專利名稱：香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方法
技術領域：
本發(fā)明屬花卉栽培繁殖方法特別涉及香雪蘭組織培養(yǎng)簡化的方法。
背景技術：
植物組織培養(yǎng)既植物無菌培養(yǎng)技術，是根據植物細胞具有全能性的理論利用植物體離體 的器官、組織、細胞作為外植體，在無菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照和溫度條件下，能誘 導出愈傷組織、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。組織培養(yǎng)是在無性繁殖、花卉育 種、植株脫病毒和種質保存等方面廣泛采用的一種技術。植物組織培養(yǎng)技術發(fā)明以來已經
取得了很大的進展，自上世紀60年代法國的Morel用莖尖培養(yǎng)的方法大量繁殖蘭花獲得成 功以后，植物組織培養(yǎng)已經從實驗室研究階段一躍而成為一種大規(guī)模成批量的工廠化生產 方法。無性繁殖系快速繁殖的生產、試管品種的商品化，是目前植物組織和細胞培養(yǎng)技術 在應用上的主流之一。而組織培養(yǎng)產業(yè)化的關鍵是培養(yǎng)成本的降低。近20年，人們在組 織培養(yǎng)的成本和經濟效益方面做了許多研究，并取得了一定的成果。
香雪蘭(Freesia)又名小蒼蘭，鳶尾科香雪蘭屬多年生球根草本花卉植物，原產于非 洲南部好望角，現(xiàn)世界各地都有種植，是世界十大名貴切花之一。香雪蘭由于其花期較早， 花色艷麗，花宜宜人，插花期長而越來越受到世人的喜愛，其需求量也逐年上升。種子繁 殖和種球繁殖是香雪蘭的傳統(tǒng)繁殖方式種子繁殖所需要的周期時間長；種球繁殖繁殖率 低且存在退化現(xiàn)象，這兩種方法都不適合香雪蘭的大量生產。長期以來，世界各地不斷嘗 試各種手段進行香雪蘭的快速繁殖，以滿足人們日益增長的市場需求，而在短時間內培養(yǎng) 出大量優(yōu)質香雪蘭的唯一途徑就是組織培養(yǎng)。王麗發(fā)明的香雪蘭的快速繁殖技術(專利號 ZL: 031270573)在一定程度上解決了香雪蘭常規(guī)繁殖存在的問題，達到了在短時間內大量 繁殖優(yōu)質香雪蘭種球的要求。利用組織培養(yǎng)方法培育香雪蘭具有不受季節(jié)、環(huán)境限制和繁 殖系數高、繁殖速度快等優(yōu)點，因此更符合工廠化規(guī)模化生產的需求。然而，香雪蘭的快速 繁殖目前還是停留在實驗室研究階段，沒有真正用于商業(yè)化生產。如何降低香雪蘭的生產 成本，是香雪蘭體外快速繁殖產業(yè)化的關鍵。本發(fā)明即通過實現(xiàn)香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方
法，從而達到低成本快速繁殖的目的，為香雪蘭組培產業(yè)化創(chuàng)造了條件。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的是在香雪蘭組織培養(yǎng)技術的基礎上，提供一種香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方法， 促進香雪蘭產業(yè)化。
香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方法具體內容
本發(fā)明使用的外植體為未成熟的香雪蘭(常規(guī)栽培種)幼花序，叢生芽誘導時所使用的
基本培養(yǎng)基為N6+l 2mg/L 2， 4 - 二氯苯氧乙酸(2， 4_D) +2 4mg/L 6-芐基氨基嘌 呤(6-BA)，生根時所用的基本培養(yǎng)基為1/2MS + 0. 1 1 mg /L萘乙酸(NAA)，誘導成球時 1/2MS培養(yǎng)基(含0. 2%的活性炭)作為基本培養(yǎng)基[來源香雪蘭的快速繁殖技術(專利號 ZL: 031270573)]。在此基礎上主要從培養(yǎng)基的簡化，培養(yǎng)條件的簡化，培養(yǎng)容器簡化三 個方面對香雪蘭的組織培養(yǎng)技術進行研究，降低生產成本，促進香雪蘭工廠化生產和大面 積推廣。
1. 培養(yǎng)基方面的簡化
瓊脂、分析蔗糖、蒸餾水是培養(yǎng)基中價格較高的成分，約占培養(yǎng)基成本的95%。如在瓊 脂、分析蔗糖、蒸餾水三者上加以簡化，則培養(yǎng)基的成本就能顯著降低。
