專利名稱：微量滴定板的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及阱間的光學(xué)串?dāng)_減小的微量滴定板。本發(fā)明還涉及用于在使用光發(fā)射 或光透射的分析方法中使用的這種微量滴定板。
背景技術(shù)：
許多生物技術(shù)分析方法都利用通常稱為微量滴定板的多阱試樣板。每個(gè)阱中進(jìn)行 單獨(dú)的反應(yīng)，并且反應(yīng)的最終產(chǎn)物被用于解釋分析的結(jié)果。或者，反應(yīng)可被實(shí)時(shí)追蹤。這種分析方法可以在溶液中進(jìn)行，即，所有的反應(yīng)物都存在于溶液中。如果存在所 要被檢測的被分析物，則反應(yīng)物就會提供某種信號，諸如外觀或顏色上的變化、發(fā)光、渾濁 等等。一個(gè)示例是Pyrosequencing⑧分析法，它涉及在將核苷酸加入核酸鏈之后檢測酶級 聯(lián)體系發(fā)出的光。該分析方法還可以對阱的固相執(zhí)行，例如在所謂的夾心試驗(yàn)中，將對被分 析物有親和性的分子鍵合在阱的底部，添加可能含有被分析物的試樣，添加對被分析物有 親和性的標(biāo)記分子，洗去多余的標(biāo)記，并且可在添加顯影劑(developing agent)之后檢測 任何剩余的標(biāo)記。要被在諸如上述的方法中檢測的信號可以包括來自阱的光發(fā)射或是通過阱的光 透射。通常依靠各種光檢測手段來自動(dòng)檢測這種位于阱底部下面的光。所以，微量滴定板 有透明的底部，以使得能夠可以在從上面分配反應(yīng)物的同時(shí)，從下面實(shí)時(shí)地對光進(jìn)行檢測。 如果要測量阱的內(nèi)容物的顏色或渾濁，那么光可以從板上方的光源發(fā)出來。制造這種板的最方便、最經(jīng)濟(jì)的方法是由透明材料片通過例如真空成型或注射成 型來生產(chǎn)板。因此，整個(gè)板都是透明的。但是，這種透明塑料能夠把光從一個(gè)阱導(dǎo)向另一個(gè) 阱。這種現(xiàn)象是光的內(nèi)反射和透射導(dǎo)致的，并且結(jié)果導(dǎo)致來自不應(yīng)產(chǎn)生光信號的阱的錯(cuò)誤 的信號。這樣的結(jié)果是錯(cuò)誤的結(jié)果。因此，應(yīng)避免這種反射和透射。WO 94/21379公開一種構(gòu)造，其中阱壁在內(nèi)側(cè)和/或外側(cè)涂布了諸如金屬、陶瓷或 半導(dǎo)體等的反射材料?；蛘?，板由反射材料制成，或?qū)⑼该鞯奈⒘康味ò宸胖迷诜瓷浒鍍?nèi) 部。但是，這些構(gòu)造的制造較昂貴。而且當(dāng)使用這種涂布技術(shù)時(shí)，存在涂布到阱的底表面的 風(fēng)險(xiǎn)。此外，對內(nèi)側(cè)的涂布可能會影響阱內(nèi)的想要的生物/化學(xué)處理。所述文獻(xiàn)還記載了 使用顏料來對塑料染色，從而減少透射率或反射率也是已知的。如果需要透明的底部，則這 些解決方案將增加制造成本，因?yàn)樾枰脙煞N不同材料形成板。US 6，051，191提供一種微量滴定板，其利用包含兩種不同的聚合物的構(gòu)造來減少 串?dāng)_。阱由透明聚合物制成，該透明聚合物置于不透明聚合物的基質(zhì)中。不透明聚合物覆蓋 了阱的壁的外側(cè)以及所述阱之間的頂部表面，從而留下具有透明底部和不透明壁的阱。雖 然此微量滴定板減少了阱間的串?dāng)_，但是它還需要復(fù)雜的多步生產(chǎn)工藝，這造成生產(chǎn)成本尚昂。上述微量滴定板都可用于基于光的分析方法。但是，仍存在著對于容易制造、便宜 且在用于基于光檢測或測量的分析方法時(shí)仍能減少光的透射和/或反射的微量滴定板的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種方便實(shí)時(shí)測量且光學(xué)串?dāng)_減少的微量滴定板 (microtitre plate)構(gòu)造。微量滴定板的制造成本應(yīng)足夠低，以使其可用完即棄。