專(zhuān)利名稱：一種新鮮羊膜保存液及新鮮羊膜保存方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及來(lái)自羊膜的醫(yī)用生物材料的保存方法及應(yīng)用，特別是一種新鮮羊膜組織， 經(jīng)保存液的保存后，仍具有新鮮羊膜的特征，尤其適合于眼部疾病的修復(fù)和治療的使用。
背景技術(shù)：
羊膜是人胎膜最內(nèi)層的一種無(wú)血管、神經(jīng)和淋巴管的具有一定韌性的半透明組織。羊 膜作為一種醫(yī)用生物材料，在臨床曾用于治療皮膚潰瘍和眼部疾病的損傷等表皮損傷的修 補(bǔ)，近年來(lái)，羊膜移植手術(shù)成為研究和應(yīng)用的熱點(diǎn)。羊膜移植手術(shù)作為眼表重建的新技術(shù) 已廣泛應(yīng)用于臨床，并取得了良好的臨床效果。
羊膜移植用于眼表重建的臨床效果與所選用的羊膜自身的結(jié)構(gòu)是否完整及其活性因 子的含量有著直接的關(guān)系。
目前臨床上采用的羊膜為凍干羊膜、羊膜細(xì)胞外基質(zhì)或是臨時(shí)剝離處理的新鮮羊膜 (現(xiàn)采現(xiàn)用的)，國(guó)外多采用預(yù)先處理過(guò)的羊膜，經(jīng)深低溫的方法保存，因其方法技術(shù)工 藝復(fù)雜，保存成本過(guò)高，很難在臨床上使用。有臨床報(bào)道，證明低溫冷凍保存的羊膜會(huì)導(dǎo)致 羊膜中的生長(zhǎng)因子活性降低與喪失現(xiàn)象。目前臨床上所使用的新羊膜多取自新鮮胎盤(pán)，經(jīng) 無(wú)菌處理、迅速剝離獲得的羊膜，立即用于患者眼部的羊膜移植手術(shù)。但是，由于接收羊 膜和眼部疾患手術(shù)的治療時(shí)間，不是在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，急需羊膜移植用于眼部手術(shù)時(shí)， 往往找不到胎盤(pán)和費(fèi)時(shí)的供體檢測(cè)和嚴(yán)格的處理程序，而耽誤了臨床急診患者治療使用。 新鮮羊膜的使用是一次性的，用量不大，但浪費(fèi)極大。眼部的羊膜早期移植的愈后療效與 所采用的羊膜質(zhì)量有著密切的關(guān)系?，F(xiàn)存最大的問(wèn)題，是新鮮羊膜的保存問(wèn)題。
由于新鮮羊膜的保存問(wèn)題得不到解決，直接影響羊膜在臨床醫(yī)學(xué)上的擴(kuò)大應(yīng)用，特別 是羊膜移植術(shù)在眼表疾病的各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是為了解決新鮮羊膜的保存問(wèn)題，提供一種保存新鮮羊膜的方法和配制保 存新鮮羊膜保存液的配方及在臨床上的應(yīng)用。
為了解決新鮮羊膜的保存問(wèn)題，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)多年的實(shí)驗(yàn)研究，獲得了一種新鮮羊膜 的保存方法，并配制了一種新鮮羊膜保存液，經(jīng)保存液保存后的羊膜，仍具有新鮮羊膜的 特性，在反復(fù)多次治療眼表疾病的試驗(yàn)研究中，獲得了理想的治愈效果。各項(xiàng)愈后指標(biāo)， 均達(dá)到新鮮羊膜治療眼表疾病的理想效果。應(yīng)用羊膜保存液的新鮮羊膜，保質(zhì)期至少延長(zhǎng)
