專利名稱：一種培育東方百合試管鱗莖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人工培育東方百合試管鱗莖的方法。
背景技術(shù)：
東方百合(Lilium spp.cv.oriental hybrids)是百合屬中的一個雜交品系，是國際市場上最受歡迎的球根花卉之一。按國際市場交易慣例，以垂直于鱗莖中央主芽的最大圓周作為劃分東方百合鱗莖規(guī)格的標(biāo)準(zhǔn)，其中規(guī)格12cm以下的為種植母本(planting stocking)，12cm以上的為開花球(flowering bulbs)，開花球主要用于生產(chǎn)切花。
由于市場的巨大需求，我國每年要從國外大量進(jìn)口東方百合開花球和種植母本，僅以2004年為例，進(jìn)口開花球約6000萬頭、種植母本約600萬頭。不僅耗費大量外匯，而且增加了企業(yè)的經(jīng)營成本和風(fēng)險。
目前，東方百合種苗的人工培育均采用常規(guī)的植物組織培養(yǎng)方法，即以鱗片為外植體，先誘導(dǎo)愈傷組織，轉(zhuǎn)接后使愈傷組織分化出根和莖，進(jìn)而培養(yǎng)成瓶苗。但如果外植體帶病毒，則該方法只能降低種苗的病毒含量，難以使種苗徹底脫除病毒。病毒會在鱗莖逐年種植中積累，造成種球品質(zhì)和優(yōu)良性狀的退化。同時，瓶苗移栽后還必須經(jīng)過練苗過程，以使幼苗緩慢適應(yīng)移栽環(huán)境。此時幼苗的成活率主要取決于練苗設(shè)施的好壞和管理者的精細(xì)程度，不僅生產(chǎn)周期過長，而且增加了生產(chǎn)管理的成本。另外，由于練苗期間需要維持較高的相對濕度，還容易誘發(fā)病害。迄今為止，現(xiàn)有技術(shù)中尚未見能有效克服上述問題的方法報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種成本低廉，成活率高，培育周期短，能有效剔除帶毒鱗莖保證種球品質(zhì)的東方百合試管鱗莖的人工培育方法。
本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。
本發(fā)明提供了一種培育東方百合試管鱗莖的方法，該方法采用以下步驟1.于9～10月份選擇生長健壯的東方百合植株，取出鱗莖，對其進(jìn)行病毒檢測，篩選出不帶病毒的鱗莖，用清水沖洗后，備用；2.從鱗莖上分下鱗片，并用清水清洗，再用70％～75％的酒精浸泡15～20秒后，用無菌水漂洗4～6次，然后在0.1％升汞中浸泡消毒5～10分鐘，再用無菌水漂洗6～10次，每次3～5分鐘，最后用無菌濾紙吸干鱗片上的水份，備用；3.將經(jīng)步驟2處理后的鱗片切為3～4塊，使每塊鱗片均帶有原鱗莖基部的組織；將切好的鱗片置于發(fā)生培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌培養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度為20±0.5℃～26±0.5℃、光照強度10001x～40001x或黑暗培養(yǎng)，30～40天后誘導(dǎo)出不定芽；4.將不定芽轉(zhuǎn)接到生長培養(yǎng)基上，黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度20±0.5℃～26±0.5℃，50～100天后，形成規(guī)格3cm～5cm的試管鱗莖；5.在無菌條件下將試管鱗莖分成2～3片鱗片，將鱗片轉(zhuǎn)接到擴繁培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基PH值為5.5～6.5，培養(yǎng)光照強度1000-40001x，轉(zhuǎn)接后12～30天誘導(dǎo)出不定芽；6.重復(fù)步驟4和步驟5即可不斷擴繁出符合要求的試管鱗莖。
步驟1所述的病毒檢測由農(nóng)業(yè)部花卉產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心或云南出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心進(jìn)行。
所述的發(fā)生培養(yǎng)基為含萘乙酸(NAA)0.05～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含瓊脂0.65％的MS高鹽培養(yǎng)基或1/2MS高鹽培養(yǎng)基。
所述的生長培養(yǎng)基為含萘乙酸(NAA)0.05～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含瓊脂0.65％的1/2～1/5MS高鹽培養(yǎng)基。
所述的擴繁培養(yǎng)基為含萘乙酸(NAA)0～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含瓊脂0.65％的1/2～1/5MS高鹽培養(yǎng)基。
所述的1/2～1/5MS高鹽培養(yǎng)基，指培養(yǎng)基中每種大量營養(yǎng)元素的含量與MS高鹽培養(yǎng)基中對應(yīng)的大量營養(yǎng)元素含量的重量比為1/2～1/5，而微量營養(yǎng)元素、有機成分與MS高鹽培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點1.篩選不帶病毒的鱗片作為外植體，在無菌環(huán)境下培育鱗莖，可保證擴繁出的鱗莖不帶病毒，品質(zhì)穩(wěn)定、成活率高。
2.培養(yǎng)出的脫毒鱗莖經(jīng)過春化處理后可直接定植于苗床，不需要投資昂貴的練苗設(shè)施，成本低廉。
3.由試管鱗莖生長到規(guī)格6～10cm的種植母本僅需1個生長季，生長周期短。
具體實施例方式
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但它們不是對本發(fā)明的限制。
實施例1用于研究的品種有元帥(Acupulco)、芭芭拉(Barbaresco)、卡莎布蘭卡(Casa Blanca)、馬可波羅(Marco Polo)、西伯利亞(Siberia)、索蚌(Sorbonne)、天霸(Tiber)等東方百合品種。
1.試管鱗莖的培育①9月份在田間選擇生長健壯的東方百合植株，取出鱗莖，將鱗莖送云南省出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心進(jìn)行病毒檢測，篩選出不帶病毒的鱗莖，用清水沖洗；②從每個鱗莖上分出15片鱗片，再充分清洗，洗凈后的鱗片用75％酒精浸泡20秒，用無菌水漂洗5次，在0.1％升汞中浸泡10分鐘，用無菌水漂洗10次，每次4分鐘。漂洗后的鱗片用無菌濾紙 吸干水分。
③視鱗片的大小切割為3～4塊，使每塊切割下的鱗片帶有原鱗莖基部的組織，將切塊置于發(fā)生培養(yǎng)基中無菌培養(yǎng)，每瓶接種4～5塊。發(fā)生培養(yǎng)基分別選擇MS高鹽培養(yǎng)基(見表1)和1/2MS高鹽培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，培養(yǎng)基含蔗糖9％、瓊脂0.65％，黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)果見表2。
表1MS高鹽培養(yǎng)基配方

