專(zhuān)利名稱(chēng)：用抑制adam活性的物質(zhì)防止或改善皺紋的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用抑制ADAM活性的物質(zhì)防止或改善皺紋。本發(fā)明還涉及通過(guò)利用 ADAM活性抑制作為指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法。
背景技術(shù)：
隨著年齡增大，皺紋作為一種皮膚老化的現(xiàn)象增加。最近，從美容等的觀點(diǎn)，人們特別是婦女對(duì)防止和改善皺紋有顯著提高的興趣。根據(jù)皺紋產(chǎn)生部位、皺紋發(fā)生機(jī)制等等， 皺紋可以被大致分為大皺紋、細(xì)微皺紋和皺褶皺紋。大皺紋是發(fā)生在脖子后面等的深皺紋， 主要是由于光老化。細(xì)微皺紋是發(fā)生在眼睛或嘴周?chē)容^淺的皺紋。皺褶皺紋是發(fā)生在非暴露的身體部位如老人的腹部的褶狀皺紋。到目前為止，已進(jìn)行了關(guān)于主要由于光老化發(fā)生的大皺紋的研究，且皺紋已被認(rèn)為是一種由于光老化的癥狀。至于光老化，已進(jìn)行了發(fā)生機(jī)制等的研究，且已建立了動(dòng)物模型或人的評(píng)價(jià)體系。抑制由于光老化形成的皺紋的多數(shù)努力到目前為止已嘗試了防止或減輕紫外線對(duì)皮膚的不利作用。例如，為了防止紫外線對(duì)皮膚的不利作用，已開(kāi)發(fā)和使用了含有多種能吸收、分散或阻擋紫外線的物質(zhì)如氧化鈦、氧化鋅、對(duì)甲氧基肉桂酸酯和對(duì)氨基苯甲酸酯的化妝品(遮蔽日光的(sun screen)化妝品和防止日光的(sun protect)化妝品)。同樣，已發(fā)現(xiàn)由于紫外輻射在皮膚中產(chǎn)生的自由基不利地影響組成皮膚的纖維組分如膠原蛋白和彈性蛋白，且已提出了含有抗氧化劑的化妝品(參見(jiàn)參考文獻(xiàn)，例如PCT日本公開(kāi)號(hào)2001-508809)。更進(jìn)一步，已考慮皮膚光老化的主要因素之一是由紫外輻射誘導(dǎo)分解真皮結(jié)締組織如膠原蛋白和彈性蛋白的MMP以及從而真皮結(jié)締組織被MMP破壞的現(xiàn)象。為防止皮膚的光老化，因而已提出了例如用于抑制皮膚光老化的組合物，該組合物包含UVA阻擋劑、UVB阻擋劑和MMP抑制劑如類(lèi)視黃醇(參見(jiàn)參考文獻(xiàn)，例如PCT日本公開(kāi)號(hào) 2001-520677)。最近，中老年婦女對(duì)美容有了增加的興趣且對(duì)發(fā)生在眼睛或嘴周?chē)募?xì)微皺紋有增加的興趣，其細(xì)微皺紋的產(chǎn)生是由于隨著年齡增加表皮角質(zhì)層的水保留能力降低或由于隨年齡增加表皮脂質(zhì)的分泌降低導(dǎo)致發(fā)生的皮脂減少。認(rèn)為細(xì)微皺紋由皮膚的干燥導(dǎo)致發(fā)生。同樣認(rèn)為在細(xì)微皺紋的發(fā)生機(jī)制和細(xì)微皺紋的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)、生物化學(xué)改變上，細(xì)微皺紋與由于光老化發(fā)生的大皺紋顯著不同。例如，已確認(rèn)關(guān)于人角質(zhì)層的水含量和小皺紋的程度彼此相關(guān)(參見(jiàn)參考文獻(xiàn)，例如Imokawa等的文獻(xiàn)Fragrance Journal ； 1992(11)29-42)。更進(jìn)一步，已報(bào)道在屏障功能用不飽和脂肪酸連續(xù)破壞的情況下表皮皺紋發(fā)生(參見(jiàn)參考文獻(xiàn)，例如JinMasaki的文獻(xiàn)Perfume Transactions ；2001，第25卷， No. 1,34-38)。然而，還沒(méi)有充分弄清在細(xì)微皺紋的皮膚里在蛋白質(zhì)水平或基因水平上發(fā)生了何種生物化學(xué)改變，而且防止和改善細(xì)微皺紋必須依賴(lài)通過(guò)使用保濕劑如甘油、山梨醇
3或植物液提取物或含有膠原蛋白等的化妝品來(lái)保護(hù)皮膚免于干燥的方法。然而，僅僅通過(guò)使用保濕劑等保護(hù)皮膚免于干燥，細(xì)微皺紋不能被充分防止和改善。因此，存在對(duì)能防止和改善細(xì)微皺紋更加有效的物質(zhì)的強(qiáng)烈需求。鑒于上述情況，本發(fā)明的目的是闡明皮膚中參與細(xì)微皺紋形成的生物化學(xué)改變、 詳述能抑制所述生物化學(xué)改變的物質(zhì)，并通過(guò)使用所述物質(zhì)更有效地防止或改善皺紋。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供通過(guò)利用抑制前述生物化學(xué)改變作為指標(biāo)使試驗(yàn)物質(zhì)的抗皺紋效果能被更有效和更容易評(píng)價(jià)的方法。