本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了一種微量滴定板，包括具有透明底部的阱，其中所述 的微量滴定板在至少二個(gè)相鄰的阱之間具有至少一個(gè)物理形變。該物理形變可具有溝道、 突脊、孔、狹縫或者臺階的形狀。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，相鄰阱之間的每個(gè)表面都具有至少一個(gè)物理形變。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，物理形變可以以任何幾何圖案圍繞阱。這可以以例如網(wǎng) 格、或圓、或方塊的形式實(shí)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板適用于測量發(fā)光或透光的分析方法，諸如化學(xué)發(fā)光、生 物發(fā)光、測光法(photometry)和/或熒光。本發(fā)明提供一種微量滴定板，其包括具有透明底部的阱，其允許實(shí)時(shí)測量，包括在 測量期間同時(shí)添加反應(yīng)物。通過阱間的物理形變實(shí)現(xiàn)了串?dāng)_的減少。該微量滴定板可以通 過常規(guī)處理技術(shù)一體成形，這意味著簡單的制造工藝和低的生產(chǎn)成本。


圖1顯示了現(xiàn)有技術(shù)中已知的一種微量滴定板，(a)是俯視圖，(b)是截面圖。虛 線箭頭表示阱的分布。圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板的截面圖，其具有不同的物理形變，和形變 的不同組合。圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板的截面圖，包括具有孔或狹縫、或者孔或狹 縫與突脊組合的構(gòu)造。虛線表示孔或狹縫。圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板的俯視圖，包括圍繞阱的物理形變。陰影的 區(qū)域表示物理形變。圖5顯示了根據(jù)實(shí)施例1的兩個(gè)微量滴定板。板1在阱間具有溝道，而板2沒有。圖6顯示了根據(jù)實(shí)施例2的微量滴定板。圖7顯示了根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板，a)是俯視圖，b)是截面圖(Y-Y)，c)是截 面圖(X-X)，d)是透視圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的微量滴定板可具有如圖1所示的傳統(tǒng)的微量滴定板的通常結(jié)構(gòu)。微量滴 定板通常是矩形的塑料多阱板，但也可以是其它的大小或形狀。為方便實(shí)時(shí)測量，阱需要有 一個(gè)透明的底部以允許光通過用于檢測。從上面的檢測也是可能的。由于發(fā)出的光/透射 的光在所有方向上傳播，所以光經(jīng)由塑料材料被透射和/或反射到相鄰的阱中，導(dǎo)致不正 確的檢測。為了獲得精確的測量結(jié)果，必須減少此“串?dāng)_”。根據(jù)圖1，將微量滴定板的上表面標(biāo)記為1，并且其指的是整個(gè)表面；用附圖標(biāo)記 Ia或Ib表示兩個(gè)相鄰阱14之間的表面。Ia是較高的上表面，Ib是較低的上表面。這些附 圖標(biāo)記將在下文描述本發(fā)明時(shí)使用。使用用于微量滴定板的這種傳統(tǒng)結(jié)構(gòu)作為根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板的基礎(chǔ)。圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板的一個(gè)實(shí)施方式，包括用于上表面Ia和Ib 的不同物理形變?？梢栽谌我槐砻嫔闲纬梢粋€(gè)或多個(gè)溝道12或突脊13。溝道可在同一點(diǎn) 形成在兩個(gè)表面上，從而減少了材料的厚度。而且，物理形變可只位于一側(cè)。圖2a_e所示 的物理形變的任何組合都是可能的。