優(yōu)選占小于5％w/w，更優(yōu)選為制劑的0.1％至1％ w/w。
根據(jù)本發(fā)明的洗劑包括那些適于施用于皮膚或眼的洗劑。眼洗劑可包含任選含殺菌劑的無菌水溶液，且可按類似于制備滴劑的方法制備。施用于皮膚的洗劑或搽劑可包括促進干燥和冷卻皮膚的試劑，例如醇或或丙酮，和/或濕潤劑例如甘油或油(如蓖麻油或花生油)。
根據(jù)本發(fā)明的乳劑、軟膏或糊劑為用于外敷的活性成分的半固體制劑?？赏ㄟ^將以細粒或粉末形式的活性成分單獨或在水性或非水性液體中的溶液或懸浮液中進行混合而制備它們，并借助合適的機械裝置，借助油脂性基質(zhì)或非油脂性基質(zhì)。該基質(zhì)可包括烴類，如硬石蠟、軟石蠟或液體石蠟、甘油、蜂蠟、金屬皂；粘質(zhì)；天然源的油，如扁桃仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄欖油；羊毛脂或其衍生物，或脂肪酸如硬脂酸或油酸與如丙二醇的醇或大粒凝膠。該制劑可摻入任何合適的表面活性劑，如陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑或非離子表面活性劑，如脫水山梨糖醇酯或其聚氧乙烯衍生物。也可包含懸浮劑如天然膠、纖維素衍生物或無機物，如硅質(zhì)二氧化硅(silicaceous silicas)，和其它成分如羊毛脂。
根據(jù)本發(fā)明的滴劑可包括無菌水性或油性溶液或懸浮液，且可通過將活性成分溶解在殺菌的和/或殺真菌的試劑和/或任何其它合適的防腐劑的合適水溶液中而制備，且優(yōu)選包括表面活性劑。然后可通過過濾將所得溶液澄清，轉(zhuǎn)移至合適的容器中，然后密封并通過高壓滅菌或在98-100℃保持半小時而滅菌。或者，可通過過濾滅菌溶液并通過無菌操作轉(zhuǎn)移至容器中。適用于加入滴劑中的殺菌和殺真菌的試劑的實例為硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002％)、苯扎氯銨(0.01％)和醋酸洗必泰(0.01％)。制備油性溶液的合適溶劑包括甘油、稀釋的醇和丙二醇。
可腸胃外給藥式(I)的化合物，即通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)或腹腔內(nèi)給藥。腸胃外給藥的皮下和肌內(nèi)形式通常是優(yōu)選的。這種給藥的適當?shù)膭┬涂赏ㄟ^常規(guī)方法制備。式(I)的化合物也可通過吸入給藥，即通過鼻內(nèi)和口腔吸入給藥。這種給藥的合適劑型，如氣霧劑或壓力定量氣霧劑可通過常規(guī)方法制備。
對于所有在此公開的式(I)的化合物的使用方法，每日口服劑量方案優(yōu)選總體重的約0.01至約80mg/kg。每日腸胃外劑量方案優(yōu)選總體重的約0.001至約80mg/kg。每日局部劑量方案優(yōu)選0.1mg至150mg，給藥1至4次/日，優(yōu)選2或3次/日。每日吸入劑量方案優(yōu)選每日約0.01mg/kg至約1mg/kg。本領(lǐng)域技術(shù)人員也應理解式(I)化合物或其可藥用鹽的最佳量和每次給藥的間隔將由治療的疾病的性質(zhì)和程度，給藥形式、途徑和位點，和具體治療的病人而確定，且這些最佳方案可通過常規(guī)技術(shù)而確定。本領(lǐng)域技術(shù)人員也應理解治療的最佳過程，即對于限定天數(shù)的每天給予的式(I)化合物或其可藥用鹽的劑量的次數(shù)，其可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員使用治療確定檢測的常規(guī)過程而確定。
組合 根據(jù)本發(fā)明的化合物和藥物制劑可與一種或多種其它治療劑組合使用或包括一種或多種其它治療劑，該一種或多種其它治療劑例如選自抗炎劑、抗膽堿能藥(特別是M1/M2/M3受體拮抗劑)、β2-腎上腺素受體激動劑、抗感染藥(如抗生素)、抗病毒劑或抗組胺藥。因此本發(fā)明另一方面提供一種組合，其包括式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與一種或多種治療活性藥物，例如選自抗炎劑(如皮質(zhì)類固醇或NSAID)、抗膽堿能藥、β2-腎上腺素受體激動劑、抗感染藥(如抗生素)或抗病毒劑或抗組胺藥。本發(fā)明一個實施方案包括組合，其包括式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與β2-腎上腺素受體激動劑和/或抗膽堿藥，和/或PDE-4抑制劑和/或抗組胺藥。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的是，視需要其它治療成分可以鹽形式使用，例如作為堿金屬或胺鹽或作為酸加成鹽，或前藥，或酯(例如低級烷基酯)，或作為溶劑合物(例如水合物)，以優(yōu)化治療成分的活性和/或穩(wěn)定性和/或物理特性(如溶解性)。同樣清楚的是，視需要可將治療成分以光學純形式使用。
在一個實施方案中，本發(fā)明包括含本發(fā)明化合物和β2-腎上腺素受體激動劑的組合。
β2-腎上腺素受體激動劑的實例包括沙美特羅(其可為外消旋化合物或單一對映異構(gòu)體，如R-對映異構(gòu)體)、沙丁胺醇(其可為外消旋化合物或單一對映異構(gòu)體，如R-對映異構(gòu)體)、福莫特羅(其可為外消旋化合物或單一非對映異構(gòu)體，如R，R-非對映異構(gòu)體)、沙甲胺醇、非諾特羅、卡莫特昔羅、依坦特羅、那明特羅、克侖特羅、吡布特羅、氟丁特羅、瑞普特羅、班布特羅、吲哚卡特羅(indacaterol)、特布他林及其鹽，例如沙美特羅的昔萘酸鹽(1-羥基-2-萘甲酸鹽)、沙丁胺醇的硫酸鹽或游離堿或福莫特羅的富馬酸鹽。在一個實施方案酯，所述β2-腎上腺素受體激動劑為長效β2-腎上腺素受體激動劑，例如，提供有效支氣管擴張約12小時或更長的化合物。其它β2-腎上腺素受體激動劑包括那些公開于WO2002/066422、WO2002/070490、WO2002/076933、WO2003/024439、WO2003/072539、WO2003/091204、WO2004/016578、WO2004/022547、WO2004/037807、WO2004/037773、WO2004/037768、WO2004/039762、WO2004/039766、WO2001/42193和WO2003/042160中的激動劑。