420至30天，解決了臨床急需新鮮羊膜的保存問(wèn)題，為廣大眼部疾患病人的治療、為醫(yī)生的 眼部疾病治療的術(shù)式選擇，提供了有效時(shí)間和可靠的物質(zhì)保證，為臨床擴(kuò)大病種的推廣使 用，提供了有效的羊膜保鮮庫(kù)，使新鮮羊膜的保存使用，做到科學(xué)合理、安全方便。 本發(fā)明提供的新鮮羊膜保存液的組成及含量為以配置1000毫升為單位
1. DMEM培養(yǎng)基9. 0 12.0克
2. 硫酸軟骨素10. 0 25.0克
3. 透明質(zhì)酸鈉0. 5 1.0克
4. HEPES4. 0 5. 0克
5.右旋糖苷10. 0 15.0克
6.慶大霉素1.0 3. O毫升
7. 地塞米松24. 0~30. O毫克
8.非必需氨基酸10. 0 15. O毫升
9.還原型谷胱甘肽0. 50 0. 95克
10.胎牛血清20. 0 50. O毫升
ll.注射用水加至1000毫升
將上述各物品按常規(guī)組織保存液的方法和程序配成羊膜保存液。
上述新鮮羊膜保存液的配制及各種物質(zhì)的含量?jī)?yōu)選為以配置1000毫升為單位
1. ODMEM培養(yǎng)基
2. 硫酸軟骨素
3. 透明質(zhì)酸鈉
4. HEPES
5. 低分子右旋糖苷
6. 慶大霉素
7. 地塞米松
8. 非必需氨基酸
9. 還原型谷胱甘肽
10. 胎牛血清
11. 注射用水
9.0克 10. 0克 0.5克 4. 0克 10. 0克
l.O毫升(4萬(wàn)單位/毫升) 24. 0毫克 10. 0毫升 0. 50克 20. 0毫升
加至1000毫升
將上述各物品按常規(guī)組織保存液的方法和程序配成羊膜保存液。 經(jīng)以上方式和方法保存的新鮮羊膜，使用前將羊膜從新鮮羊膜保存液中取出，用無(wú)菌磷酸緩沖液或生理鹽水沖洗干凈，即可應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)上各種表皮損傷重建。 本發(fā)明提供的新鮮羊膜的保存方法是通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的
第一、取健康剖宮產(chǎn)胎膜，胎膜在無(wú)菌環(huán)境中經(jīng)無(wú)菌組織緩沖液或生理鹽水沖洗干凈;
第二、用鈍器將胎膜的羊膜與絨毛膜剝離，去除絨毛膜；
第三、保留羊膜，再去除結(jié)締組織及海棉層；
第四、將新鮮羊膜再經(jīng)無(wú)菌組織緩沖液及抗生素平衡液處理；
第五、將新鮮羊膜裁剪成適度大小、分裝、裝入有以上配制的新鮮羊膜保存液的容器
中；
第六、放入4'C冰箱冷藏保存，隨用隨取。
第七、使用前將羊膜從保存液中取出，用無(wú)菌磷酸緩沖液或生理鹽水沖洗干凈，即可 應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)中。
本發(fā)明所述的新鮮羊膜保存液保存的新鮮羊膜，用作臨床醫(yī)學(xué)中各種表皮損傷的修補(bǔ) 和治療的生物材料，特別是眼表疾病的各個(gè)領(lǐng)域的修補(bǔ)和治療的生物材料。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和突出效果是(1)新鮮羊膜經(jīng)保存液的保存，只需在4'C冰箱保存。 (2)新鮮羊膜保存期至少延長(zhǎng)20至30天，其生物學(xué)特性無(wú)任何改變，羊膜上皮細(xì)胞活性 染色顯示細(xì)胞形態(tài)正常。(3)可行成批量處理，集中存放羊膜保鮮庫(kù)的形式，滿足臨床 擴(kuò)大使用。(4)適用于臨床上各種需要羊膜移植修補(bǔ)疾病的應(yīng)用，尤其是采用羊膜移植 手術(shù)用于眼表疾病患者，如l.作為結(jié)膜替代物用于眼表重建。2.羊膜移植治療瞼球粘連； 3.治療各種原因的角膜潰瘍；4.聯(lián)合角膜緣移植治療角膜緣干細(xì)胞缺陷；5.作為角膜接觸 鏡治療角膜上皮缺損；6.治療載體體外培養(yǎng)角膜緣干細(xì)胞后移植；7.用于抗青光眼手術(shù)。