續(xù)表

表2不同培養(yǎng)條件對誘導(dǎo)外植體鱗片不定芽的影響

續(xù)表

④當(dāng)不定芽生長到0.3～0.5mm長時，取下不定芽，轉(zhuǎn)接到生長培養(yǎng)基中，在直徑8cm，高7cm的玻璃培養(yǎng)瓶中，每瓶接8個。生長培養(yǎng)基分別選擇1/2MS高鹽培養(yǎng)基和1/5MS高鹽培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含蔗糖9％、含瓊脂0.65％，PH6.0；培養(yǎng)溫度26±0.5℃；黑暗培養(yǎng)。生長效果見表3。
表3不同培養(yǎng)基下不定芽的生長情況

續(xù)表

⑤當(dāng)獲得規(guī)格3～5cm的試管鱗莖后進(jìn)行第一次擴繁，視小鱗莖的個體大小將小鱗莖在無菌條件下分下2～3片，轉(zhuǎn)接到擴繁培養(yǎng)基中，在直徑8cm，高7cm的玻璃培養(yǎng)瓶中，每瓶接15片。擴繁培養(yǎng)基選擇1/5MS高鹽培養(yǎng)基，分別在不含萘乙酸與萘乙酸含量為0.05mg/L和0.1mg/L的三種情況下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基含蔗糖9％、含瓊脂0.65％，PH6.0，培養(yǎng)溫度26±0.5℃，光照強度2000LX。擴繁效果見表4。
表4不同培養(yǎng)基下鱗片的擴繁情況

續(xù)表

⑥當(dāng)不定芽長0.3cm～0.5cm長時，取下不定芽，轉(zhuǎn)接到生長培養(yǎng)基中，并重復(fù)步驟4與步驟5；2.試管鱗莖出瓶后的處理和種植當(dāng)擴繁到需要的數(shù)量后，在潔凈的場所，倒出試管鱗莖，洗凈瓊脂，將鱗莖埋藏于濕潤的泥炭土中，在百合種球?qū)Ｓ玫谋翊鼉?nèi)貯存，立即進(jìn)行春化處理，先用9℃處理21天，再用4.5℃處理69天，處理場所相對濕度70％。
春化處理結(jié)束后種植于苗床，種植環(huán)境為配置有滴管系統(tǒng)的防蟲網(wǎng)室，夜間氣溫6～13℃，白天13～25℃；苗床土壤采用亞高山草甸土和腐殖土混合土，草甸土與腐殖土混合比例1∶3，PH5.8；頂部覆蓋塑料膜和遮光率為50％的遮陽網(wǎng)。
主要田間管理措施種植密度200頭/m2，深度5cm。苗床為寬90cm，深3.5cm，長度根據(jù)各品種數(shù)量確定的種植行。平整種植行，撒施消毒劑、底肥，澆水，在種植行內(nèi)均勻散播小鱗莖，蓋土，使畦面平齊，再次澆透水。消毒劑為土菌滅克11.5g/m2、鐵滅克3g/m2、鋅硫磷顆粒劑1.2g/m2；底肥組合見表5。
表5施肥表