β2-腎上腺素受體激動劑的其它實例包括 3-(4-{[6-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)苯基]乙基}氨基)己基]氧基}丁基)苯磺酰胺； 3-(3-{[7-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-羥基甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧基}丙基)苯磺酰胺； 4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯芐基)氧基]乙氧基}己基)氨基]-1-羥基乙基}-2-(羥基甲基)苯酚； 4-{(1R)-2-[(6-{4-[3-(環(huán)戊基磺?；?苯基]丁氧基}己基)氨基]-1-羥基乙基}-2-(羥基甲基)苯酚； N-[2-羥基-5-[(1R)-1-羥基-2-[[2-4-[[(2R)-2-羥基-2-苯基乙基]氨基]苯基]乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺； N-2{2-[4-(3-苯基-4-甲氧基苯基)氨基苯基]乙基}-2-羥基-2-(8-羥基-2(1H)-喹啉酮(quinolinon)-5-基)乙基胺；和 5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙基氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮。
該β2-腎上腺素受體激動劑可以為與可藥用酸形成的鹽的形式，該可藥用酸選自硫酸、鹽酸、富馬酸、羥基萘酸(例如1-或3-羥基-2-萘酸)、肉桂酸、取代的肉桂酸、三苯基乙酸、氨基磺酸、對氨基苯磺酸、萘丙烯酸、苯甲酸、4-甲氧基苯甲酸、2-或4-羥基苯甲酸、4-氯苯甲酸和4-苯基苯甲酸。
合適的抗炎劑包括皮質(zhì)類固醇。可用于與本發(fā)明化合物組合的皮質(zhì)類固醇的實例是那些口服和吸入的皮質(zhì)類固醇及其具有抗炎活性的前藥。
實例包括甲基潑尼松龍、潑尼松龍、地塞米松、丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄(androsta)-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氟甲基酯(糠酸氟替卡松)、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-(2，2，3，3-四甲基環(huán)丙基羰基)氧基-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氰基甲基酯和6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-(1-甲基環(huán)丙基羰基)氧基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氟甲基酯、倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、莫米松酯(例如莫米松糠酸酯)、曲安奈德、羅氟奈德、環(huán)索奈德(16α，17-[[(R)-環(huán)己基亞甲基]雙(氧基)]-11β，21-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮)、布替可特丙酸酯、RPR-106541和ST-126。在一個實施方案中皮質(zhì)類固醇包括丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-(2，2，3，3-四甲基環(huán)丙基羰基)氧基-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氰基甲基酯和6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-(1-甲基環(huán)丙基羰基)氧基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氟甲基酯。在一個實施方案中該皮質(zhì)類固醇為6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羰酸S-氟甲基酯。
皮質(zhì)類固醇的實例包括那些公開于WO2002/088167、WO2002/100879、WO2002/12265、WO2002/12266、WO2005/005451、WO2005/005452、WO2006/072599和WO2006/072600中的皮質(zhì)類固醇。
具有糖皮質(zhì)激素激動作用(agonism)并可具有對轉(zhuǎn)活(transactivation)的反式阻抑作用(transrepression)選擇性、且可用于組合治療的非甾體化合物包括那些在以下公開的專利申請和專利中所涉及的WO2003/082827、WO1998/54159、WO2004/005229、WO2004/009017、WO2004/018429、WO2003/104195、WO2003/082787、WO2003/082280、WO2003/059899、WO2003/101932、WO2002/02565、WO2001/16128、WO2000/66590、WO2003/086294、WO2004/026248、WO2003/061651、WO2003/08277、WO2006/000401、WO2006/000398和WO2006/015870。
具有糖皮質(zhì)激素激動作用可具有對轉(zhuǎn)活的反式阻抑作用選擇性、且可用于組合治療的非甾體化合物包括那些在以下專利中所涉及的WO2003/082827、WO1998/54159、WO2004/005229、WO2004/009017、WO2004/018429、WO2003/104195、WO2003/082787、WO2003/082280、WO2003/059899、WO2003/101932、WO2002/02565、WO2001/16128、WO2000/66590、WO2003/086294、WO2004/026248、WO2003/061651和WO2003/08277。
抗炎劑的實例包括非甾體抗炎藥(NSAID’s)。
