專利名稱：草莓脫病毒法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種草莓脫病毒法。
背景技術(shù)：
草莓長(zhǎng)期以來(lái)一直采用無(wú)性繁殖的方法進(jìn)行繁殖，生產(chǎn)上主要采用匍匐莖繁育；由于多年種植受到各種病原物的侵染，造成原有優(yōu)良品種退化、減產(chǎn)。據(jù)生產(chǎn)調(diào)查，危害草莓的主要病毒病有草莓斑駁病毒(Strawberry mottlevirus，SMoV)、草莓輕型黃邊病毒(Strawberry mild yellow edge virus，SMYEV)、草莓鑲脈病毒(Strawberry vein banding virus，SVBV)和草莓皺縮病毒(Strawberry crinkle virus，SCV)等。由于病毒侵入植物體以后會(huì)形成系統(tǒng)性感染并會(huì)影響寄主植物的代謝，為此化學(xué)藥劑難以防治，使得該病毒得以廣泛傳播，到目前為止我國(guó)的80％草莓產(chǎn)區(qū)受病毒侵染。
莖尖分生組織是植物細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂最為旺盛的組織，其細(xì)胞內(nèi)病毒顆粒的含量相對(duì)比較少。另外病毒顆粒的胞間移動(dòng)是通過(guò)維管束和胞間連絲，而莖尖分生組織中維管束和胞間連絲發(fā)育不全，所以莖尖分生組織是一種脫病毒的理想材料。
而目前采用的主要方法是莖尖分生組織、熱處理(40℃左右)以及倆者結(jié)合，缺點(diǎn)是效率低。
莖尖分生組織剝離方法獲得脫毒苗，剝離的莖尖必須在0.2mm左右。從而導(dǎo)致了莖尖的存活率低，脫毒效益低；需要?jiǎng)冸x大量的莖尖才能得到幾株脫毒苗，一般在5-10％左右。
熱處理目前應(yīng)用的多在40℃左右，而這個(gè)溫度不是草莓主要病毒的致死溫度，只能起到鈍化的作用。當(dāng)草莓回到正常生長(zhǎng)溫度25℃左右時(shí)，病毒會(huì)重新恢復(fù)活力，無(wú)法起到脫毒效果。
莖尖結(jié)合熱處理法，目前一般是將剝離的莖尖馬上進(jìn)行熱處理；此法會(huì)對(duì)莖尖的生長(zhǎng)造成極大的影響，導(dǎo)致存活率下降，一般在5％左右。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明提供一種能提高脫病毒效率的草莓脫病毒法。
本發(fā)明為達(dá)到以上目的，是通過(guò)這樣的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的提供一種草莓脫病毒法，依次包括以下步驟1)、將盆栽的帶病毒的草莓苗放入生化培養(yǎng)箱，根據(jù)所述病毒的致死溫度，在該致死溫度范圍條件下培養(yǎng)2～3天；2)、剝?nèi)∩鲜霾葺缟闲∮?.5mm的莖尖分生組織，接種到MS濃度減半的培養(yǎng)基上(即1/2MS)使其生長(zhǎng)；3)、待上述莖尖分生組織產(chǎn)生的苗長(zhǎng)到0.5cm～1.5cm高時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基使其生長(zhǎng)；待出現(xiàn)不定芽時(shí)轉(zhuǎn)入生化培養(yǎng)箱，于所述病毒的致死溫度條件下培養(yǎng)30min；4)、然后將上述苗放到組織培養(yǎng)室內(nèi)于28℃培養(yǎng)30min；5)重復(fù)上述步驟2)～4)1～2次。
作為本發(fā)明的草莓脫病毒法的一種改進(jìn)病毒為草莓斑駁病毒時(shí)，致死溫度是55～60℃；病毒為草莓輕型黃邊病毒時(shí)，致死溫度是55～60℃；病毒為草莓鑲脈病毒時(shí)，致死溫度是60～70℃；病毒為草莓皺縮病毒時(shí)，致死溫度是50～55℃。
作為本發(fā)明的草莓脫病毒法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟3)中待莖尖分生組織產(chǎn)生的苗長(zhǎng)到1.0cm高時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基使其生長(zhǎng)。
本發(fā)明的草莓脫病毒法，采用多步分步的方法脫除草莓苗體內(nèi)的病毒，從而獲得脫毒后的草莓苗。本發(fā)明的方法步驟中，將剝?nèi)〉那o尖分生組織先放置在1/2MS培養(yǎng)基中，有助于莖尖細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)；這樣既可以保證誘導(dǎo)獲得一定量的無(wú)菌苗，又可以保證脫毒的效率。經(jīng)檢測(cè)脫毒率達(dá)100％，而且不用剝離大量的莖尖，一般采用多步分步法只要?jiǎng)冸x10-20個(gè)莖尖即可。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、一種草莓脫病毒法，依次進(jìn)行以下步驟1)、將盆栽的帶有草莓斑駁病毒的草莓苗放入生化培養(yǎng)箱，于55～60℃培養(yǎng)2～3天。
2)、剝?nèi)∩鲜霾葺缧∮?.5mm的莖尖分生組織，接種到1/2 MS培養(yǎng)基使其生長(zhǎng)。