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，對(duì)無(wú)毛的小鼠反復(fù)剝離膠帶時(shí)，連續(xù)的皮膚屏障被隨之破壞，同發(fā)生在人類(lèi)皮膚中的細(xì)微皺紋相同的表皮和真皮改變發(fā)生在小鼠的皮膚中。發(fā)明人因此成功地建立了細(xì)微皺紋的小鼠模型。本發(fā)明基于發(fā)現(xiàn)在上述細(xì)微皺紋的小鼠模型中，具有解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域的屬于ADAM(解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶)家族的蛋白質(zhì)(下文中稱(chēng)為ADAM)如ADAM-9、ADAM-10或ADAM-17的表皮基因表達(dá)提高，以及通過(guò)這些ADAM的作用而自細(xì)胞膜釋放和活化的HB-EGF (肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子)以及雙調(diào)蛋白的表皮基因表達(dá)提高。本發(fā)明還基于發(fā)現(xiàn)通過(guò)應(yīng)用這些ADAM的抑制劑，能夠抑制表皮和真皮的肥厚及皺紋形成。ADAM如ADAM-9、ADAM-10或ADAM-17是在皮膚細(xì)胞表面存在的酶，在皮膚中發(fā)揮從細(xì)胞膜釋放生長(zhǎng)因子如HB-EGF、雙調(diào)蛋白、TNF-α和TGF-α及活化上述生長(zhǎng)因子的作用。認(rèn)為一種重要的細(xì)微皺紋形成的機(jī)制是ADAM在皮膚中被活化或在皮膚中表達(dá)提高，從而ADAM促進(jìn)生長(zhǎng)因子如HB-EGF的釋放與活化、以及導(dǎo)致發(fā)生表皮和真皮的肥厚。因此，認(rèn)為通過(guò)抑制皮膚中ADAM的活性，能夠抑制HB-EGF等的活性提高，抑制表皮和真皮肥厚，以及能夠防止或改善皺紋特別是細(xì)微皺紋的形成。

圖1是對(duì)通過(guò)抑制皮膚中ADAM的活性而防止或改善皺紋的機(jī)制進(jìn)行說(shuō)明的概略圖。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了組合物，其含有防止或改善皺紋有效量的能夠抑制存在于皮膚中的ADAM的活性的物質(zhì)。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了防止或改善皺紋的方法，其包括抑制存在于皮膚中的ADAM的活性的步驟。通過(guò)向皮膚應(yīng)用能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)，能防止或改善皺紋。根據(jù)本發(fā)明的防止或改善皺紋的方法能優(yōu)選地用作美容方法。在本發(fā)明的進(jìn)一步的方面，本發(fā)明涉及能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)的用途，用于防止或改善皺紋。能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)能用于防止或改善皺紋的美容處理中。在本發(fā)明的更進(jìn)一步的方面，本發(fā)明涉及能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)的用途，用于產(chǎn)生防止或改善皺紋的組合物。對(duì)于組合物的種類(lèi)沒(méi)有限制。然而，組合物應(yīng)優(yōu)選地是一種用于皮膚外用的制品，如化妝品、藥品和準(zhǔn)藥品。組合物應(yīng)更優(yōu)選地是一種化妝品。存在于皮膚中的ADAM 的例子包括 ADAM-9、ADAM-10, ADAM-12, ADAM-15, ADAM-17 和ADAM-19。尤其是已發(fā)現(xiàn)ADAM-9、ADAM-10和ADAM-17深度參與細(xì)胞生長(zhǎng)因子的釋放與活化。在文中使用的術(shù)語(yǔ)“抑制ADAM的活性”包含抑制ADAM的酶活性和用于降低皮膚中ADAM的活性的任意作用，如抑制基因表達(dá)和蛋白質(zhì)形成的作用。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法，其包括以下步驟1)將受試物質(zhì)與人或動(dòng)物的皮膚、皮膚組織或細(xì)胞接觸；2)檢測(cè)所述皮膚、皮膚組織或細(xì)胞中ADAM的酶活性或基因表達(dá)水平；3)通過(guò)使用ADAM的酶活性或基因表達(dá)水平作為指標(biāo)，評(píng)價(jià)受試物質(zhì)的抗皺紋效^ οADAM 可以是例如 ADAM-9、ADAM-10 或 ADAM-17。例如，在利用皮膚細(xì)胞尤其是表皮角質(zhì)形成細(xì)胞時(shí)能快速和有效評(píng)價(jià)多種受試物質(zhì)的抗皺紋效果。