NSAID’s的實例包括色甘酸鈉、奈多羅米鈉、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如，茶堿、PDE4抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑)、白細胞三烯拮抗劑、白細胞三烯合成的抑制劑(例如孟魯司特)、iNOS抑制劑、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑、β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動劑或拮抗劑(例如腺苷2a激動劑)、細胞因子拮抗劑(例如趨化因子拮抗劑，如CCR3拮抗劑)或細胞因子合成的抑制劑或5-脂加氧酶抑制劑。在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于口服給藥的iNOS(可誘導性一氧化氮合酶)抑制劑。iNOS抑制劑的實例包括那些公開于WO1993/13055、WO1998/30537、WO2002/50021、WO1995/34534和WO1999/62875中的。CCR3抑制劑的實例包括那些公開于WO2002/26722中的CCR3抑制劑。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供使用式(I)的化合物與磷酸二酯酶4 (PDE4)抑制劑的組合，例如在適用于吸入的制劑的情況。該用于本發(fā)明該方面的PDE4抑制劑可為任何已知的化合物或公開作為PDE4抑制劑，例如作為PDE4B和/或PDE4D抑制劑。
PDE4抑制化合物包括順式-4-氰基-4-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸、2-甲酯基-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮和順式-[4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇]。還包括順式-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷-1-羧酸(也已知為西洛司特)及其鹽、酯、前藥或物理形式，其描述于1996年9月3日授權(quán)的美國專利5,552,438。
其它PDE4抑制化合物包括源自Elbion(Hofgen，N.等人15th EFMC IntSymp Med Chem(Sept 6-10，Edinburgh)1998，Abst P98中的AWD-12-281(N-(3，5-二氯-4-吡啶基)-1-[4-氟苯基)甲基]-5-羥基-α-氧代-1H-吲哚-3-乙酰胺)；CAS參考No.247584020-9)；命名為NCS-613(INSERM)的9-芐基腺嘌呤衍生物；源自Chiroscience和Schering-Plough的D-4418；產(chǎn)自Pfizer的稱為CI-1018(PD-168787)的苯并二氮雜

PDE4抑制劑；由Kyowa Hakko公開于WO99/16766的苯并二氧雜環(huán)戊烯衍生物；源自Kyowa Hakko的K-34；源自Napp(Landells，L.J.等人Eur Resp J[Annu Cong Eur Resp Soc(Sept 19-23，Geneva)1998]1998，12(Suppl.28)Abst P2393)的V-11294A；羅氟司特(roflumilast)(3-(環(huán)丙基甲氧基)-N-(3，5-二氯-4-吡啶基)-4-(二氟甲氧基)苯甲酰胺)(參見Byk Gulden Lomberg的EP 0 706 513 B1，例如參見其實施例5)；源自Byk-Gulden的2，3-二氮雜萘酮(WO1999/47505)；普馬芬群(Pumafentrine)，(-)-p-[(4aR*，10bS*)-9-乙氧基-1，2，3，4，4a，10b-己氫-8-甲氧基-2-甲基苯并[c][1，6]萘啶-6-基]-N，N-二異丙基苯甲酰胺，其為混合的PDE3/PDE4抑制劑，由Byk-Gulden制備和公開，目前Altana；由Almirall-Prodesfarma正在研發(fā)的阿羅茶堿；源自Vernalis的VM554/UM565；或T-440(Tanabe Seiyaku；Fuji，K.等人J Pharmacol Exp Ther，1998，284(1)162)和T2585。
其它的PDE4抑制化合物公開于公開的國際專利申請WO2004/024728、WO2004/056823、WO2004/103998(例如其中公開的實施例399或544)、WO2005/058892、WO2005/090348、WO2005/090353和WO2005/090354，全部都以Glaxo Group Limited的名義。
抗膽堿能藥的實例為那些在毒蕈堿受體作為拮抗劑的化合物，尤其是那些作為M1或M3受體的拮抗劑的化合物、M1/M3或M2/M3受體的雙重拮抗劑或M1/M2/M3受體的泛-拮抗劑。經(jīng)吸入給藥的示例性化合物包括異丙托銨(ipratropium)(例如，作為溴化物，CAS 22254-24-6，以Atrovent名稱賣)，氧托銨(oxitropium)(例如作為溴化物，CAS 30286-75-0)和噻托銨(tiotropium)(例如，作為溴化物，CAS 136310-93-5，以Spiriva名稱賣)。同樣感興趣的為瑞伐托酯(例如，作為氫溴化物，CAS262586-79-8)和LAS-34273，其公開于WO200I/04118?？诜o藥的示例性化合物包括哌侖西平(CAS28797-61-7)、達非那新(以Enablex名稱銷售的氫溴化物CAS 133099-04-4或CAS 133099-07-7)、奧昔布寧(CAS 5633-20-5，以Ditropan名稱銷售)、特羅地林(CAS 15793-40-5)、托特羅定(其酒石酸鹽CAS 124937-51-5或CAS124937-52-6，以Detro1名稱銷售)、奧替銨(otilonium)(例如，作為溴化物CAS 26095-59-0，以Spasmomen名稱銷售)、曲司氯銨(CAS 10405-02-4)和solifenacin(其琥珀酸鹽CAS 242478-37-1或CAS 242478-38-2，也已知為YM-905，且以Vesicare名稱銷售)。
其它化合物公開于WO 2005/037280、WO 2005/046586和WO2005/104745。本發(fā)明的組合包括，但不限于 (3-內(nèi))-3-(2，2-二-2-噻吩基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； (3-內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物； 4-[羥基(二苯基)甲基]-1-{2-[(苯基甲基)氧基]乙基}-1-氮鎓雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷溴化物；和 (1R，5S)-3-(2-氰基-2，2-二苯基乙基)-8-甲基-8-{2-[(苯基甲基)氧基]乙基}-8-氮鎓雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物。