圖1為經(jīng)過(guò)本發(fā)明新鮮羊膜保存液保存30天后的電鏡照片。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:新鮮羊膜保存液的配制
精密稱取配方中的各種物質(zhì)，按照醫(yī)學(xué)組織保存液的方法、操作程序，在無(wú)菌的狀態(tài) 下進(jìn)行，注意保持保存液的適宜細(xì)胞生理需求的PH值(6.8-7.4)?？梢允呛幸韵挛镔|(zhì):
1. DMEM培養(yǎng)基 9.0克
2. 硫酸軟骨素 10.0克
3. 透明質(zhì)酸鈉 0. 5克
64. HEPES
5. 低分子右旋糖苷
6. 慶大霉素
7. 地塞米松
8. 非必需氨基酸
9. 還原型谷胱甘肽
10. 胎牛血清
11. 注射用水
4.0克 10. 0克
l.O毫升(4萬(wàn)單位/毫升) 24. 0毫克 10. 0毫升 0. 50克 20. 0毫升 加至1000毫升。
經(jīng)過(guò)上述溶液保存30天后的電鏡照片，如圖1所示，該照片為保存新鮮羊膜30天4000 倍的電鏡照片，可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)完好，細(xì)胞長(zhǎng)、扁平附著于基膜上，游離端大量微絨毛，胞 質(zhì)豐富，細(xì)胞核近圓形，核仁明顯。
實(shí)施例2:
精密稱取配方中的各種物質(zhì)，按照醫(yī)學(xué)組織保存液的方法、操作程序，在無(wú)菌的狀態(tài) 下進(jìn)行，注意保持保存液的適宜細(xì)胞生理需求的PH值(6.8-7.4)。還可以是這種含量配 比
1. DMEM培養(yǎng)基
2. 硫酸軟骨素
3. 透明質(zhì)酸鈉
4. HEPES
5. 低分子右旋糖苷
6. 慶大霉素
7. 地塞米松
8. 非必需氨基酸
9. 還原型谷胱甘肽
10. 胎牛血清
11. 注射用水 實(shí)施例3:
精密稱取配方中的各種物質(zhì)，
12. 0克 25. 0克 l.O克 5.0克 15. 0克
3.0毫升(4萬(wàn)單位/毫升)
30. O毫克
15.0毫升
0.95克
50. O毫升
加至1000毫升
按照醫(yī)學(xué)組織保存液的方法、操作程序，在無(wú)菌的狀態(tài)下進(jìn)行，注意保持保存液的適宜細(xì)胞生理需求的PH值(6.8-7.4) 制
還可以是以下含量配
1. DMEM培養(yǎng)基
2. 硫酸軟骨素
3. 透明質(zhì)酸鈉
4. HEPES
5. 低分子右旋糖苷
6. (抗生素)慶大霉素
7. 地塞米松
8. 非必需氨基酸
9. 還原型谷胱甘肽
10. 注射用水
12. 0克 25. 0克 l.O克 5.0克 15. 0克
3.0毫升(4萬(wàn)單位/毫升)
30. 0毫克
15.0毫升
0.95克
加至1000毫升。
權(quán)利要求
1、一種新鮮羊膜保存液，其特征是該新鮮羊膜保存液的組成及含量為第一、DMEM培養(yǎng)基 9.0～12.0克第二、硫酸軟骨素 10.0～25.0克第三、透明質(zhì)酸鈉 0.5～1.0克第四、HEPES 4.0～5.0克第五、低分子右旋糖苷 10.0～15.0克第六、慶大霉素 1.0～6.0毫升第七、地塞米松 24.0～30.0毫克第八、非必需氨基酸 10.0～15.0毫升第九、還原型谷胱甘肽 0.50～0.95克第十、胎牛血清 0.0～50.0毫升第十一、注射用水 加至到1000毫升將上述各物品按常規(guī)組織保存液的方法和程序配成羊膜保存液。