在文中使用的術(shù)語(yǔ)“抗皺紋效果”是指防止皺紋形成或改善已形成的皺紋的任意效果。將能抑制ADAM活性的物質(zhì)應(yīng)用至皮膚時(shí)，能抑制如ADAM-9、ADAM-10或ADAM-17 這樣的在皮膚中存在的ADAM的活性，能抑制由于多種主要原因如皮脂減少和洗臉引起的皮膚屏障破壞所致表皮和真皮中生長(zhǎng)因子如HB-EGF的釋放和活化，能抑制表皮和真皮的肥厚。從而能被顯著有效地防止或改善皺紋尤其是細(xì)微皺紋的形成。另外，用根據(jù)本發(fā)明的其中將ADAM活性抑制用作指標(biāo)的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法， 能有效地和容易地具體指定有巨大效果的抗皺紋物質(zhì)。附圖簡(jiǎn)述圖1是顯示通過(guò)抑制表皮中的ADAM活性而防止或改善皺紋的機(jī)制的概略圖；圖2A是顯示受到膠帶剝離的小鼠皮膚的復(fù)制圖像；圖2B是顯示小鼠皮膚的皮膚組織切片的顯微攝影圖，其中小鼠皮膚組織切片已用HE (蘇木精-伊紅)染色，圖3是顯示在細(xì)微皺紋的小鼠模型中ADAM-9、ADAM-17、HB-EGF和雙調(diào)蛋白的基因表達(dá)的改變圖，圖4A是顯示在細(xì)微皺紋的小鼠模型中已應(yīng)用不同藥物的皮膚的復(fù)制圖像，圖4B是顯示小鼠皮膚組織切片的顯微攝影圖，其中小鼠皮膚組織切片已用HE (蘇木精-伊紅)染色，圖5是顯示ADAM活性抑制物質(zhì)的抗皺紋效果圖，其中抗皺紋效果從視覺(jué)判斷獲得，圖6是顯示ADAM活性抑制物質(zhì)的抗皺紋效果圖，其中抗皺紋效果以皺紋面積 (% )表示。實(shí)施發(fā)明的最佳方式ADAM是有兩種特征即粘附和細(xì)胞外蛋白分解的多功能蛋白，且至少有30種家族的ADAM?，F(xiàn)在，ADAM家族的種類(lèi)數(shù)量還在增加。ADAM在多種動(dòng)物和多種組織中表達(dá)。存在于皮膚中的 ADAM 的例子包括 ADAM-9、ADAM-10、ADAM-12、ADAM-15、ADAM-17 和 ADAM-19。 尤其是已發(fā)現(xiàn)ADAM-9、ADAM-10和ADAM-17深度參與細(xì)胞生長(zhǎng)因子的釋放與活化。能用于本發(fā)明的能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)可選自能降低皮膚中ADAM的活性的廣泛多種物質(zhì)。例如，能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)可以是能抑制ADAM的酶活性的物質(zhì)，或者是能夠抑制ADAM基因表達(dá)或蛋白質(zhì)形成的物質(zhì)。另外，能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)可以是天然物質(zhì)，如動(dòng)物來(lái)源的物質(zhì)或植物來(lái)源的物質(zhì)。可選擇地，能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)可以是合成物質(zhì)。如上所述的能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)的例子包括TAPI-I (N- (R) - (2-(羥氨基羰基)甲基)-4-甲基戊?；?L-Nal-L-丙氨酸2-氨乙基酰胺；Immimex，西雅圖，WA)和 4-甲氧基苯基異羥肟酸。然而，能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)并不局限于上述物質(zhì)的例子。能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)應(yīng)優(yōu)選地用于皮膚外用制品中。但是，能夠抑制ADAM 的活性的物質(zhì)的用途不限于上述應(yīng)用。在皮膚外用制品中，可只含有一種能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)?？蛇x擇地，在皮膚外用制品中，可含有組合混合的至少兩種能抑制ADAM的活性的物質(zhì)。另外，在皮膚外用制品中這些能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)的混合比例可根據(jù)使用方式、產(chǎn)品形式等等改變，并不局限于特定值。然而，例如能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)的混合比例相對(duì)于皮膚外用制品的總量而言應(yīng)優(yōu)選地落在0. 001質(zhì)量％到10質(zhì)量％的范圍內(nèi)，更優(yōu)選地落在0. 005質(zhì)量％到 5質(zhì)量％的范圍內(nèi)，且最優(yōu)選地落在0. 