其它抗膽堿能藥包括公開于美國專利申請60/487981的化合物，將其全部在此引入作為參考。這些包括，例如 (內(nèi))-3-(2-甲氧基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙腈； (內(nèi))-8-甲基-3-(2，2，2-三苯基-乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酰胺； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酸； (內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； (內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙-1-醇； N-芐基-3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酰胺； (內(nèi))-3-(2-氨基甲?；?2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； 1-芐基-3-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲； 1-乙基-3-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-乙酰胺； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯甲酰胺； 3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二-噻吩-2-基-丙腈； (內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯磺酰胺； [3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲； N-[3-((內(nèi))-8-甲基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-甲磺酰胺；和/或 (內(nèi))-3-{2，2-二苯基-3-[(1-苯基-甲酰氧基)-氨基]-丙基}-8，8-二甲基-8-氮鎓-雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物。
其它化合物包括 (內(nèi))-3-(2-甲氧基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； (內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； (內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物； (內(nèi))-3-(2-氨基甲?；?2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物； (內(nèi))-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；和/或 (內(nèi))-3-{2，2-二苯基-3-[(1-苯基-甲酰氧基)-氨基]-丙基}-8，8-二甲基-8-氮鎓雜-雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含式(I)化合物或其可藥用鹽與H1拮抗劑的組合。H1拮抗劑的實例包括，但不限于，amelexanox、阿司咪唑、阿扎他定、氮卓斯汀、阿伐斯汀、溴苯那敏、西替利嗪、左西替利嗪、乙氟利嗪、氯苯那敏、氯馬斯汀、賽克力嗪、卡瑞斯汀、賽庚啶、卡比沙明、他洛他定(descarboethoxyloratadine)、多西拉敏、二甲茚定、依巴斯汀、依匹斯汀、乙氟利嗪、非索非那定、羥嗪、酮替芬、氯雷他定、左卡巴斯汀、咪唑斯汀、美喹他嗪、米安色林、諾柏斯汀、美克洛嗪、諾阿司咪唑、奧洛他定、哌香豆司特、美吡拉敏、異丙嗪、特非那定、曲吡那敏、替美斯汀、阿利馬嗪和曲普利啶，特別是西替利嗪、左西替利嗪、乙氟利嗪和非索非那定。在另一實施方案中，本發(fā)明提供包含式(I)化合物或其可藥用鹽與H3拮抗劑(和/或反激動劑)的組合。H3拮抗劑的實例包括，例如，那些公開于WO2004/035556和WO2006/045416的化合物。其它可與本發(fā)明的化合物組合使用的組胺受體拮抗劑包括H4受體的拮抗劑(和/或反激動劑)，例如公開于Jablonowski等人，J.Med.Chem.463957-3960(2003)的化合物。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含式(I)化合物或其可藥用鹽與CCR5受體拮抗劑的組合，該受體拮抗劑如4，4-二氟-N-((1S)-3-{3-[3-甲基-5-(1-甲基乙基)-4H-1，2，4-三唑-4-基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基}-1-苯基丙基)環(huán)己烷甲酰胺(carboxamide)
在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含式(I)化合物或其可藥用鹽與CXCR3受體拮抗劑如N-((1R)-1-{3-[4-(乙基氧基)苯基]-4-氧代-3，4-二氫吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基}乙基)-N-(3-吡啶基甲基)-2-{4-[(三氟甲基)氧基]苯基}乙酰胺的組合
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與PDE4抑制劑的組合。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與β2-腎上腺素受體激動劑的組合。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與皮質(zhì)類固醇的組合。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與非甾體GR激動劑的組合。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與抗膽堿藥的組合。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與抗組胺藥的組合。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與PDE4抑制劑和β2-腎上腺素受體激動劑的組合。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物和/或其可藥用鹽、溶劑合物或生理功能性衍生物與抗膽堿藥和PDE-4抑制劑的組合。
