專利名稱：‘花葉’日本醉魚草的微型快繁方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物微型快繁方法，具體地，涉及一種1、‘花葉’日本醉魚草(Buddleja japonica‘Variegata’)的微型快繁方法。
背景技術：
日本花葉醉魚草(Buddleja japonica‘Variegata’)系馬錢科醉魚草屬的常綠小灌木，是一種適宜盆栽或花壇布置的觀賞新品種。其株形優(yōu)美，枝繁葉茂，葉緣金黃色，葉中部深綠色，極具觀賞價值。國內外已對部分醉魚草屬觀賞種類及其品種的營養(yǎng)繁殖和種子繁殖進行了研究，但尚未見對該品種進行微型快繁的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術未對日本花葉醉魚草(Buddlejajaponica‘Variegata’)進行微型快繁研究，用‘花葉’日本醉魚草的莖尖或莖段為外植體，實現(xiàn)了其花葉特征穩(wěn)定性遺傳的微型快繁的目的。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下技術方案‘花葉’日本醉魚草(Buddleja japonica‘Variegata’)的微型快繁方法，包括啟動培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽步驟，培養(yǎng)條件選擇啟動培養(yǎng)基MS+6-BA0.05mg·L-1(單位下同)+IBA0.05+NAA0.05；增殖培養(yǎng)基①MS+6-BA0.1+NAA0.1；②MS+6-BA0.2+NAA0.1；③MS+6-BA0.5+NAA0.1；生根培養(yǎng)基MS+IAA0.1+IBA0.05，以上培養(yǎng)基均加入3％蔗糖、0.65％瓊脂，PH5.8，培養(yǎng)溫度為(23±1)℃，光照時間12hd-1，光照度1000～1500lx，啟動培養(yǎng)是切取頂芽和帶腋芽的莖段首先用肥皂及自來水清洗，然后用蒸餾水沖洗干凈后，在超凈臺上用70％酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl2溶液消毒3～5min，無菌水沖洗5～6次，接種到啟動培養(yǎng)基上，經過10～15d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖明顯伸長，30d芽可長成3～5cm的新梢，無叢生芽產生；增殖培養(yǎng)是將啟動培養(yǎng)獲得的無菌苗在無菌條件下，去掉基部葉片，切成長1cm左右含1個腋芽的莖段或莖尖，分別接種在增殖培養(yǎng)基①②③上；生根培養(yǎng)是將增殖培養(yǎng)產生的叢芽，選取2-3cm長的頂芽接種于生根培養(yǎng)基MS+IAA0.1+IBA0.05上誘導生根，移栽是當不定根長至0.5～1cm時，在實驗室內自然光照條件下不打開瓶蓋煉苗2～3d后取出小苗，小心洗去根部的培養(yǎng)基，用1∶1000的多菌靈溶液浸泡15min，栽于溫室內以珍珠巖為基質的苗床中，加蓋塑料薄膜保濕，一周后揭去薄膜，兩周移栽成活后的小苗可以轉入自然紅土∶腐葉土∶珍珠巖＝4∶2∶1(V/V)的混合基質中進行壯苗培養(yǎng)和開花栽培。
上述的培養(yǎng)方法，保持‘花葉’日本醉魚草觀賞特性穩(wěn)定遺傳的微型快繁在6-BA0.1mg·L-1的MS培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)10代以上。
具體實施例方式下面結合本發(fā)明的實施例來進一步對本發(fā)明的實質性內容進行說明，但本發(fā)明內容并不局限于此。
實施例11植物名稱‘花葉’日本醉魚草(Buddlejajaponica‘Variegata’)。
2材料類別 莖尖和帶腋芽的莖段。
3培養(yǎng)條件啟動培養(yǎng)基MS+6-BA0.05mg·L-1(單位下同)+IBA0.05+NAA0.05；增殖培養(yǎng)基①MS+6-BA0.1+NAA0.1；②MS+6-BA0.2+NAA0.1；③MS+6-BA0.5+NAA0.1；生根培養(yǎng)基MS+IAA0.1+IBA0.05。以上培養(yǎng)基均加入3％蔗糖、0.65％瓊脂，PH5.8。培養(yǎng)溫度為(23±1)℃，光照時間12hd-1，光照度1000～1500lx。
4生長與分化情況4.1啟動培養(yǎng)切取頂芽和帶腋芽的莖段首先用肥皂及自來水清洗，然后用蒸餾水沖洗干凈后，在超凈臺上用70％酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl2溶液消毒3～5min，無菌水沖洗5～6次，接種到啟動培養(yǎng)基上，經過10～15d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖明顯伸長，30d芽可長成3～5cm的新梢，無叢生芽產生。