01質(zhì)量％到1質(zhì)量％的范圍內(nèi)。文中使用的術(shù)語(yǔ)“皮膚外用制品”包含化妝品、藥品、準(zhǔn)藥品等等。同樣，皮膚外用制品可以采用廣泛的多種制品形式，如水溶液型、增溶型、乳劑型、油液型、凝膠型、膏型、軟膏型、氣溶膠型、水-油雙層型和油-水-粉末三層型。更進(jìn)一步，皮膚外用制品可以采用負(fù)載在片狀基礎(chǔ)材料上的形式。另外，皮膚外用制品可以具有多種產(chǎn)品形式并可以在多種應(yīng)用中使用。例如皮膚外用制品可以化妝水、乳液、皮膚用霜和面膜的產(chǎn)品形式用作用于臉部、身體和頭部皮膚的外用制品。根據(jù)需要，除了能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)以外，皮膚外用制品也可以含有其它通常在皮膚外用制品如化妝品和藥品中使用的任意的組分。另外，皮膚外用制品可以根據(jù)目的制品形式按照常規(guī)方法產(chǎn)生。例如上述能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)和至少一種選自下述組分的組分可以一起混合，并因此可制備用于皮膚外用的制品。特別地，皮膚外用制品可以含有至少一種紫外線吸收劑。紫外線吸收劑的例子包括苯甲酸型紫外線吸收劑如對(duì)氨基苯甲酸(以下縮寫(xiě)為PABA)、PABA單甘油脂、N, N- 二丙氧基PABA乙脂、N，N- 二乙氧基PABA乙脂、N，N- 二甲基PABA乙脂、N，N- 二甲基PABA 丁脂和N，N-二甲基PABA甲脂；鄰氨基苯甲酸型紫外線吸收劑，如N-乙?；彴被郊姿岣弑『纱贾?；水楊酸型紫外線吸收劑如水楊酸戊酯、水楊酸薄荷醇酯、水楊酸高薄荷醇酯、水楊酸辛酯、水楊酸苯酯、水楊酸苯甲酯和水楊酸對(duì)異丙醇苯酯；肉桂酸型紫外線吸收劑如肉桂酸辛酯、4-異丙基肉桂酸乙酯、2，5-二異丙基肉桂酸甲酯、2，4_ 二異丙基肉桂酸乙酯、2，
4-二異丙基肉桂酸甲酯、對(duì)甲氧基肉桂酸丙酯、對(duì)甲氧基肉桂酸異丙酯、對(duì)甲氧基肉桂酸異戊酯、對(duì)甲氧基肉桂酸辛酯(對(duì)甲氧基肉桂酸2-乙基己基酯)、對(duì)甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、對(duì)甲氧基肉桂酸環(huán)己基酯、α-氰基-β-苯基肉桂酸乙酯、α-氰基-β-苯基肉桂酸2-乙基己基酯、甘油基單-2-乙基己酰-二對(duì)甲氧基肉桂酸酯和三甲氧基肉桂酸甲基雙 (三甲基硅氧烷)甲硅烷基異戊脂；3-(4’ -甲基苯亞甲基)-d，1-樟腦；3-苯亞甲基-d， 1-樟腦；尿刊酸；尿刊酸乙脂；2-苯基-5-甲基苯并巧悉唑；2，2’ -羥基-5-甲基苯基苯并三唑；2-(2，-羥基-5，-叔辛基苯基)苯并三唑；2-(2，-羥基-5，-甲基苯基)苯并三唑； 二芐連氮(dibenzalazine) ；二-甲氧苯?；淄?；4_甲氧基_4’ -叔丁基二苯甲酰甲烷；
5-(3，3-二甲基-2-降冰片烯(norbornylidene))-3-戊-2-酮；和二嗎啉代噠嗪酮。
6
可以使用的紫外線分散劑的例子包括顆粒如氧化鈦、微粒氧化鈦、氧化鋅、微粒氧化鋅、氧化鐵、微粒氧化鐵、氧化鈰。通常地，紫外線分散劑以針狀顆粒、紡錘狀顆粒、球狀顆粒和粒狀顆粒的形式使用。另外，紫外線分散劑應(yīng)優(yōu)選地是粒徑最多為0. 1 μ m的細(xì)微顆粒。也優(yōu)選地使用已受到疏水化加工的紫外線分散劑如使用甲基氫聚硅氧烷或硅烷偶聯(lián)劑的硅氧烷加工；金屬皂加工；使用全氟烷基磷酸二乙醇胺鹽、全氟烷基甲硅烷等的氟加工；或糊精脂肪酸脂加工?？梢允褂玫囊簯B(tài)脂肪和油的例子包括鱷梨油、山茶油、鱉脂、馬卡達(dá)姆堅(jiān)果油、玉米油、水貂油、橄欖油、菜籽油、卵黃油、麻油、桃仁油、小麥胚芽油、油茶(sasanqua)油、蓖麻豆油、亞麻子油、紅花油、棉籽油、紫蘇油、大豆油、花生油、茶籽油、椰子油、米糠油、中國(guó)油桐油、日本油桐油、霍霍巴油、胚芽油和三甘油?？梢允褂玫墓虘B(tài)脂肪和油的例子包括可可脂、椰子油、馬脂、固化椰子油、棕櫚油、 牛脂、羊脂、固化牛脂、棕櫚仁油、豬脂、牛骨脂、日本臘仁油、固化油、牛腿脂、日本臘和固化蓖麻豆油?？梢允褂玫呐D的例子包括蜂臘、小燭樹(shù)臘、棉臘、臘棕櫚臘、昆蟲(chóng)臘、鯨臘、牡丹臘、 米糠臘、羊毛脂、木棉花臘、羊毛脂醋酸鹽、液態(tài)羊毛脂、蘆黍臘、羊毛脂脂肪酸異丙脂、月桂酸己脂、還原的羊毛脂、霍霍巴臘、硬羊毛脂、蟲(chóng)膠臘、POE羊毛脂醇醚、POE羊毛脂醇醋酸酯、POE膽固醇醚、羊毛脂脂肪酸聚乙二醇和POE氫化羊毛脂醇醚。可以使用的烴油的例子包括液態(tài)石蠟、地臘、角鯊?fù)?、姥鮫烷、石蠟、地臘、角鯊烯、 凡士林、微晶臘、聚乙烯臘、和Fischer-Tropsch臘。可以使用的高級(jí)脂肪酸的例子包括月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、崳樹(shù)酸、油酸、十一烯酸、甲基苯甲酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)?？