上述組合可以方便地以藥物制劑的形式提供使用，因此包含上述組合與可藥用稀釋劑或載體的藥物制劑代表本發(fā)明的另一方面。
這類組合的化合物可以依次或同時以單獨或組合的藥物制劑的形式給藥。在一個實施方案中，該單獨的化合物將在組合的藥物制劑中同時給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員將易于理解已知治療劑的合適劑量。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與另一治療活性劑組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與PDE4抑制劑組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與β2-腎上腺素受體激動劑組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與皮質(zhì)類固醇組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與非甾體GR激動劑組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與抗膽堿藥組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與抗組胺藥組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物與CXCR3受體拮抗劑組合的藥物組合物。
因此，在另一方面，本發(fā)明提供本發(fā)明與CCR5受體拮抗劑組合的藥物組合。
本發(fā)明將參考以下生物實施例進行描述，其僅僅為示例性的，而不作為對本發(fā)明范圍的限制。
生物實施例 本發(fā)明化合物的IL-8和GRO-α趨化因子抑制作用通過以下體外測試確定 受體結(jié)合測定 [125I]IL-8(人重組體)得自GE Healthcare，具有特異性活性2000Ci/mmol。所有其它化學品為分析等級。高水平的重組體人CXCR1(α型IL-8)和CXCR2(β型IL-8)受體各自在非貼壁的中國倉鼠卵巢(ChineseHamster Ovary，CHO)細胞中表達，如先前所述(Holmes，等人，Science，1991，253，1278)。根據(jù)先前所述的方案(Haour，等人，J.Biol.Chem.，249pp2195-2205(1974))制備膜，將其引入作為參考，以制備本文的膜所需的程度為限，除了勻漿緩沖液改為40mM Tris-HCL(pH7.5)、1mM MgSO4、0.5mMEGTA(乙二醇-雙(2-氨基乙基醚)-N，N，N’，N’-四-乙酸)、1mM PMSF(α-甲苯磺酰氟)、2.5mg/L抑酶醛肽和0.1mg/ml抑肽酶。將細胞勻漿并在2,000rpm離心10分鐘。上清液在100,000xg離心1小時。去除上清液并將膜保存在-80℃。使用BioRad試劑根據(jù)制造商方案使用牛血清白蛋白(BSA)作為標準測定膜蛋白濃度。
所有IL-8結(jié)合使用親近閃爍檢測(Scintillation Proximity Assays，SPA)使用麥胚凝集素珠以96-孔板模式進行。膜CHO-CXCR1或CHO-CXCR2在結(jié)合緩沖液中在4℃與珠預培養(yǎng)30分鐘。緩沖液包含20mM Bis-Trispropane緩沖液，pH8.0，包含1mM MgSO4、0.1mM EDTA和25mM NaCl?；衔镌贒MSO中稀釋，最終稀釋為20X(終化合物濃度在1nM至30uM且終DMSO濃度為5％)。試驗在96孔板(optiplate 96，Packard)中在室溫下在0.1mL含膜和0.04％ CHAPS(3-[(3-膽酰胺丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽)、0.0025％ BSA和0.23nM[125I]IL-8的結(jié)合緩沖液中進行。將板在平臺上搖動1小時，在培養(yǎng)結(jié)束時，將板以2,000rpm離心5分鐘，用Top Count計數(shù)器進行計數(shù)。所述的重組體IL-8 Rα、CXCR1或I型受體在此也稱為非許可受體，所述的重組體IL-8 Rβ、CXCR2或II型受體稱為許可受體。
式(I)的示例性化合物，實施例1-38，在此試驗中表現(xiàn)出陽性抑制活性，IC50水平<30uM，并且認為是有活性的。
趨化性測定 這些化合物的體外抑制特性在嗜中性粒細胞趨化性試驗中測定。使用percoll不連續(xù)梯度離心、右旋糖酐沉降和低滲裂解(hypotonic lysis)從外周全血分離原代人中性白細胞。將化學引誘物IL-8(CXCL8)或GRO-α(CXCL1)置于96多孔室(ChemoTx System，Neuro Probe，Gaithersburg，MD)的底室。使用的激動劑濃度為EC80濃度。通過5μm聚碳酸酯膜分隔兩室。當測試本發(fā)明化合物時，將它們與細胞預培養(yǎng)，然后置于濾器的上部。在加濕培養(yǎng)箱中于37℃和5％CO2下進行趨化性測試45分鐘。在培養(yǎng)期間結(jié)束時，去除膜并使底室中遷移的細胞轉(zhuǎn)移至96孔板中。使用發(fā)光細胞生存力測試(Celltiter-Glo，Promega，Madison，WI)測定這些細胞。每種樣品一式二份進行測試且每種化合物重復實驗3次。陽性對照細胞是沒有添加化合物的細胞，且代表最大趨化反應。陰性對照(未刺激的)是在底室中不添加趨化因子。陽性對照和陽性對照的差異表示細胞的趨化活性。
在此試驗中測試實施例1至3。如果IC50值<5uM，則化合物認為是有活性的。
CD11b人全血測定 測試所示化合物抑制GROα誘導整聯(lián)蛋白CD11b在人全血中的嗜中性粒細胞上的表達的能力。
