一種多重pcr同時(shí)檢測(cè)gstm1、gstt1、gstp1基因多態(tài)性的簡(jiǎn)易方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種多重PCR同時(shí)檢測(cè)GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多態(tài)性的簡(jiǎn)易方法，在GSTP1A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的擴(kuò)增引物，配成引物混合物后一起擴(kuò)增，擴(kuò)增后瓊脂糖凝膠電泳即可對(duì)3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分型。本發(fā)明中的有益效果為：對(duì)GSTP1A313G多態(tài)性的分型不需要內(nèi)切酶，分型所需時(shí)間更短、成本更低，且同時(shí)對(duì)GSTM1、GSTT1缺失多態(tài)性進(jìn)行了分型，進(jìn)一步較低了成本，縮短了檢測(cè)時(shí)間，不需要昂貴的設(shè)備，可以在普通實(shí)驗(yàn)室開展，具有較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】—種多重PCR同時(shí)檢測(cè)GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多態(tài)性的
簡(jiǎn)易方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于遺傳學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種多重PCR同時(shí)檢測(cè)GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多態(tài)性的簡(jiǎn)易方法。
【背景技術(shù)】
[0002]GSTMl 'GSTTl缺失多態(tài)性和GSTPl A313G (Ilel05Val)多態(tài)性是3個(gè)在遺傳學(xué)上研究得比較多的多態(tài)性位點(diǎn)。因?yàn)槎际枪入赘孰霓D(zhuǎn)移酶的功能性多態(tài)性位點(diǎn)，這3個(gè)多態(tài)性通常一起被研究。目前，對(duì)GSTMl,GSTTl缺失多態(tài)性的檢測(cè)通常使用多重PCR的方法，而對(duì)GSTPl A313G多態(tài)性的檢測(cè)通常使用酶切的方法，該方法需要昂貴的內(nèi)切酶對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行消化，然后再電泳分型，因此成本較高。有必要建立一種能在普通實(shí)驗(yàn)室開展的能同時(shí)對(duì)3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)的方法。
[0003]四引物擴(kuò)增抗拒突變體系PCR (tetraprimer amplification refractorymutation system polymerase chain reaction, TP-ARMS-PCR)是在等位基因特異性擴(kuò)增的基礎(chǔ)上建立的I次PCR反應(yīng)即可對(duì)SNP分型的技術(shù)。該技術(shù)用4條引物一次PCR擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳就可以區(qū)分SNP的3種基因型，不需要內(nèi)切酶，是一種可在單管中對(duì)SNP進(jìn)行快速測(cè)定的高效廉價(jià)方法。如果在GSTPl A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入GSTMl、GSTTl缺失多態(tài)性的引物一起擴(kuò)增，從而可以實(shí)現(xiàn)I次PCR反應(yīng)即可同時(shí)對(duì)3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分型。因?yàn)樵摲椒▽?duì)A313G多態(tài)性的分型不需要內(nèi)切酶，因此所需時(shí)間更短、成本更低，且同 時(shí)對(duì)6^#7、^777缺失多態(tài)性進(jìn)行了分型，進(jìn)一步較低了成本，縮短了檢測(cè)時(shí)間，有較好的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種多重PCR同時(shí)檢測(cè)α7￥7、α777、α7Ρ7基因多態(tài)性的簡(jiǎn)易方法，該簡(jiǎn)易方法可以對(duì)缺失多態(tài)性和A313G多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，從而降低成本，縮短檢測(cè)時(shí)間。
[0005]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，其特征是:在GSTPl A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的擴(kuò)增引物，配成引物混合物后一起擴(kuò)增，擴(kuò)增后瓊脂糖凝膠電泳即可對(duì)3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分型。
[0006]本發(fā)明所述3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的擴(kuò)增引物共計(jì)8條，各引物的核苷酸序列及其在反應(yīng)體系中的濃度、擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度見下表1:
表1 GSTPl A313G多態(tài)性和GSTMl、GSTTI缺失多態(tài)性多重PCR擴(kuò)增引物
【權(quán)利要求】
1.一種多重PCR同時(shí)檢測(cè)GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多態(tài)性的簡(jiǎn)易方法，其特征是:在GSTPl A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的擴(kuò)增引物，配成引物混合物后一起擴(kuò)增，擴(kuò)增后瓊脂糖凝膠電泳即可對(duì)3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種多重PCR同時(shí)檢測(cè)GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多態(tài)性的簡(jiǎn)易方法，其特征在于:所述3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的擴(kuò)增引物共計(jì)8條，各引物的核苷酸序列及其在反應(yīng)體系中的濃度、擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度見下表:
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103849685SQ201410054417
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2014年2月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月18日
【發(fā)明者】朱偉鋒, 鄧燕, 羅達(dá)亞, 范瑞琦, 揭克敏, 萬福生, 易敬林, 劉偉偉 申請(qǐng)人:南昌大學(xué)