梢允褂玫母呒?jí)醇的例子包括直鏈醇(如月桂醇、鯨蠟醇、硬脂酰醇、山崳醇、肉豆蔻醇、十八碳-9-烯基醇和十六醇十八醇混合物)和支鏈醇(如單硬脂酰甘油醚(鯊肝醇)、2_癸基四癸炔羊毛脂醇、膽固醇、植物留醇、己基十二醇、辛基十二醇)?？梢允褂玫暮铣甚ビ偷睦影ㄈ舛罐⑺岙惐ァ⑿了狯L蠟酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、癸基二甲基辛酸己酯、醋酸鯨蠟酯、醋酸肉豆蔻酯、醋酸羊毛脂酯、硬脂酸異十六烷基酯、異硬脂酸異十六烷基酯、12-羥基硬脂酸膽固醇酯、二-2-乙基己酸乙二醇酯、脂肪酸二戊赤蘚醇酯、單-異硬脂酸N-烷基乙二醇酯、二葵酸新戊基乙二醇酯、蘋(píng)果酸二 -異硬脂酰酯、二-2-庚基十一酸甘油酯、三-2-乙基己酸三羥甲基丙酯、三異硬脂酸三羥甲基丙酯、 四-2-乙基己酸戊赤蘚醇酯、三-2-乙基己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三-異棕櫚酸甘油酯、 三-異硬脂酸三羥甲基丙酯、己酸鯨蠟基-2-乙酯、棕櫚酸2-乙基己酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三-2-庚基十一酸甘油酯、蓖麻豆油脂肪酸甲酯、油酸油酯、乙酰甘油、棕櫚酸2-庚基十一烷酯、己二酸二異丁酯、N-月桂?；?L-谷氨酸-2-辛基十二烷基酯、己二酸二 -2-庚基十一烷基酯、月桂酸乙酯、癸二酸二 -2-乙基己酯、肉豆蔻酸2-己基癸酯、棕櫚酸2-己基癸酯、己二酸2-己基癸酯、琥珀酸2-乙基己酯、檸檬酸三乙酯、聚氧乙烯和聚氧丙稀隨機(jī)聚合物甲酯?？梢允褂玫墓柩跬橛偷睦影ㄦ湢罹酃柩跬?如二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚
7硅氧烷和二苯基聚硅氧烷)、環(huán)狀聚硅氧烷(如辛甲基環(huán)四硅氧烷、十甲基-環(huán)五硅氧烷和十二甲基環(huán)六硅氧烷)、已形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的硅氧烷樹(shù)脂、硅氧烷橡膠和多種修飾的聚硅氧烷(如氨基修飾的聚硅氧烷、聚醚修飾的聚硅氧烷、烷基修飾的聚硅氧烷和氟修飾的聚硅氧烷)。 更進(jìn)一步，用于皮膚外用的制品可以含有例如保濕劑如聚乙二醇、甘油、1，3_ 丁烯乙二醇、赤蘚醇、山梨醇、木糖醇和麥芽醇；增稠劑如纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、 甲基羥丙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、溫悖籽、角叉菜聚糖、果膠、甘露聚糖、凝膠多糖、硫酸軟骨素、淀粉、半乳聚糖、硫酸皮膚素、糖原、阿拉伯樹(shù)膠、硫酸乙酰肝素、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸鈉、黃蓍膠、硫酸角質(zhì)素、軟骨素、蒼耳烷膠、硫酸粘多糖、羥乙基瓜耳膠、羧甲基瓜耳膠、瓜耳膠、右旋糖酐、硫酸角質(zhì)、豆角膠、琥珀酰葡聚糖、charonin酸、幾丁質(zhì)、殼聚糖、羧甲基幾丁質(zhì)和瓊脂；低級(jí)醇如乙醇；抗氧化劑如丁基羥基甲苯、維生素E和肌醇六磷酸鈣鎂；抗菌劑如苯甲酸、水楊酸、山梨酸、對(duì)-羥基苯甲酸烷基酯和六氯酚；有機(jī)酸如?；“彼?例如月桂酰N-甲基-甘氨酸(carcosine)鈉)、谷胱甘肽、檸檬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸和乳酸；維生素如維生素A及其衍生物、維生素B如維生素B6鹽酸鹽、維生素B6三棕櫚酸鹽、維生素B6 二辛酸鹽、維生素B2及其衍生物、維生素B12、維生素B15及其衍生物、維生素C如抗壞血酸、抗壞血酸硫酸酯(鹽)、抗壞血酸磷酸酯(鹽)和抗壞血酸二棕櫚酸鹽、 維生素E如α -生育酚、β -生育酚、Y -生育酚和維生素E醋酸鹽、維生素D、維生素H、泛酸和泛酰巰基乙胺；多種藥品如煙酸酰胺、煙酸芐酯、Y-谷維素、尿囊素、甘草酸(鹽)、 甘草酸及其衍生物、扁柏酚、沒(méi)藥醇、桉葉素、百里酚、肌醇、皂草苷如柴胡皂草苷、胡蘿卜皂草苷、絲瓜皂草苷和突二皂草苷、泛酰乙基醚、乙炔基孕二烯酮、凝血酸、熊果甙、塞發(fā)冉質(zhì)和胎盤(pán)提取物；植物提取物如羊蹄(Rumex japonicus Houtt)、苦參(Sophora flavescens Aiton)、日本萍蓬草(Nuphar japonicum DC)、柑桔、藥鼠尾草(Salvia officinalis)、 高山蓍草(Achillea alpine L)、Malva sylvestris L. var. mauritiana Mill.(樹(shù)銀葵)、獐牙菜(Swertie Herb)、Thymus vulgaris L(普通百里香)、日本當(dāng)歸根、苦桔皮、 fnJf1! (Equisetum arvense L.)