使用蝴蝶型管(butterfly line)和含有0.2mL工作肝素鈉(working SodiumHeparin)的10ml注射器抽血(9ml)。將血液保存在37℃，直到下面的步驟5中放置在冰上為止。然后，將化合物儲備溶液稀釋至最大最終濃度的12倍，120uM。然后，在溶媒中進行半對數(shù)(HalfLog)系列稀釋。然后，將10微升該化合物稀釋物或溶媒加入到適宜的12x75聚丙烯管中。每管加入100微升全血并在37℃水浴中培養(yǎng)10分鐘，該水浴開始時(溫和)振蕩并在5分鐘時再次振蕩。將該GROα儲備液在0.1％ BSA-DPBS中稀釋1:166.66至120nM的＂12x＂濃度，接著將10ul的GROα稀釋液或0.1％ BSA-DPBS加入到適宜的管中，這樣最終的GROα濃度等于10nM。將這些管在37℃培養(yǎng)10分鐘，最初溫和地手動振蕩并在5分鐘時再次振蕩。然后，將樣品放在冰上，加入250ul冰冷的CellFix工作稀釋液，接著在冰上培養(yǎng)1分鐘。在GROα培養(yǎng)期間，準備1.5ml Eppendorf管，加入適宜的抗體。除同種型對照物接受10uL的IgG2a-FITC而不是CD11b外，每管接受10ul的CD11b-FITC和5ul的CD16-PE。將每管中的50uL經(jīng)固定的血液加入到適宜的Eppendorf管中。然后，樣品在4℃在黑暗中培養(yǎng)20分鐘。將加入到500ul冷DPBS中的血液/抗體混合物加入到適當標記的12 x 75聚苯乙烯管中。所得混合物保持在冰上。加入LDS儲備液(10uL)，接著將該混合物在4℃培養(yǎng)10分鐘。接著進行流式分析。將樣品保存在黑暗環(huán)境中。使LDS的加入與樣品在流式細胞儀上的收集錯開，這樣所有樣品在LDS加入后運行～10-20分鐘。
使用中等流速進行流式收集且使用LDS信號增加FL3閾值以從分析中除去紅細胞。使用未標記的樣品和單一顏色樣品以減去LDS到PE中的溢出和該PE到FITC的溢出和FITC到PE的溢出，從而適當?shù)卦O定顏色補償。對于BD LSR細胞計數(shù)器，LDS＝FL3，PE＝FL2，F(xiàn)ITC＝FL1。收集SSC對FSC滿足粒細胞門并且FL2信號顯示CD16陽性的最少2000-3000個事件。
在此試驗中，實施例1-3、12、17、18、23和26中的式(I)的示例性化合物，表現(xiàn)出陽性抑制活性，IC50值<5uM，認為是有活性的。通過上述試驗測試的實施例1-3、12、17、18、23和26的化合物具有約2uM至約0.5uM的IC50。
在穩(wěn)定表達CXCR2和Gα16的CHO-K1細胞中的鈣動員 穩(wěn)定表達CXCR2和Gα16的CHO-K1細胞在DMEM/F12(HAM’s)1:1，w/10％ FCS(熱滅活)，w/2mM L-谷氨酰胺，w/0.4mg/ml G418中生長至80％匯合，同時在37℃ 5％ CO2培養(yǎng)箱中孵育。在試驗前24小時，收獲細胞并以每孔40,000細胞鋪板在96孔黑色壁、透明底的板(Packard View)中，接著放回到CO2培養(yǎng)箱中。在試驗當天，化合物在100％ DMSO中連續(xù)稀釋至300X所需的試驗濃度。從細胞中吸出生長培養(yǎng)基并用100uL負載培養(yǎng)基(EMEM含Earl＂s鹽w/L-谷氨酰胺，0.1％ BSA，(來自Seriologicals公司的Bovuminar Cohen級分V)、4uM氟-4-乙酰氧基甲基酯熒光指示劑染料(Fluo-4AM，來自Molecular Probes)，和2.5mM丙磺舒)替換，接著在37℃在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時。吸出負載培養(yǎng)基，用100uL含Earl＂s鹽w/L-谷氨酰胺、0.1％明膠和2.5mM丙磺舒的EMEM替換，接著再培養(yǎng)10分鐘。將在DMSO中連續(xù)稀釋過的300X化合物(3ul)轉(zhuǎn)入到含297微升KRH(120mM NaCl，4.6mM KCl，1.03mM KH2PO4，25mM NaHCO3，1.0mM CaCl2，1.1mM MgCl2，11mM葡萄糖，20mM HEPES(pH7.4))w/2.5mM丙磺舒和0.1％明膠的96孔板中(化合物現(xiàn)在為3X)。從細胞中吸出培養(yǎng)基，細胞用KRHw/2.5mM丙磺舒、w/0.1％明膠洗滌3次。將含0.1％明膠的KRH(100ul)w/2.5mM丙磺舒加入到孔中，然后將50ul在KRH w/2.5mM丙磺舒和0.1％明膠中的3X化合物加入到孔中(化合物現(xiàn)在為1X)，接著在37℃在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10分鐘。將板放到FLIPR上(熒光成像板讀數(shù)器(FluorometricImaging Plate Reader)，Molecular Devices，Sunnyvale CA)進行之前所述的分析(Sarau等人，1999)。對于化合物每一濃度，分別測定相對于由1.0nM IL-8(CXCR2的EC80濃度)所誘導的最大人IL-8誘導的Ca2+動員(maximal humanIL-8-induced Ca2+ mobilization)的百分比，并計算IC50，所述IC50為抑制1.0nM IL-8誘導的最大應答的50％的測試化合物濃度。在此試驗中，實施例1-38表現(xiàn)出陽性抑制活性，IC50值<10uM，認為是有活性的。由上述試驗所測定的化合物1-38具有約6000nM至約5nM的IC50。
上面的說明充分公開了本發(fā)明，包括其優(yōu)選實施方案。本文特別公開的實施方案的變化和改進都在權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。一般認為，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要更多的發(fā)揮，根據(jù)前面的說明就可以最大程度地利用本發(fā)明。因此，在此的實施例僅僅是舉例說明，而不是以任何方式限定本發(fā)明的范圍。其中要求保護排他權(quán)或特權(quán)的本發(fā)明實施方案在權(quán)利要求書中進行了定義。
權(quán)利要求
1.根據(jù)式(I)的化合物
其中
X選自鹵素、C1-3烷基、C1-3烷氧基、氰基、CF3和OCF3；
R2選自C3-6環(huán)烷基、苯基和雜芳基，其中所述苯基或雜芳基部分任選獨立地被選自C1-3烷基、鹵素、CF3、OCF3、苯氧基和芐氧基的取代基取代一次或兩次；或
R2表示被亞甲二氧基或(二鹵代)-亞甲二氧基取代的苯基；
R1表示C4-8雜環(huán)基(CH2)n，其中所述雜環(huán)基部分任選獨立地被選自C1-3烷基、C(O)OR4和C(O)R5的取代基取代一次或兩次；
R4和R5獨立地為C1-3烷基；和
n為0或1；或
R1選自下述環(huán)體系(a-k)
其中R3為H或C1-3烷基；