香雪蘭體外簡化培養(yǎng)中我們采用的是簡化的培養(yǎng)基以價格低廉的自來水和食用白糖替 代傳統(tǒng)培養(yǎng)基中價格較高的蒸餾水和分析蔗糖(蒸餾水的價格是自來水的100倍，分析純蔗 糖的價格是普通白糖的5倍)，同時降低了瓊脂的濃度。與正常的培養(yǎng)基相比，本發(fā)明所 使用的簡化培養(yǎng)基可以使生產成本減低60%以上。
2. 培養(yǎng)容器的簡化
香雪蘭組織培養(yǎng)不宜選用普通的三角瓶。與一些組織培養(yǎng)材料不同，香雪蘭的叢生芽經 過3-4個月的培養(yǎng)后有的可以長到8-9厘米高，接種在容積小的三角瓶不利于叢生芽的生 長，如用容積較大的三角瓶，其價格比較昂貴。為了降低培養(yǎng)成本，在單位面積里得到更 多的組培苗，我們選用可以反復利用的透廣度好的ZP300帶蓋廣口瓶(購于上海稼豐園藝 用品有限公司)。ZP300帶蓋廣口瓶一方面比大容積的三角瓶便宜，另一方面省去了常規(guī)組 織培養(yǎng)時用棉塞封口的麻煩，操作起來比三角瓶方便，在一定程度上節(jié)省了勞動時間，減 低了勞動成本。
3. 培養(yǎng)條件的簡化
香雪蘭組織培養(yǎng)時要求溫度在24-27°C，光照為10-12小時/天，實驗室研究階段是通
過植物光照培養(yǎng)箱來調控這些因素的。在本發(fā)明中采用培養(yǎng)室培養(yǎng)節(jié)能白熾燈作為光源, 并通過人工調控光周期以達到降低成本的目的。 本發(fā)明包括如下幾個步驟；
(1) 取生長旺盛的香雪蘭未成熟的幼花序，在超凈工作臺上按常規(guī)無菌方法接種到含 有l(wèi) 2mg/L 2,4-D和2 4mg/L 6_BA簡化培養(yǎng)基上，以誘導叢生芽。誘導條件為溫度 24-27。C，光照10-12小時/天。
(2) 將步驟(1)中誘導出的無菌叢生芽再分割后移植在營養(yǎng)成分減半的MS培養(yǎng)基(簡 稱1/2MS培養(yǎng)基)上。植物生長調節(jié)物質為0.1 1 mg /L萘乙酸(NAA)，常規(guī)培養(yǎng)基中 的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，瓊脂濃度為0.55%。生根條件為溫度 24-27X,光照10-12小時/天。
(3) 待根系發(fā)達后，將無菌苗轉入誘導成球的簡化培養(yǎng)基進行成球培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為 溫度12-14。C，光照10-12小時/天。也可以將根系發(fā)達的無菌苗經煉苗后移栽至土壤中， 進行室內盆栽。
使用香雪蘭體外簡化培養(yǎng)得到的組培苗，與正常培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的香雪蘭組培苗沒有 明顯差別。由于本發(fā)明是在香雪蘭組織培養(yǎng)上進行的成本簡化，它既具有常規(guī)植物組織培 養(yǎng)不受季節(jié)、環(huán)境限制和繁殖系數高、繁殖速度快等的優(yōu)勢，又從不同層次，不同方面對 香雪蘭的快速繁殖進行了簡化。與正常的培養(yǎng)基相比，香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方法可以使 生產成本減低65-70%，具有重大的現(xiàn)實意義，同時為香雪蘭工廠^:生產和大面積推廣打下 了基礎。如果將本發(fā)明應用到生產領域，由于降低成本所帶來的增益是可觀的。
具體實施例方式
下面將結合實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明的范圍并不局限于以下的實施例。
實施例
l.叢生芽誘導的簡化
從生長旺盛的香雪蘭植株上剪下沒有成熟的幼花序后，在超凈工作臺上用70%乙醇浸
泡約30秒，再用0. 1。/。HgCl2滅菌1分鐘，無菌水洗4遍，用無菌濾紙將殘留的水吸干，并 切成0.2厘米左右的莖段，接種于含有2mg/L 2, 4 - 二氯苯氧乙酸，3呢/L 6-芐基氨 基嘌呤的簡化培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件為溫度26T，光照ll小時/天。
一周以后便可以看見外植體的微小膨大后產生叢生芽，約2個月后叢生芽可達4厘米。 繼續(xù)繼代培養(yǎng)，有些叢生芽可以在此培養(yǎng)基上生根。