、絲瓜、歐沙|,|七卩十豐對(duì)(Aesculus hippocastanum L) (gH)、l^H (Saxifraga stoloniferaMeerb) > dj^HM^ (Arnica Montana) ( HM 菊屬)、百合、魁蒿(Artemisia Princeps Pampan)、茍藥(Paeonia lactiflora Pall)、聲菩、桅子(Gardenia jasminoides Ellis forma grandiflora(Lour)Makino)、曰本花柏 (Chamaecyparis pisifera Endi)的提取物、山植(Crataegus oxyacantha L)(英格蘭山楂)提取物、貫葉金絲桃(Hypericum perforatum L)提取物、鳶尾屬提取物、棕兒茶提取物、Ginkgo biloba L(銀杏)提取物、地椒(Thymus quinquecostatus Celak)提取物、 Foeniculum vulgare Mill (小茴香)提取物、烏龍茶提取物、水百合提取物、玫瑰果提取物、 日本香茶菜(Isodon japonicus (Barm)Hara)提取物、黃芩根提取物、黃檗樹(shù)皮提取物、野芝麻變禾中(Lamium album L. var. barbatum) (Sieb. Et Zucc. )Franch. Et Savat 提取物、甘草提取物、桅子(Gardenia jasminoides Ellis forma grandiflora (Lour. )Makino)提取物、 黑茶提取物、中國(guó) Tamarisk Twing提取物、委陵菜(Potentilla tonnebtilla Schrank)提取物、玫瑰提取物、Ioofan提取物、薄荷提取物、迷迭香提取物及蜂王漿提取物；著色劑；非離子型表面活性劑如失水山梨糖醇單月桂酸酯、失水山梨糖醇單棕櫚酸酯、失水山梨糖醇倍半油酸酯、失水山梨醇三油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐
8單硬脂酸酯、聚乙二醇單油酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚乙二醇二醚、月桂酰二乙醇酰胺、脂肪酸異丙醇酰胺、麥芽糖醇羥基脂肪酸酯、烷基化多糖、烷基糖苷和糖酯；陽(yáng)離子型表面活性劑如十八烷基三甲基氯化銨、苯扎氯胺和十二烷基氧化胺；陰離子型表面活性劑如棕櫚酸鈉、月桂酸鈉、sodium laurylate、月桂基硫酸鉀、烷基硫酸三乙醇胺醚、土耳其紅油、線性十二烷基苯硫酸鹽、聚氧乙烯固化蓖麻籽油馬來(lái)酸酯和?；谆；撬?；兩性表面活性劑； 中和劑；抗氧化劑如Y-生育酚和丁基羥基甲苯；及防腐劑如苯氧基乙醇和對(duì)羥基苯甲酸在根據(jù)本發(fā)明的方法中，上述能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)可以多種形式之一應(yīng)用到皮膚，由此該物質(zhì)能夠用于皮膚，并由此能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的目的。另外，上述能夠抑制 ADAM活性的物質(zhì)可以單獨(dú)應(yīng)用。備選地，上述能夠抑制ADAM的活性的物質(zhì)可以與其它任意組分混合應(yīng)用。更進(jìn)一步，對(duì)上述能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)應(yīng)用到的皮膚部位沒(méi)有限制。 特別地，上述能夠抑制ADAM活性的物質(zhì)可以應(yīng)用到身體表面皮膚的每個(gè)部位，包括頭部皮膚。根據(jù)本發(fā)明的方法應(yīng)優(yōu)選地用作美容方法，但不限于用作美容方法。根據(jù)本發(fā)明的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法包括將受試物質(zhì)與人或動(dòng)物的皮膚、皮膚組織或皮膚細(xì)胞相接觸的步驟。根據(jù)本發(fā)明的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法可以通過(guò)利用人和動(dòng)物的多種皮膚之一實(shí)施，由此可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。例如，根據(jù)本發(fā)明的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法可以通過(guò)利用無(wú)毛小鼠的皮膚實(shí)施，其皮膚己受到膠帶剝離用于剝?nèi)テつw的角質(zhì)層。特別地，可以對(duì)無(wú)毛小鼠的皮膚剝離膠帶，這樣可剝?nèi)テつw的角質(zhì)層，因此可連續(xù)破壞皮膚屏障。