該種1/2MS培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基的一半含量，即1/2MS+2～3％糖+5～9％瓊脂，pH為5.8～6.0。
3)、待上述莖尖分生組織產(chǎn)生的苗長(zhǎng)到0.5～1.5cm高時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基使其生長(zhǎng)；待出現(xiàn)不定芽時(shí)轉(zhuǎn)入生化培養(yǎng)箱，于55～60℃培養(yǎng)30min。
該種誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基為MS+0.2～0.5mg/l BA+2～3％糖+5～9％瓊脂，pH為5.8～6.0。
4)、然后將上述培養(yǎng)后所獲得的苗放到組織培養(yǎng)室內(nèi)于28℃培養(yǎng)30min。
5)重復(fù)步驟2～4)1～2次。
如此重復(fù)1～2次，所獲得的草莓苗經(jīng)檢測(cè)，草莓的斑駁病毒已有效脫去，脫毒率達(dá)100％。而且不用剝離大量的莖尖，一般采用多步分步法只要?jiǎng)冸x10-20個(gè)莖尖即可。
實(shí)施例2、一種草莓脫病毒法，所述病毒為草莓輕型黃邊病毒，該方法同所獲得的草莓苗經(jīng)檢測(cè)，草莓的輕型黃邊病毒已有效脫去，脫毒率達(dá)100％。而且不用剝離大量的莖尖，一般采用多步分步法只要?jiǎng)冸x10-20個(gè)莖尖即可。
實(shí)施例3、一種草莓脫病毒法，所述病毒為以下4種草莓斑駁病毒、草莓輕型黃邊病毒、草莓鑲脈病毒、草莓皺縮病毒。
將步驟1)和步驟3)中的55～60℃的病毒致死溫度改為60～65℃，其余同所獲得的草莓苗經(jīng)檢測(cè)，草莓的上述4種病毒均已有效脫去，脫毒率達(dá)100％。而且不用剝離大量的莖尖，一般采用多步分步法只要?jiǎng)冸x10-20個(gè)莖尖即可。
最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種草莓脫病毒法，其特征是依次包括以下步驟1)、將盆栽的帶病毒的草莓苗放入生化培養(yǎng)箱，根據(jù)所述病毒的致死溫度，在該致死溫度范圍條件下培養(yǎng)2～3天；2)、剝?nèi)∩鲜霾葺缟闲∮?.5mm的莖尖分生組織，接種到MS濃度減半的培養(yǎng)基上使其生長(zhǎng)；3)、待上述莖尖分生組織產(chǎn)生的苗長(zhǎng)到0.5cm～1.5cm高時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基使其生長(zhǎng)；待出現(xiàn)不定芽時(shí)轉(zhuǎn)入生化培養(yǎng)箱，于所述病毒的致死溫度條件下培養(yǎng)30min；4)、然后將上述苗放到組織培養(yǎng)室內(nèi)于28℃培養(yǎng)30min；5)、重復(fù)上述步驟2)～4)1～2次。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種草莓脫病毒法，其特征是所述病毒為草莓斑駁病毒時(shí)，致死溫度是55～60℃；所述病毒為草莓輕型黃邊病毒時(shí)，致死溫度是55～60℃；所述病毒為草莓鑲脈病毒時(shí)，致死溫度是60～70℃；所述病毒為草莓皺縮病毒時(shí)，致死溫度是50～55℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種草莓脫病毒法，其特征是所述步驟3)中待莖尖分生組織產(chǎn)生的苗長(zhǎng)到1.0cm高時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基使其生長(zhǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種草莓脫病毒法，依次包括以下步驟1)將盆栽的帶病毒的草莓苗放入生化培養(yǎng)箱，根據(jù)病毒的致死溫度，在該致死溫度范圍條件下培養(yǎng)2～3天；2)剝?nèi)∩鲜霾葺缟闲∮?.5mm的莖尖分生組織，接種到MS濃度減半的培養(yǎng)基上使其生長(zhǎng)；3)待上述莖尖分生組織產(chǎn)生的苗長(zhǎng)到0.5cm～1.5cm高時(shí)，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基使其生長(zhǎng)；待出現(xiàn)不定芽時(shí)轉(zhuǎn)入生化培養(yǎng)箱，于該病毒的致死溫度條件下培養(yǎng)30min；4)然后將上述苗放到組織培養(yǎng)室內(nèi)于28℃培養(yǎng)30min；5)重復(fù)上述步驟2)～4)1～2次。本發(fā)明的草莓脫病毒法，無(wú)需剝離大量的莖尖，而且脫毒率高達(dá)100％。
文檔編號(hào)A01G1/00GK1799341SQ200510062199
公開(kāi)日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月26日
發(fā)明者毛碧增, 李德葆 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)