2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的新鮮羊膜保存液，其特征是該新鮮羊膜保存液的組成及含量 優(yōu)選為-第一、DMEM培養(yǎng)基9.0克第二、硫酸軟骨素10. 0克第三、透明質(zhì)酸鈉0.5克第四、HEPES4.0克第五、低分子右旋糖苷10. 0克第六、慶大霉素l.O毫升第七、地塞米松24. 0毫克第八、非必需氨基酸10. O毫升第九、還原型谷胱甘肽0. 50克第十、胎牛血清20. 0毫升第十一、注射用水加至到1000毫升將上述各物品按常規(guī)組織保存液的方法和程序配成羊膜保存液。
3、 一種使用權(quán)利要求1或2所述的新鮮羊膜保存液對(duì)新鮮羊膜的保存方法，其特征是 通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的-第一、取健康剖宮產(chǎn)胎膜，胎膜在無(wú)菌環(huán)境中經(jīng)無(wú)菌組織緩沖液或生理鹽水沖洗干凈;第二、用鈍器將胎膜的羊膜與絨毛膜剝離，去除絨毛膜；第三、保留羊膜，再去除結(jié)締組織及海棉層；第四、將新鮮羊膜再經(jīng)無(wú)菌組織緩沖液及抗生素平衡液處理；第五、將新鮮羊膜裁剪成適度大小、分裝、裝入有以上配制的新鮮羊膜保存液的容器中；第六、放入4'C冰箱冷藏保存，隨用隨取。第七、使用前將羊膜從保存液中取出，用無(wú)菌磷酸緩沖液或生理鹽水沖洗干凈，即可 應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)的羊膜修補(bǔ)術(shù)上。
4、由權(quán)利要求1或2所述的新鮮羊膜保存液保存的新鮮羊膜，用作臨床醫(yī)學(xué)中各種表 皮損傷的修補(bǔ)和治療的生物材料，特別是眼表疾病的各個(gè)領(lǐng)域的修補(bǔ)和治療的生物材料。
全文摘要
一種新鮮羊膜保存液及新鮮羊膜保存方法與應(yīng)用。本發(fā)明羊膜保存液含有DMEM培養(yǎng)基9.0～12.0克、硫酸軟骨素10.0～25.0克、透明質(zhì)酸鈉0.5～1.0克、HEPES 4.0～5.0克、右旋糖苷10.0～15.0克、慶大霉素1.0～6.0毫升、地塞米松24.0～30.0毫克、非必需氨基酸10.0～15.0毫升、還原型谷胱甘肽0.50～0.95克、胎牛血清0.0～50.0毫升、注射用水加至到1000毫升。其保存方法經(jīng)用鈍器將羊膜分離，沖洗干凈再經(jīng)抗生素處理；剪裁裝入有羊膜保存液的容器中；4℃冰箱保存，用時(shí)用無(wú)菌磷酸緩沖液沖洗干凈，其優(yōu)點(diǎn)1.只需在4℃冰箱保存，2.保存期至少延長(zhǎng)20至30天，3.可批量處理，集中存放，4.各種羊膜移植修補(bǔ)術(shù)的應(yīng)用，如①結(jié)膜替代物眼表重建，②羊膜移植治療瞼球粘連，③治療各種原因的角膜潰瘍等。
文檔編號(hào)A01N1/02GK101444202SQ20071015043
公開(kāi)日2009年6月3日 申請(qǐng)日期2007年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月27日
發(fā)明者亮 吳, 張國(guó)慶, 祝君梅, 種影影, 衛(wèi) 聶, 肖光禮, 萍 高 申請(qǐng)人:天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所