在這種情況下，小鼠的皮膚出現(xiàn)細(xì)微皺紋，且ADAM如ADAM-9、ADAM-10或ADAM-17的酶活性或基因表達(dá)提高。認(rèn)為細(xì)微皺紋形成的原因之一是通過(guò)提高ADAM的活性促進(jìn)生長(zhǎng)因子如HB-EGF的釋放與活化，并且由此導(dǎo)致發(fā)生表皮和真皮的肥厚。因此，認(rèn)為用根據(jù)本發(fā)明的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法，例如通過(guò)指定能夠降低已通過(guò)上述的連續(xù)皮膚屏障破壞而提高的ADAM基因表達(dá)的物質(zhì)，能夠有效地指定抗皺紋物質(zhì)。在根據(jù)本發(fā)明的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法中使用的皮膚細(xì)胞是形成皮膚表皮區(qū)域的上皮細(xì)胞。上皮細(xì)胞的例子包括表皮細(xì)胞如表皮角質(zhì)形成細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、乳腺細(xì)胞、 小腸上皮細(xì)胞和其它粘膜上皮細(xì)胞。在上述列舉的上皮細(xì)胞的例子中，作為表皮細(xì)胞的一個(gè)例子的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞具有能夠容易地培養(yǎng)細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)。另外，這種檢測(cè)方法是與表皮狀態(tài)相關(guān)的技術(shù)。因此，表皮角質(zhì)形成細(xì)胞是對(duì)于本方法優(yōu)選的皮膚細(xì)胞。另外，皮膚細(xì)胞供給來(lái)源應(yīng)優(yōu)選地是人。更進(jìn)一步，在本方法中使用的皮膚細(xì)胞應(yīng)優(yōu)選地是經(jīng)培養(yǎng)的細(xì)胞。經(jīng)培養(yǎng)的細(xì)胞能夠用常規(guī)方法制備。例如，在皮膚細(xì)胞是人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的情況下，可以通過(guò)從皮膚切片中去除其中的脂肪組織和血液及通過(guò)蛋白酶處理分離其中的真皮部分等加工，從修復(fù)外科、皮膚病學(xué)、外科手術(shù)等獲得的過(guò)剩的皮膚切片制備人表皮。另外，可以從這樣制備的人表皮中分離表皮角質(zhì)形成細(xì)胞并可通過(guò)常規(guī)方法利用KGM培養(yǎng)基原代培養(yǎng)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞并可以根據(jù)常規(guī)方法通過(guò)利用蛋白酶等等傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)細(xì)胞。以這種方式，能夠得到所需的培養(yǎng)的人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞。所述類(lèi)型的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞是商業(yè)上可得的。在本發(fā)明中也可使用商業(yè)上可得的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞。ADAM的酶活性的檢測(cè)能夠通過(guò)例如測(cè)量ADAM底物如HB-EGF的釋放量。
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另外，為了檢測(cè)待檢測(cè)的基因表達(dá)水平，例如可以通過(guò)利用RT-PCR、Northern印跡技術(shù)等擴(kuò)增和/或測(cè)定cDNA。作為選擇，可以通過(guò)利用ELISA、Western印跡技術(shù)等檢測(cè)和/或測(cè)定蛋白質(zhì)。通過(guò)將ADAM的酶活性或基因表達(dá)水平用作指數(shù)評(píng)價(jià)受試物質(zhì)的抗皺紋效果的步驟可以包括例如這樣的技術(shù)，其中未加入受試物質(zhì)或加入已知不影響ADAM的活性的物質(zhì)的皮膚、皮膚組織或皮膚細(xì)胞用作對(duì)照，并將其中加入了受試物質(zhì)時(shí)的ADAM的酶活性或基因表達(dá)水平與對(duì)照中的ADAM的酶活性或基因表達(dá)水平相比較。例如，作為與對(duì)照的ADAM 的酶活性或基因表達(dá)水平相比較的結(jié)果，可指定發(fā)現(xiàn)降低ADAM的酶活性或基因表達(dá)水平的物質(zhì)作為具有抗皺紋效果的物質(zhì)(即抗皺紋物質(zhì)或皺紋防止或改善劑)。對(duì)根據(jù)本發(fā)明的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法的使用方式?jīng)]有任何限制。例如根據(jù)本發(fā)明的評(píng)價(jià)抗皺紋效果的方法可用于篩選和評(píng)價(jià)抗皺紋物質(zhì)等。本發(fā)明將通過(guò)下述非限制性實(shí)施例進(jìn)一步闡明。
