專利名稱：飄香藤的組織培養(yǎng)繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及飄香藤的繁殖栽培方法，具體來說是利用組織培養(yǎng)技術(shù)來繁殖飄香藤的方法。
技術(shù)背景飄香藤(仍'A a6te加'asay^er2')又名雙喜藤、文藤、紅文藤、雙線藤、紅皺藤，原產(chǎn)中 南美洲，是園藝栽培種，為夾竹桃科多年生的常綠的熱帶藤本植物，葉對(duì)生，全緣，長(zhǎng)卵圓 形，先端急尖，革質(zhì)，葉面有皺褶，葉色濃綠并富有光澤，花腋生，花冠漏斗形，花為紅色、 桃紅色、粉紅、白色等色，花期主要為夏秋U 10月)兩季，如養(yǎng)護(hù)得當(dāng)其它季節(jié)也可開 花。飄香藤花大色艷，株形美觀，被譽(yù)為熱帶藤本植物的皇后。室外栽培時(shí)，可用于籬垣、 棚架、天臺(tái)、小型庭院美化。因其蔓生性不強(qiáng)，可置于陽(yáng)臺(tái)做成球形及吊盆觀賞。飄香藤也 適合盆栽種植，市場(chǎng)上飄香藤盆栽苗各種規(guī)格的價(jià)錢從10多元到兩三百元一盆不等。飄香藤 一般釆用扦插法繁殖，可于春、夏、秋季進(jìn)行，而因扦插法繁殖飄香藤種苗繁殖率不高已不 能滿足人們對(duì)新奇艷麗的飄香藤的大量需求，從國(guó)外直接購(gòu)買飄香藤種苗價(jià)格又太高，因而 迫切需要研究出能大量繁殖飄香藤的方法。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于開發(fā)出一種能高效地繁殖飄香藤的方法。我們通過植物組織細(xì)胞的全能性和植物組織培養(yǎng)技術(shù)，利用外植體的取材、消毒、培養(yǎng)， 用這種方法培養(yǎng)的飄香藤的生根率達(dá)85%以上，成活率在85%以上，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。 本發(fā)明的飄香藤的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征包括以下的步驟(1) 外植體誘導(dǎo)材料消毒和不定芽誘導(dǎo)在生長(zhǎng)季節(jié)選取生長(zhǎng)旺盛飄香藤(A》Z9^/7ys的幼嫩頂芽為外植體，用水沖洗干凈后先用70% 75%的酒精浸泡10 30 s，再用 0. 1% 0.2%升滎溶液或1°/。 2%的次氯酸鈉溶液消毒5 10 min，無菌水沖洗后切剩莖尖和帶 節(jié)莖段，接種到培養(yǎng)基中，在溫度(28士2)T，光照度1500 2000 lx，光照8 12h/天， 培養(yǎng)形成不定芽，所述的培養(yǎng)基每升含有6-芐基嘌呤0. 1 0. 5 mg，吲哚丁酸0. 01 0. 05 mg， 蔗糖20 30 g和瓊脂5 7 g，其余為MS， pH 5. 8 6. 0;(2) 不定芽的繼代增殖將步驟(l)誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)于與步驟(l)相同 的培養(yǎng)基中，在溫度(28土2)。C，光照度1500 2000 lx，光照8 12 h/天進(jìn)行不定芽的 增殖；(3) 生根培養(yǎng)當(dāng)步驟(2)芽高約2 3cm時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度(28土 2)°C，光照度1500 2000 lx,光照8 12 h/天培養(yǎng)至正常生根，所述的培養(yǎng)基每升中含
有萘乙酸0.5 L0 mg和活性炭0. 05 0. 1 g，蔗糖20 30 g和瓊脂5 7 g，其余為B5， pH 5. 8 6. 0;(4)試管苗移栽步驟(3)的生根試管苗長(zhǎng)至3 4 cm時(shí)，在自然光照下煉苗7 10天， 洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到蛭石和泥炭土等量混合而成的基質(zhì)中，噴霧保濕85% 95%、遮蔭 75% 85%、保溫20 30。C培養(yǎng)。步驟(l)所述的無菌水沖洗次數(shù)為4 5次，所述的莖尖和帶節(jié)莖段長(zhǎng)度約為lcm，為減 輕褐化，先培養(yǎng)25 30天后再轉(zhuǎn)入同前的新鮮培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)材料基部切一新切口，再繼 續(xù)培養(yǎng)20 25天能在外植體上形成不定芽。步驟(2)中的一個(gè)繼代增殖周期為30 35天，每一個(gè)繼代增殖周期后的增殖倍數(shù)為2 4 倍，繼代10代后仍能保持增殖率。步驟(3)所述的培養(yǎng)時(shí)間一般是30 35天，每株苗有根數(shù)3 5條，生根培養(yǎng)基中不加入 活性炭時(shí)根不能正常伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，但是活性碳濃度過高則會(huì)抑制不定根的發(fā)生，降低生根率。 步驟(4)中移栽一般為40 50天后可上盆栽培。上述培養(yǎng)基中的MS和Bs為國(guó)際通用的培養(yǎng)基，其成分和配制方法參看文獻(xiàn)(譚文澄、戴 策剛主編.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù).北京中國(guó)林業(yè)出版社，1991.)。本發(fā)明采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)能快速繁殖種苗，獲得大量試管苗，飄香藤的生根率可達(dá) 85%以上，成活率可達(dá)85%以上，并且可定時(shí)、定質(zhì)、定量提供規(guī)格劃一整齊一致的試管苗滿 足市場(chǎng)需求，試管苗無病蟲生長(zhǎng)健壯，品質(zhì)好、抗性強(qiáng)、生長(zhǎng)迅速，便于生產(chǎn)管理和降低生 產(chǎn)成本，為滿足種苗市場(chǎng)的需要提供一條有效的途徑。