香雪蘭叢生芽誘導的簡化培養(yǎng)基為N6+2mg/L 2,4-D +4mg/L 6-BA +30g/L白糖(配 置培養(yǎng)基時選用自來水代替蒸餾水)。
2. 生根方面的簡化
待叢生芽生長至6厘米時，將其轉入簡化的生根培養(yǎng)基，生根條件為溫度26T，光照 11小時/天。經過約一周的生根誘導，隨著原來生根的叢生芽根逐漸粗壯，沒有生根的叢 生芽也都陸續(xù)有根形成，在簡化培養(yǎng)基上香雪蘭叢生芽的生根率可以達到98%。生根簡化 培養(yǎng)基1/2MS + 0. 1 1 mg /L NAA +30g/L白糖(配置培養(yǎng)基時選用自來水代替蒸餾水)。
3. 誘導成球的簡化
將已生根的再生植株轉入成球簡化培養(yǎng)基中，誘導香雪蘭產生種球。此培養(yǎng)過程不需要 更換培養(yǎng)基便可在數月后得到香雪蘭的種球。簡化培養(yǎng)基為1/2MS十2g/L活性炭+30g/L 白糖。(配置培養(yǎng)基時選用自來水代替蒸餾水)
4. 其他條件的簡化
在香雪蘭組織培養(yǎng)時，我們采用能反復利用的成本低的ZP300帶蓋廣口瓶代替三角瓶， 白熾燈及人工控制光周期代替植物組織培養(yǎng)箱，這樣可以進一步降低香雪蘭的組織培養(yǎng)成 本。
權利要求
1、香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方法，其特征是包括如下幾個步驟(1)取生長旺盛的香雪蘭未成熟的幼花序，在超凈工作臺上按常規(guī)無菌方法接種到含有1～2mg/L 2，4-D和2～4mg/L 6-BA簡化培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)基中的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，以誘導叢生芽，誘導條件為溫度24-27℃，光照10-12小時/天；(2)將步驟(1)中誘導出的無菌叢生芽再分割后移植在營養(yǎng)成分減半的MS培養(yǎng)基上，植物生長調節(jié)物質為0.1～1mg/L萘乙酸，常規(guī)培養(yǎng)基中的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，瓊脂濃度為0.55％，生根條件為 溫度24-27℃，光照10-12小時/天；(3)待根系發(fā)達后，將無菌苗轉入誘導成球的簡化培養(yǎng)基進行成球培養(yǎng)，生根簡化培養(yǎng)基1/2MS+0.1～1mg/L NAA+30g/L白糖，常規(guī)培養(yǎng)基中的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，培養(yǎng)條件為溫度12-14℃，光照10-12小時/天，也可以將根系發(fā)達的無菌苗經煉苗后移栽至土壤中，進行室內盆栽。
2、按權利要求1所述的香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方法，其特征是在香雪蘭組織培養(yǎng)過 程中，反復利用的成本低的帶蓋廣口瓶代替三角瓶，白熾燈及人工控制光周期代替植物組織 培養(yǎng)箱。
全文摘要
本發(fā)明屬花卉栽培繁殖方法特別涉及香雪蘭組織培養(yǎng)簡化的方法 本發(fā)明使用的外植體為未成熟的香雪蘭幼花序，主要從培養(yǎng)基的簡化，培養(yǎng)條件的簡化，培養(yǎng)容器簡化三個方面對香雪蘭的組織培養(yǎng)技術進行研究。以價格低廉的自來水和食用白糖替代傳統(tǒng)培養(yǎng)基中價格較高的蒸餾水和分析蔗糖，同時降低了瓊脂的濃度。它既具有常規(guī)植物組織培養(yǎng)不受季節(jié)、環(huán)境限制和繁殖系數高、繁殖速度快等的優(yōu)勢，又從不同層次，不同方面對香雪蘭的快速繁殖進行了簡化。與正常的培養(yǎng)基相比，香雪蘭體外簡化培養(yǎng)的方法可以使生產成本減低65-70％，具有重大的現(xiàn)實意義，為香雪蘭工廠化生產和大面積推廣打下了基礎。
文檔編號A01H4/00GK101099450SQ200710055920
公開日2008年1月9日 申請日期2007年7月30日 優(yōu)先權日2007年7月30日
發(fā)明者曼 敖, 麗 王 申請人:東北師范大學