專利名稱：海蟄毒素源殺蟲劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體講是一種海蜇毒素源殺蟲劑，是利用海蜇毒素作高效、低毒的生物源殺蟲劑。
背景技術(shù)：
目前多數(shù)農(nóng)藥毒性高、殘留高、污染重，已嚴(yán)重影響了農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，甚至影響到人體健康。吃蔬菜農(nóng)藥中毒的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，例如北京市技術(shù)監(jiān)督局曾經(jīng)對(duì)蔬菜殘留農(nóng)藥進(jìn)行過檢測，結(jié)果令人吃驚，合格率只有60％-80％，以至于有人感嘆，“吃蔬菜等于吃污染”。因此，開發(fā)活性高、毒性低、選擇性強(qiáng)、環(huán)境相容性好的生物源農(nóng)藥，已是迫在眉睫。另一方面，就是抗藥性問題，近幾年來，由于農(nóng)藥的大量連續(xù)使用，許多害蟲的抗藥性發(fā)展迅速，如小菜蛾，許多國家和地區(qū)已報(bào)道了小菜蛾對(duì)各種殺蟲劑產(chǎn)生了抗藥性。如DDT、有機(jī)磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯都發(fā)生了抗藥性，此外，過去認(rèn)為不容易產(chǎn)生抗藥性的微生物殺蟲劑Bt，現(xiàn)在亦產(chǎn)生了抗藥性。再一方面，我國海蜇資源豐富，在海蜇大量存在時(shí)，它將干擾人們?cè)诤Ｉ系膸缀跛谢顒?dòng)，如娛樂，游泳，養(yǎng)漁業(yè)，更重要的是它傷及人的身體，如果被它刺到，能產(chǎn)生多種癥狀，包括疼痛、皮膚蟄痕、水腫、神經(jīng)抑制、心跳停止、麻痹和死亡等，給人類的生活帶來很大的威脅。所以利用海蜇資源制備生物殺蟲劑，利國利民?，F(xiàn)有的海蜇毒素分離提取技術(shù)，產(chǎn)率低、速度慢且生物活性極易喪失。
(三)技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的就是利用豐富的海蜇資源，提取具有生物活性的海蜇毒素蛋白，同時(shí)制備活性高、毒性低、選擇性強(qiáng)、環(huán)境相容性好、抗藥性強(qiáng)的海蜇毒素源殺蟲劑。
本發(fā)明的任務(wù)是由以下技術(shù)方案完成的，研制了一種海蜇毒素源殺蟲劑。從活體海蜇觸角中提取的海蜇毒素，按下列組分的重量/體積比制配海蜇毒素1-5體積份，穩(wěn)定劑 1.5-20重量份，磷酸緩沖液 500-1000體積份；將上述組分混合均勻，制配成殺蟲劑。
本海蜇毒素源殺蟲劑所說的海蜇毒素，其濃度為5-150mg/ml的海蜇毒素。
本海蜇毒素源殺蟲劑所說的海蜇毒素，其提取工藝步驟是，(1)將海蜇觸角從活體海蜇上切除，并置于-80---20℃的低溫下保存；(2)將稱量的海蜇觸角均勻絞碎，細(xì)胞破碎，加入1.0--5倍的重量/體積比的磷酸緩沖溶液中，放入4℃下，浸泡0.5-2h；(3)在4℃下，轉(zhuǎn)速13000rpm，離心20min，取上清液；殘?jiān)?.5--3倍的重量/體積比的磷酸緩沖溶液二次浸取，在4℃下，浸泡0.5-2h；再在4℃下，轉(zhuǎn)速13000rpm，離心20min；合并兩次離心的上清液；(4)用考馬斯亮藍(lán)法，以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)，測定合并的上清液中海蜇毒素濃度；(5)用滲透濃縮法，將(3)中的合并的上清液濃縮至所需濃度。
本海蜇毒素源殺蟲劑所說的穩(wěn)定劑是苯甲酸，和/或抗壞血酸(Vc)，和/或乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)。
本海蜇毒素源殺蟲劑，還可再加入表面活性劑是0.1-0.5重量份的C7-C19醇聚氧乙烯醚。
本海蜇毒素源殺蟲劑，還可再加入葉面附著增強(qiáng)劑是1-10體積份的殼聚糖。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(1)本產(chǎn)品對(duì)十字花科植物的主要害蟲，如小菜蛾，菜青蟲等具有較強(qiáng)的防治殺傷作用；
(2)本產(chǎn)品對(duì)人、畜無毒害；(3)本產(chǎn)品對(duì)環(huán)境無污染；(4)海蜇的剩余部分，可加工成食用海蜇；生產(chǎn)本產(chǎn)品的殘?jiān)捎脕碜鞣柿希?5)本產(chǎn)品充分利用了海蜇這種豐富的海洋生物資源，使海蜇這種低值資源獲得高值化發(fā)展；(6)在本殺蟲劑的配制過程中，使用C7-C19醇聚氧乙烯醚作為表面活性劑，它是非離子型的，泡沫少，具有降低液體表面張力的功能，使藥液能均勻的施展在頁面上，且能夠抑制殺蟲劑主要成分蛋白質(zhì)的變性。
(7)在本殺蟲劑的配制過程中首次加入葉面附著增強(qiáng)劑殼聚糖，它能夠在葉面形成一層薄膜，有利于殺蟲劑在葉面分布均勻，并能夠提高殺蟲劑的穩(wěn)定性，此外，殼聚糖還能夠促進(jìn)植物的生長發(fā)育；(8)在本殺蟲劑的配制過程中，添加了抗壞血酸，苯甲酸和EDTA，抗壞血酸具有抗氧化性，能夠防止毒素中的二硫鍵被氧化，與常用的抗氧化劑二巰基乙醇相比，在實(shí)驗(yàn)操作過程中，它對(duì)人體無毒，苯甲酸具有防腐性，能夠抑制細(xì)菌的生長，且比較廉價(jià)，EDTA為螯合劑，海蜇毒素中含有金屬蛋白酶，金屬蛋白酶會(huì)使所需的蛋白質(zhì)發(fā)生降解，甚至改變蛋白質(zhì)的活性，金屬蛋白酶需要金屬陽離子，如Ca2+，Mg2+，Mn2+等，才能充分發(fā)揮作用，用EDTA與二價(jià)金屬陽離子螯合，可以封阻金屬蛋白酶與海蜇毒素的作用，從而提高了速度、穩(wěn)定性和產(chǎn)率。