具體實(shí)施方式
以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。 實(shí)施例1:在生長(zhǎng)季節(jié)選取飄香藤生長(zhǎng)旺盛的幼嫩頂芽，在自來水下沖洗干凈后，先在70%酒精中 浸泡10 s，再用0. 2%升汞溶液消毒5分鐘，無菌水沖洗4次，切成長(zhǎng)lcrn的莖尖和帶節(jié)莖 段，接種到培養(yǎng)基(每升含有6-芐基嘌呤(6-BA)0.1mg，吲哚丁酸0. 01 mg，蔗糖20g和瓊 脂5 g，其余為MS， pH5.8)，在溫度28。C，光照度1500 lx，光照12 h/天，25天后 再轉(zhuǎn)入新的同上述培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)材料基部切一新切口，再培養(yǎng)25天能在外植體上形成不 定芽。將誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)在與上述相同的培養(yǎng)基中，在溫度28。C，光照度 1500 lx，光照12小時(shí)/天進(jìn)行不定芽的增殖，30天為l個(gè)繼代增殖周期， 一個(gè)繼代增殖 周期后的增殖倍數(shù)為2倍，繼續(xù)繼代后增殖倍數(shù)略有升高。當(dāng)芽高約2 3 cm時(shí)，切下接種 到生根培養(yǎng)基(每升含有萘乙酸0.5mg，活性炭0.05 g，蔗糖20g和瓊脂5 g，其余為B5, pH5.8)，在溫度28。C，光照度1500 lx，光照12 h/天，使正常生根，培養(yǎng)30天時(shí)生根 率85%，每株苗有根數(shù)3 5條。當(dāng)試管苗長(zhǎng)至2 3cm時(shí)，在自然光照下煉苗7天，然后打
開瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到由蛭石和泥炭土等量 混合而成的基質(zhì)中，噴霧保濕85%、遮蔭75%、保溫2(TC培養(yǎng)澆水、遮蔭、保溫，成活率85%。 移栽后40天可上盆栽培。 實(shí)施例2:在生長(zhǎng)季節(jié)選取飄香藤生長(zhǎng)旺盛的幼嫩頂芽，在自來水下沖洗干凈后，先在75%酒精中 浸泡30 s，再用0. 1%升汞溶液消毒10 min，無菌水沖洗5次，切成長(zhǎng)lcm的莖尖和帶節(jié)莖 段，接種到培養(yǎng)基(每升含有6-芐基嘌呤0.5mg，吲哚丁酸0.05mg,蔗糖30g和瓊脂7g， 其余為MS， pH 6.0)，在溫度26 °C，光照度2000 lx，光照8 h/天，培養(yǎng)30天后再轉(zhuǎn) 入同前的新鮮培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)材料基部切一新切口，再培養(yǎng)20天能在外植體上形成不定芽。 將誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)在與上述相同的培養(yǎng)基中，在溫度26 °C，光照度2000 lx，光照8h/天，進(jìn)行不定芽的增殖，30天為l個(gè)繼代增殖周期， 一個(gè)繼代增殖周期后的 增殖倍數(shù)為4倍。當(dāng)芽高約2 3 cm時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基(每升含有，萘乙酸l.Omg， 活性炭O. lg，蔗糖30g和瓊脂7g，其余為B5， pH6.0)，在溫度26T，光照度2000 lx， 光照8h/天，使正常生根，培養(yǎng)30天時(shí)生根率可達(dá)90%，每株苗有根數(shù)3 5條。當(dāng)試管苗 長(zhǎng)至2 3cm時(shí)，在自然光照下煉苗IO天，然后打開瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出， 洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到由蛭石和泥炭土等量混合而成的基質(zhì)中，噴霧保濕95%、遮蔭85%、 保溫3(TC培養(yǎng)澆水、遮蔭、保溫，成活率85%。移栽后50天可上盆栽培。實(shí)施例3:在生長(zhǎng)季節(jié)選取飄香藤生長(zhǎng)旺盛的幼嫩頂芽，在自來水下沖洗干凈后，先在70%酒精中 浸泡30s，再用1. 5%次氯酸鈉溶液溶液消毒10 rnin，無菌水沖洗5次，切成長(zhǎng)lcm的莖尖和 帶節(jié)莖段，接種到培養(yǎng)基(每升含有6-芐基嘌呤0.3mg，吲哚丁酸0. 03mg，蔗糖30g和瓊 脂5g，其余為MS， pH6.0)，在溫度30。C，光照度1800 lx，光照10 h/天，28天后再 轉(zhuǎn)入新的同上述的培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)材料基部切一新切口，再培養(yǎng)22天能在外植體上形成不 定芽。將誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)在與上述相同的培養(yǎng)基中，在溫度30X，光照度 1800 lx，光照IO h/天，進(jìn)行不定芽的增殖，30天為1個(gè)繼代增殖周期， 一個(gè)繼代增殖 周期后的增殖倍數(shù)為3倍，能進(jìn)行多次繼代。