或其可藥用鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X為鹵素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X為Cl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R2為任選獨立地被選自C1-3烷基、鹵素、OCF3和苯氧基的取代基取代一次或兩次的苯基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R2選自3-氟-2-甲基苯基、2-三氟甲氧基苯基、2-氯-3-氟苯基、2-乙基苯基或2-苯氧基苯基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R2為3-氟-2-甲基苯基或2-氯-3-氟苯基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R2為任選被鹵素取代一次的吡啶基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中R2為2-氯-3-吡啶基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中n為0且R1為雜環(huán)基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自氮雜環(huán)丁烷基、哌啶基和吡咯烷基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中n為1且R1為吡咯烷基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為3-外-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基或3-外-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其選自
N-(4-氯-2-羥基-3-{[(3-外)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基]磺?；鶀苯基)-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3-吡咯烷基甲基)磺?；鵠苯基}-N＇-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲；
N-[3-(3-氮雜環(huán)丁烷基磺酰基)-4-氯-2-羥基苯基]-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3-吡咯烷基甲基)磺?；鵠苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-[3-(3-氮雜環(huán)丁烷基磺?；?-4-氯-2-羥基苯基]-N＇-(2-氯-3-氟苯基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基)脲；
N-[3-(3-氮雜環(huán)丁烷基磺?；?-4-氯-2-羥基苯基]-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺酰基]-4-氯-2-羥基苯基}-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3-吡咯烷基甲基)磺?；鵠苯基}脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2-乙基苯基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N＇-(2-乙基苯基)脲；
N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N＇-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺酰基)苯基]-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺酰基)苯基]-N＇-(2-乙基苯基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N＇-{2-[(三氟甲基)氧基]苯基}脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N＇-[2-(苯氧基)苯基]脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-[2-(苯氧基)苯基]脲；
4-{[6-氯-3-({[(3-氟-2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺?；鶀-1-哌啶羧酸乙酯；
N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N＇-(2-氯-3-氟苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
4-({6-氯-2-羥基-3-[({[2-(苯氧基)苯基]氨基}羰基)氨基]苯基}磺?；?-1-哌啶羧酸乙酯；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}-N＇-[2-(苯氧基)苯基]脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺酰基)苯基]脲；
4-{[6-氯-3-({[(2-氯-3-氟苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺?；鶀-1-哌啶羧酸乙酯；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]脲；和
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2，3-二氯苯基)脲；
或其可藥用鹽。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其選自
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺酰基)苯基]-N＇-[2-(苯氧基)苯基]脲；
4-{[6-氯-3-({[(3-氟-2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺酰基}-1-哌啶羧酸乙酯；
N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺酰基]-4-氯-2-羥基苯基}-N＇-(2-氯-3-氟苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
4-({6-氯-2-羥基-3-[({[2-(苯氧基)苯基]氨基}羰基)氨基]苯基}磺?；?-1-哌啶羧酸乙酯；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}-N＇-[2-(苯氧基)苯基]脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-[4-氯-2-羥基-3-(4-哌啶基磺?；?苯基]脲；