(四)實(shí)施例本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅局限于下列實(shí)施例中。
一、海蜇毒素提取的實(shí)施例(1)將一定量活體海蜇的海蜇觸角用超聲波破碎儀破碎，加入3.5倍的10mM，PH6的磷酸緩沖溶液(PB)中，放入4℃下，浸泡0.5h；
(2)在4℃下，轉(zhuǎn)速13000rpm，離心20min，取上清液；殘?jiān)?.5倍的重量/體積比的10mM，PH6的磷酸緩沖溶液(PB)二次浸取，在4℃下，浸泡0.5h；再在4℃下，轉(zhuǎn)速13000rpm，離心20min；合并兩次離心的上清液；(3)用考馬斯亮蘭染色法(該法選自《蛋白質(zhì)分子基礎(chǔ)》，陶慰孫等編，高等教育出版社)，以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)，測海蜇毒素在595nm處的吸光度(A595)，根據(jù)朗伯比爾定律，進(jìn)而算出上清液中海蜇毒素的濃度(Cmg/ml)。
(4)用滲透濃縮法(該法選自《蛋白質(zhì)分子基礎(chǔ)》，陶慰孫等編，高等教育出版社)，將合并的上清液濃縮至5-150mg/ml。
表1海蜇毒素提取的實(shí)施例
二、海蜇毒素源殺蟲劑的制備實(shí)施例將100mg/ml的海蜇毒素，殼聚糖為30％的酸溶液按表2配方制備海蜇毒素殺蟲劑。表2海蜇毒素源殺蟲劑的配方實(shí)施例
將上述實(shí)施例中的海蜇毒素源殺蟲劑，稀釋500倍，進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，以清水為對(duì)照，取得良好的防治效果，見表3。表3海蜇毒素源殺蟲劑防治菜青蟲田間效果調(diào)查結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種海蜇毒素源殺蟲劑，其特征在于從活體海蜇觸角中提取的海蜇毒素，按下列組分的重量/體積比制配海蜇毒素1-5體積份，穩(wěn)定劑 1.5-20重量份，磷酸緩沖液 500-1000體積份；將上述組分混合均勻，制配成殺蟲劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述海蜇毒素源殺蟲劑，其特征在于所說的海蜇毒素，其濃度為5-150mg/ml的海蜇毒素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述海蜇毒素源殺蟲劑，其特征在于所說的海蜇毒素，其提取工藝步驟是，(1)將海蜇觸角從活體海蜇上切除，并置于-80---20℃的低溫下保存；(2)將稱量的海蜇觸角均勻絞碎，細(xì)胞破碎，加入1.0--5倍的重量/體積比的磷酸緩沖溶液中，放入4℃下，浸泡0.5-2h；(3)在4℃下，轉(zhuǎn)速13000rpm，離心20min，取上清液；殘?jiān)?.5--3倍的重量/體積比的磷酸緩沖溶液二次浸取，在4℃下，浸泡0.5-2h；再在4℃下，轉(zhuǎn)速13000rpm，離心20min；合并兩次離心的上清液；(4)用考馬斯亮藍(lán)法，以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)，測定合并的上清液中海蜇毒素濃度；(5)用滲透濃縮法，將(3)中的合并的上清液濃縮至所需濃度。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述海蜇毒素源殺蟲劑，其特征在于所說的穩(wěn)定劑是苯甲酸，和/或抗壞血酸，和/或乙二胺四乙酸二鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述海蜇毒素源殺蟲劑，其特征在于該殺蟲劑，再加入表面活性劑是0.1-0.5重量份的C7-C19醇聚氧乙烯醚。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述海蜇毒素源殺蟲劑，其特征在于該殺蟲劑，再加入葉面附著增強(qiáng)劑是1-10體積份的殼聚糖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種海蜇毒素源殺蟲劑。從活體海蜇觸角中提取制得的海蜇毒素，按下列組分的重量/體積比制配海蜇毒素是1－5體積份，穩(wěn)定劑是1.5－20重量份，磷酸緩沖液是500－1000體積份；將上述組分混合均勻，制配成殺蟲劑。本殺蟲劑對(duì)十字花科植物的主要害蟲，如小菜蛾，菜青蟲等具有較強(qiáng)的防治殺傷作用；對(duì)人、畜無毒害；對(duì)環(huán)境無污染；海蜇的剩余部分，可加工成食用海蜇；生產(chǎn)本產(chǎn)品的殘?jiān)捎脕碜鞣柿?；本殺蟲劑充分利用了海蜇這種豐富的海洋生物資源，使海蜇這種低值資源獲得高值化發(fā)展。
文檔編號(hào)A01N63/00GK1402990SQ0213559
公開日2003年3月19日 申請(qǐng)日期2002年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月9日
發(fā)明者李鵬程, 于華華 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院海洋研究所