以后每過40天按此組合施肥，共3次，其中硫酸亞鐵采用葉面施肥，其余的通過滴灌系統(tǒng)施用。出苗后每20天施用40ppm艾美樂防治蚜蟲，每10天1次輪換施用1000倍施佳樂和800倍速克靈防治灰霉病，并經(jīng)常澆水保持土壤濕潤。種植結(jié)果見表6。
表6試管鱗莖在苗床上生長160天后的結(jié)果

續(xù)表

權(quán)利要求
1.一種培育東方百合試管鱗莖的方法，該方法采用以下步驟(1)于9～10月份選擇生長健壯的東方百合植株，取出鱗莖，對其進(jìn)行病毒檢測，篩選出不帶病毒的鱗莖，用清水沖洗后，備用；(2)從鱗莖上分下鱗片，并用清水清洗，再用70％～75％的酒精浸泡15～20秒后，用無菌水漂洗4～6次，然后在0.1％升汞中浸泡消毒5～10分鐘，再用無菌水漂洗6～10次，每次3～5分鐘，最后用無菌濾紙吸干鱗片上的水份，備用；(3)將經(jīng)步驟2處理后的鱗片切為3～4塊，使每塊鱗片均帶有原鱗莖基部的組織；將切好的鱗片置于發(fā)生培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌培養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度為20±0.5℃～26±0.5℃、光照強度10001x～40001x或黑暗培養(yǎng)，30～40天后誘導(dǎo)出不定芽；(4)將不定芽轉(zhuǎn)接到生長培養(yǎng)基上，黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度20±0.5℃～26±0.5℃，50～100天后，形成規(guī)格3cm～5cm的試管鱗莖；(5)在無菌條件下將試管鱗莖分成2～3片鱗片，將鱗片轉(zhuǎn)接到擴繁培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基PH值為5.5～6.5，培養(yǎng)光照強度1000-40001x，轉(zhuǎn)接后12～30天誘導(dǎo)出不定芽；(6)重復(fù)步驟4和步驟5即可不斷擴繁出符合要求的試管鱗莖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的發(fā)生培養(yǎng)基為含萘乙酸0.05～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含瓊脂0.6 5％的MS高鹽培養(yǎng)基或1/2MS高鹽培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的生長培養(yǎng)基為含萘乙酸0.05～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含瓊脂0.65％的1/2～1/5MS高鹽培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的擴繁培養(yǎng)基為含萘乙酸0～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含瓊脂0.65％的1/2～1/5MS高鹽培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的1/2MS高鹽培養(yǎng)基，是指培養(yǎng)基中每種大量營養(yǎng)元素的含量與MS高鹽培養(yǎng)基中對應(yīng)的大量營養(yǎng)元素含量的重量比為1/2，而微量營養(yǎng)元素、有機成分與MS高鹽培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的1/2～1/5MS高鹽培養(yǎng)基，是指培養(yǎng)基中每種大量營養(yǎng)元素的含量與MS高鹽培養(yǎng)基中對應(yīng)的大量營養(yǎng)元素含量的重量比為1/2～1/5，而微量營養(yǎng)元素、有機成分與MS高鹽培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人工培育東方百合試管鱗莖的方法，通過篩選不帶病毒的東方百合鱗片作為外植體，并在無菌環(huán)境下培育鱗莖，可保證擴繁出的鱗莖不帶病毒，品質(zhì)穩(wěn)定、成活率高。所培養(yǎng)出的脫毒鱗莖經(jīng)過春化處理后可直接定植于苗床，不需要投資昂貴的練苗設(shè)施，成本低廉。具有良好的市場應(yīng)用前景。
文檔編號A01G7/00GK1695427SQ200510010860
公開日2005年11月16日 申請日期2005年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月17日
發(fā)明者丁元明, 熊燦坤, 張燦明, 和蓮彩 申請人:云南格桑花卉有限責(zé)任公司