4-{[6-氯-3-({[(2-氯-3-氟苯基)氨基]羰基}氨基)-2-羥基苯基]磺酰基}-1-哌啶羧酸乙酯；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-吡咯烷基磺?；鵠苯基}脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3R)-3-吡咯烷基磺酰基]苯基}脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]脲；和
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2，3-二氯苯基)脲；
或其可藥用鹽。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其選自
N-{3-[(3-外)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基磺?；鵠-4-氯-2-羥基苯基}-N＇-(2-氯-3-氟苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺酰基]苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺酰基]苯基}脲；
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺酰基)苯基]-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺酰基)苯基]脲；和
N-[4-氯-2-羥基-3-(3-哌啶基磺?；?苯基]-N＇-(2，3-二氯苯基)脲；
或其可藥用鹽。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其選自
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N＇-(3-氟-2-甲基苯基)脲；
N-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺?；鵠苯基}-N＇-(2-氯-3-吡啶基)脲；和
N-(2-氯-3-氟苯基)-N＇-{4-氯-2-羥基-3-[(3S)-3-哌啶基磺酰基]苯基}脲；
或其可藥用鹽。
17.根據(jù)權(quán)利要求13至16中任一項所述的化合物，其中所述可藥用鹽為鹽酸鹽。
18.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物和可藥用載體或稀釋劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物，其用作活性治療物質(zhì)。
20.根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物，其用于治療趨化因子介導的疾病，其中該趨化因子結(jié)合至哺乳動物中的IL-8α或β受體。
21.根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物，其用于治療選自以下的疾病哮喘、慢性阻塞性肺病或成人呼吸窘迫綜合征。
22.根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物在制備用于治療趨化因子介導的疾病的藥物中的用途。
23.根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物在制備用于治療趨化因子介導的疾病的藥物中的用途，其中所述疾病選自哮喘、慢性阻塞性肺病或成人呼吸窘迫綜合征。
24.治療趨化因子介導的疾病的方法，其中所述趨化因子結(jié)合至哺乳動物中的IL-8α或β受體，該方法包括向所述哺乳動物給藥有效量的根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中所述哺乳動物患有趨化因子介導的疾病，所述疾病選自牛皮癬、特應性皮炎、骨關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、中風、敗血癥性休克、內(nèi)毒素性休克、革蘭氏陰性膿毒癥、中毒性休克綜合癥、心臟和腎再灌注損傷、腎小球腎炎、血栓形成、移植物抗寄主反應、阿爾茨海默氏病、同種異體移植排斥、瘧疾、再狹窄、血管生成、動脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松、齦炎、病毒病例如鼻病毒和不希望的造血干細胞釋放。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中所述哺乳動物患有哮喘、慢性阻塞性肺病或成人呼吸窘迫綜合征。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述哺乳動物患有慢性阻塞性肺病。
28.藥物組合，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物以及一種或多種其它治療成分。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的組合，其中所述其它治療成分為CXCR3受體拮抗劑或CCR5受體拮抗劑。
30.合成根據(jù)權(quán)利要求1或13的化合物的方法，其包括以下步驟
A)氧化根據(jù)式(II)的硫化物
生成根據(jù)式(III)的砜
B)水解該砜生成式(IV)的氨基苯酚
和
C)將該氨基苯酚與異氰酸酯或異氰酸酯前體反應，生成最終產(chǎn)物。
31.中間體，其選自式(II)、(III)和(IV)
32.合成根據(jù)權(quán)利要求30的化合物的方法，其中所述R1部分被酸不穩(wěn)定的保護基保護，該保護基被去除并隨后再引入。
33.中間體，其選自
和
其中Boc表示酸不穩(wěn)定的保護基。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的化合物及其組合物，在治療趨化因子白細胞介素-8(IL-8)介導的疾病狀態(tài)的用途。
文檔編號A01N43/40GK101472477SQ200780023278
公開日2009年7月1日 申請日期2007年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月21日
發(fā)明者雅各布·布希-彼得森 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司