當(dāng)芽高約2 3 cm時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基 (每升含有，萘乙酸0.7mg，活性炭0.05g，蔗糖30g和瓊脂5g，其余為B5， pH 6.0)，在 溫度30T，光照度1800 lx，光照IO h/天，使正常生根，培養(yǎng)30天時(shí)生根率可達(dá)95%， 每株苗有根數(shù)3 5條。當(dāng)試管苗長(zhǎng)至2 3cm時(shí)，在自然光照下煉苗10天,然后打開瓶塞， 用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到由蛭石和泥炭土等量混合而成 的基質(zhì)中，噴霧保濕90%、遮蔭80%、保溫25°(:培養(yǎng)，成活率90%。移栽后約40天可上盆栽 培。
權(quán)利要求
1.飄香藤的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征包括以下的步驟(1)外植體誘導(dǎo)材料消毒和不定芽誘導(dǎo)在生長(zhǎng)季節(jié)選取生長(zhǎng)旺盛飄香藤(Dipladeniasanderi)的幼嫩頂芽為外植體，用水沖洗干凈后先用70％～75％的酒精浸泡10～30s，再用0.1％～0.2％升汞溶液或1％～2％的次氯酸鈉溶液消毒5～10min，無菌水沖洗后切剩莖尖和帶節(jié)莖段，接種到培養(yǎng)基中，在溫度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天，培養(yǎng)形成不定芽，所述的培養(yǎng)基每升含有6-芐基嘌呤0.1～0.5mg，吲哚丁酸0.01～0.05mg，蔗糖20～30g和瓊脂5～7g，其余為MS，pH5.8～6.0；(2)不定芽的繼代增殖將步驟(1)誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)于與步驟(1)相同的培養(yǎng)基中，在溫度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天進(jìn)行不定芽的增殖；(3)生根培養(yǎng)當(dāng)步驟(2)芽高約2～3cm時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天培養(yǎng)至正常生根，所述的培養(yǎng)基每升中含有萘乙酸0.5～1.0mg，活性炭0.05～0.1g，蔗糖20～30g和瓊脂5～7g，其余為B5，pH5.8～6.0；(4)試管苗移栽步驟(3)的生根試管苗長(zhǎng)至3～4cm時(shí)，在自然光照下煉苗7～10天，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到蛭石和泥炭土等量混合而成的基質(zhì)中，噴霧保濕85％～95％、遮蔭75％～85％、保溫20～30℃培養(yǎng)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的飄香藤的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征是步驟(l)中所述的無菌水沖洗 次數(shù)為4 5次，先培養(yǎng)25 30天后再轉(zhuǎn)入同前的新鮮培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)材料基部切一新切 口，再繼續(xù)培養(yǎng)20 25天在外植體上形成不定芽；步驟(2)中的一個(gè)繼代增殖周期為30 35 天；步驟(3)中所述的培養(yǎng)時(shí)間是30 35天；步驟(4)中移栽40 50天后上盆栽培。
全文摘要
本發(fā)明涉及飄香藤的組織培養(yǎng)繁殖方法，首先以在生長(zhǎng)季節(jié)選取生長(zhǎng)旺盛飄香藤(Dipladenia sanderi)的幼嫩頂芽為外植體，經(jīng)消毒后接種到每升含有6-芐基嘌呤0.1～0.5mg，吲哚丁酸0.01～0.05mg的MS培養(yǎng)基中至形成不定芽，然后將誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)于與上述相同的培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽的增殖，當(dāng)芽高約2～3cm時(shí)，切下接種到每升含有萘乙酸0.5～1.0mg和活性炭0.05～0.1g的B₅培養(yǎng)基中至正常生根，最后當(dāng)生根試管苗長(zhǎng)至3～4cm時(shí)，在自然光照下煉苗后移栽。本發(fā)明方法能快速大量繁殖試管種苗，生根率可達(dá)85％以上，成活率可達(dá)85％以上，而且種苗無病蟲害生長(zhǎng)健壯，品質(zhì)好、抗性強(qiáng)、生長(zhǎng)快，便于生產(chǎn)管理和降低生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101133716SQ20071003059
公開日2008年3月5日 申請(qǐng)日期2007年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月28日
發(fā)明者吳坤林, 曾宋君, 俊 段, 楓 鄭, 陳之林 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院華南植物園