4.2增殖培養(yǎng)將啟動培養(yǎng)獲得的無菌苗在無菌條件下，去掉基部葉片，切成長1cm左右含1個腋芽的莖段或莖尖，分別接種在增殖培養(yǎng)基①②③上，增殖培養(yǎng)30d的統(tǒng)計結果表明①號培養(yǎng)基中的芽體生長最佳，形成叢生芽，芽基部有極少的愈傷組織形成，花葉保持不變，約10％的增殖芽會長出1～3條不定根。增殖系數(shù)可達到4；②號培養(yǎng)基中的芽體矮小且葉片明顯變小，有愈傷組織產生，基部的叢生芽中有少量的綠色苗和黃化苗出現(xiàn)，增殖系數(shù)為6；③號培養(yǎng)基中的芽體增殖叢生，有的形成蓮座狀，有10％左右的玻璃苗產生，且花葉性狀發(fā)生變化，基部叢生芽條葉面的綠色部分減小，葉面有趨于黃白色的癥狀，基部愈傷組織增大。
4.3保持‘花葉’日本醉魚草觀賞特性穩(wěn)定遺傳的微型快繁方法以上增殖培養(yǎng)的結果表明，此醉魚草的‘花葉’性狀主要受6-BA的影響，6-BA濃度高于0.1mg·L-1以上‘花葉’性狀發(fā)生變異。實驗結果如下在6-BA0.1mg·L-1的MS培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)10代以上，后代仍然能保持‘花葉’日本醉魚草觀賞特性的穩(wěn)定遺傳。其增殖速率為4n(n為培養(yǎng)代數(shù))，一年一個無菌植株能繁殖出百萬與母本一模一樣的后代。
4.4生根培養(yǎng)將增殖培養(yǎng)產生的叢芽，選取2~3cm長的頂芽接種于生根培養(yǎng)基MS+IAA0.1+IBA0.05上誘導生根。12d左右芽體開始生根，17d后每芽條可生根4～6條，生根率達95％以上。
4.5移栽當不定根長至0.5～1cm時，在實驗室內自然光照條件下不打開瓶蓋煉苗2～3d后取出小苗，小心洗去根部的培養(yǎng)基，用1∶1000的多菌靈溶液浸泡15min，栽于溫室內以珍珠巖為基質的苗床中，加蓋塑料薄膜保濕，一周后揭去薄膜，兩周后成活率達97％。移栽成活后的小苗可以轉入自然紅土∶腐葉土∶珍珠巖＝4∶2∶1(V/V)的混合基質中進行壯苗培養(yǎng)和開花栽培。
本發(fā)明對研究葉斑類觀賞品種的遺傳穩(wěn)特性和實現(xiàn)該品種資源的離體保存具有理論現(xiàn)實意義，同時為日本花葉醉魚草的商業(yè)化生產奠定了基礎。
權利要求
1.‘花葉’日本醉魚草(Buddlija japonica‘Variegata’)的微型快繁方法，包括啟動培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽步驟，其特征在于培養(yǎng)條件選擇啟動培養(yǎng)基MS+6-BA0.05mg·L-1(單位下同)+IBA0.05+NAA0.05；增殖培養(yǎng)基①MS+6-BA0.1+NAA0.1；②MS+6-BA0.2+NAA0.1；③MS+6-BA0.5+NAA0.1；生根培養(yǎng)基MS+IAA0.1+IBA0.05，以上培養(yǎng)基均加入3％蔗糖、0.65％瓊脂，PH5.8，培養(yǎng)溫度為(23±1)℃，光照時間12hd-1，光照度1000～1500lx，啟動培養(yǎng)是切取頂芽和帶腋芽的莖段首先用肥皂及自來水清洗，然后用蒸餾水沖洗干凈后，在超凈臺上用70％酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl2溶液消毒3～5min，無菌水沖洗5～6次，接種到啟動培養(yǎng)基上，經過10～15d的培養(yǎng)，莖段腋芽開始萌動，莖尖明顯伸長，30d芽可長成3～5cm的新梢，無叢生芽產生；增殖培養(yǎng)是將啟動培養(yǎng)獲得的無菌苗在無菌條件下，去掉基部葉片，切成長1cm左右含1個腋芽的莖段或莖尖，分別接種在增殖培養(yǎng)基①②③上；生根培養(yǎng)是將增殖培養(yǎng)產生的叢芽，選取2-3cm長的頂芽接種于生根培養(yǎng)基MS+IAA0.1+IBA0.05上誘導生根，移栽是當不定根長至0.5～1cm時，在實驗室內自然光照條件下不打開瓶蓋煉苗2～3d后取出小苗，小心洗去根部的培養(yǎng)基，用1∶1000的多菌靈溶液浸泡15min，栽于溫室內以珍珠巖為基質的苗床中，加蓋塑料薄膜保濕，一周后揭去薄膜，兩周移栽成活后的小苗可以轉入自然紅土∶腐葉土∶珍珠巖＝4∶2∶1(V/V)的混合基質中進行壯苗培養(yǎng)和開花栽培。
2.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于保持‘花葉’日本醉魚草觀賞特性穩(wěn)定遺傳的微型快繁在6-BA0.1mg·L-1的MS培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)10代以上。
全文摘要
提供一種‘花葉’日本醉魚草(Buddleja japonica‘Variegata’)的微型快繁方法，包括啟動培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽步驟，對研究葉斑類觀賞品種的遺傳穩(wěn)特性和實現(xiàn)該品種資源的離體保存具有理論現(xiàn)實意義，同時為日本花葉醉魚草的商業(yè)化生產奠定了基礎。
文檔編號A01H4/00GK1481675SQ03117810
公開日2004年3月17日 申請日期2003年4月30日 優(yōu)先權日2003年4月30日
發(fā)明者孫衛(wèi)邦, 曾春霞 申請人:中國科學院昆明植物研究所