圖3顯示了下述實(shí)施方式，其中在阱14之間的頂表面上的一個(gè)或多個(gè)孔或狹縫15 用來減少板內(nèi)的光的透射。虛線表示孔或狹縫。所述孔或狹縫減少了阱14間的串?dāng)_，但其 顯然并不完全包圍阱14。圖3還顯示了孔或狹縫15與突脊13的組合。圖4a_d顯示了圍繞阱14的物理形變的幾何圖案，陰影區(qū)域16表示物理形變。連 續(xù)圖案和非連續(xù)圖案都是可能的。物理形變的形狀、高度或深度及其圍繞阱的幾何圖案并不是關(guān)鍵的，只要該形變 能減少串?dāng)_即可。在物理形變是溝道或突脊的形狀的情況下，適合地，突脊的高度或溝道的 深度是用來制造微量滴定板的塑料材料厚度的0. 1 10倍，優(yōu)選為0. 5 10倍，最優(yōu)選是 塑料材料厚度的2 6倍。通常，塑料材料約0. 5mm厚。物理形變可以在通過使用具有期望的結(jié)構(gòu)的模具制造微量滴定板的制造工藝中 形成。優(yōu)選地，微量滴定板通過真空成型一體成形?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他適 合的制造技術(shù)，例如注射成型或壓縮成型。根據(jù)本發(fā)明的微量滴定板能夠適用于依賴于光檢測的分析方法，其測量以不同波 長從微量滴定板的阱中發(fā)出的光或者通過阱透射的光?？梢詮陌宓纳戏交蛳路綑z測光。能 夠分析不同的發(fā)光現(xiàn)象，例如生物發(fā)光、化學(xué)發(fā)光、測光法和熒光。本發(fā)明也適用于邊合成 邊測序方法(sequenceing-by-synthesis)。實(shí)例實(shí)例1阱之間形成溝道。這個(gè)溝道阻止通過塑料引導(dǎo)的任何光的大部分進(jìn)入相鄰的阱。由相同的塑料制成兩個(gè)板。如圖5所示，板1在阱間具有溝道12，而板2沒有。阱B6至B8中填充有用于執(zhí)行Pyroscquencing 反應(yīng)的20微升(μ 1)退火緩沖 物。向阱Β7加入用于執(zhí)行Pyroscquencing 分析的酶和基質(zhì)。焦磷酸鹽分配到B7中的 分配物2中，以給出高信號。將水分配入B6和B8中，它們不應(yīng)給出信號。這樣，只有阱B7 中的分配物2應(yīng)產(chǎn)生信號。B6和B8用于測量串?dāng)_。阱中的分配物記載在下表中。
權(quán)利要求
一種微量滴定板，包括具有透明底部的阱，其中所述微量滴定板在至少兩個(gè)相鄰阱之間包括至少一個(gè)物理形變。
2.如權(quán)利要求1所述的微量滴定板，其中所述物理形變具有溝道、突脊、孔、狹縫或臺 階的形狀。
3.如權(quán)利要求1或2所述的微量滴定板，其中所述物理形變具有溝道的形狀。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的微量滴定板，其中所述物理形變以任意幾何圖案圍繞阱。
5.如權(quán)利要求4所述的微量滴定板，其中所述物理形變以圓、網(wǎng)格或方塊的形式圍繞阱。
6.如前述任一權(quán)利要求所述的微量滴定板，其中所述微量滴定板一體成形。
7.如權(quán)利要求6所述的微量滴定板，其中所述微量滴定板通過真空成型制成。
8.如權(quán)利要求1-7任一所述的微量滴定板，用于在測量射入或透射通過所述微量滴定 板的阱的光的分析方法中使用。
9.如權(quán)利要求8所述的微量滴定板，其中所述分析方法利用測光法、化學(xué)發(fā)光、生物發(fā) 光和/或熒光。
10.如權(quán)利要求8所述的微量滴定板，其中所述分析方法是邊合成邊測序方法。全文摘要
本發(fā)明涉及一種微量滴定板，該微量滴定板包括具有透明底部的阱，其中所述微量滴定板在至少兩個(gè)相鄰阱之間具有至少一個(gè)物理形變。所述物理形變可具有例如溝道、突脊、孔、狹縫或臺階的形狀。
文檔編號B01L3/00GK101970113SQ200980105995
公開日2011年2月9日 申請日期2009年2月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月22日
發(fā)明者大衛(wèi)·史密斯, 彼德·海格里德 申請人:凱杰器械有限公司