實(shí)施例制備細(xì)微皺紋小鼠樽型認(rèn)為在多種主要因素如皮脂減少和洗臉削弱或破壞皮膚屏障及從皮膚表面的水蒸發(fā)增加的情況下，皮膚變干并形成細(xì)微皺紋。因此，在無(wú)毛小鼠的皮膚上反復(fù)剝離膠帶， 因而剝?nèi)ソ琴|(zhì)層并破壞皮膚屏障。以這種方式可制備細(xì)微皺紋小鼠模型。特別地，用玻璃紙膠帶通過(guò)調(diào)整剝離膠帶的次數(shù)以使經(jīng)皮的水分損失(TEWL)(通過(guò)利用由美國(guó)Meeco公司提供的水蒸發(fā)量測(cè)量裝置MEECO測(cè)量)可以落到％ig/cm2/h到6mg/Cm2/h的范圍內(nèi)，在無(wú)毛小鼠(HR-1，雄性，六周齡，由Hoshino Experimental Animals提供)背部左側(cè)的皮膚上剝離膠帶。通常，在起始階段重復(fù)大概四次剝離膠帶。在最后階段重復(fù)大概七到八次剝離膠帶。每周在三個(gè)階段剝離膠帶并持續(xù)四周。將無(wú)毛小鼠背部右側(cè)留作非處理區(qū)域。圖2A是顯示已經(jīng)受到上述方式剝離膠帶的小鼠皮膚的復(fù)制圖像。圖2B是顯示小鼠皮膚的皮膚組織切片的顯微攝影圖，其中小鼠皮膚組織切片已用HE (蘇木精-伊紅)染色。如復(fù)制形象圖(圖2A)所示，皮膚溝渠在開(kāi)始剝離膠帶后的M小時(shí)階段(Mh)和開(kāi)始剝離膠帶后的48小時(shí)階段(48h)變深。在開(kāi)始剝離膠帶后的一周(IW)階段，皮膚溝渠的方向與預(yù)定的方向相同。在開(kāi)始剝離膠帶后的四周GW)階段，皺紋狀的外表出現(xiàn)。另外， 如皮膚組織的顯微攝影圖(圖2B)所示，當(dāng)與非處理區(qū)域(NT)比較時(shí)發(fā)現(xiàn)表皮在開(kāi)始剝離膠帶后的M小時(shí)階段開(kāi)始肥厚。在開(kāi)始剝離膠帶后的兩周階段_表皮保持肥厚。下表 1顯示了已用上述方式制備的細(xì)微皺紋小鼠模型的形態(tài)學(xué)上的改變、組織學(xué)上的改變等，并顯示了已用紫外線輻射(10周)制備的光老化小鼠模型的形態(tài)學(xué)上的改變、組織學(xué)上的改變等。表1細(xì)微皺紋小鼠模型和光老化小鼠模型之間的比較
權(quán)利要求
1.鑒定抗皺紋物質(zhì)的方法，其包括以下步驟i)將受試物質(zhì)與人或動(dòng)物的皮膚、皮膚組織或細(xì)胞接觸；ii)檢測(cè)所述皮膚、皮膚組織或細(xì)胞中解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶的酶活性或基因表達(dá)水平；iii)通過(guò)使用解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶的酶活性或基因表達(dá)水平作為指標(biāo)，評(píng)價(jià)受試物質(zhì)的抗皺紋效果。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶選自解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶-9、解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶-10和解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶-17。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中使用表皮角質(zhì)形成細(xì)胞。
全文摘要
含有能夠抑制皮膚中存在的ADAM(解聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶)活性的物質(zhì)的皺紋防止劑或改善劑。通過(guò)將能夠抑制皮膚中存在的ADAM活性的物質(zhì)應(yīng)用于皮膚而防止或改善皺紋。用其中將皮膚、皮膚組織或細(xì)胞中的ADAM的酶活性或基因表達(dá)水平用作指標(biāo)的方法評(píng)價(jià)抗皺紋效果。
文檔編號(hào)G01N33/50GK102156189SQ201110071818
公開(kāi)日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2005年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月14日
發(fā)明者天野聰, 小倉(cāng)有紀(jì), 松永由紀(jì)子 申請(qǐng)人:株式會(huì)社資生堂